吳煜 林益淵 王瓊 楊金招 熊建華

4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸是植物中普遍存在的一種功能性酚酸類物質(zhì)，也被稱為阿魏酸，是川芎、升麻、當(dāng)歸等常用藥物中的主要功能成分之一［1-3］。有研究發(fā)現(xiàn)，中草藥長期或短期應(yīng)用均會影響機(jī)體較多內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的功能［3］，如銀杏內(nèi)酯A會影響PXR的表達(dá)、貫葉金絲桃會影響CYP3A4的活性。PXR在調(diào)節(jié)藥物代謝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相酶的活性及表達(dá)水平有著重要的作用。氯沙坦是心血管系統(tǒng)疾病治療常用藥物［4-5］。阿魏酸被現(xiàn)代藥理證實(shí)具有免疫調(diào)節(jié)、抗癌、抗菌消炎、抗血栓、抗氧化等作用［6］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)阿魏酸長期使用會對氯沙坦鉀的藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生影響［7］。本文探討阿魏酸對大鼠體內(nèi)氯沙坦鉀的藥代動(dòng)力學(xué)影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品及儀器（1）實(shí)驗(yàn)藥品：阿魏酸由北京百靈威科技有限公司提供，藥品編號為408508，純度為99%。氯沙坦鉀片由杭州默沙東制藥有限公司提供，國藥準(zhǔn)字號為H20000371，規(guī)格50mg/片*7片。羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）由中國藥品生物制品檢定所提供，批次為315824。（2）實(shí)驗(yàn)儀器：①超高效液相色譜儀：美國Waters公司生產(chǎn)，型號為ACQUITYI-Class；②三重四級桿質(zhì)譜儀：美國Waters公司生產(chǎn)，型號為XevoTQD。

1.2 實(shí)驗(yàn)大鼠采用SD大鼠，共24只，8周齡，均為雄性，體質(zhì)量為284~328g，平均（301.28±15.85）g。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法按照隨機(jī)數(shù)字法將24只雄性SD大鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組12只。對照組：每天上午8點(diǎn)灌胃0.5%CMC-Na，灌服劑量為10ml/kg，30min后灌服氯沙坦鉀混懸液，灌服劑量為5mg/（kg·d），連續(xù)灌服7d。實(shí)驗(yàn)組：每天上午8點(diǎn)灌胃阿魏酸混懸液，灌服劑量為50mg/（kg·d），30min后灌服氯沙坦鉀混懸液，灌服劑量為5mg/（kg·d），連續(xù)灌服7d。分別于灌服前及灌服后20min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min、24h采集SD大鼠的尾靜脈血0.3ml，并置于EP管中（含有肝素抗凝），進(jìn)行離心處理，離心條件為（13000r/min，離心10min），采集上清液，并在-80℃中保存，后進(jìn)行統(tǒng)一測定。

1.4 測定方法采用超高效液相色譜-四極桿超高分辨質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測各樣本中的氯沙坦?jié)舛人?，具體操作方法：（1）開機(jī)，啟動(dòng)設(shè)備，進(jìn)入儀器控制面板，設(shè)置所需的各項(xiàng)相關(guān)參數(shù)，其中質(zhì)譜儀部分參數(shù)設(shè)置如下：ES+、源溫度設(shè)置為150℃、毛細(xì)管電壓設(shè)置為3.5kV、去溶劑化溫度設(shè)置為400℃、去溶劑化氣體（氮?dú)猓┝魉贋?000L/h、錐孔氣體（氮?dú)猓┝魉贋?0L/h；色譜儀部分參數(shù)設(shè)置如下：每分鐘流量控制為0.4ml/min，色譜柱溫度設(shè)置為35℃，進(jìn)樣量設(shè)為2μl。（2）設(shè)置分析用流動(dòng)相清洗流路，等待色譜柱、系統(tǒng)的平衡，基線穩(wěn)定，開始進(jìn)樣分析。其中色譜柱為BEHC18的色譜柱（規(guī)格為2.1mm×50mm，1.7μm），流動(dòng)相為美國Merk公司提供的乙腈（A）-0.1%的甲酸（B）。檢測時(shí)長為2min，分別為0~0.3min，55%A；0.3~0.5min，55%~90%A；0.5~1.2min，90%A；1.2~1.7min，90%~55%A；1.7~2.0min，55%A。將替米沙坦（上海玉博生物科技有限公司，產(chǎn)品編號：S201587，純度>98%）作為內(nèi)標(biāo)。分析結(jié)束，數(shù)據(jù)處理。

1.5 分析方法驗(yàn)證將替米沙坦（Telmisartan）作為內(nèi)標(biāo)，氯沙坦（Losartan）在超高效液相色譜-四極桿超高分辨質(zhì)譜聯(lián)用儀的相關(guān)檢測條件下，其出峰時(shí)間分別為0.62min，0.84min。見圖1。

圖1 Telmisartan與Losartan高效液相色譜圖

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法血藥濃度按照非房室模型依賴性參數(shù)的方法，采用DAS3.0軟件進(jìn)行計(jì)算。采用SPSS21.0版對藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述，計(jì)量資料以（±s）表示，用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組SD大鼠不同時(shí)間的平均血藥濃度分布情況 實(shí)驗(yàn)組灌服后20min、30min、45min、60min的氯沙坦血藥濃度與對照組較為接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min氯沙坦血藥濃度高于對照組（P<0.05）。灌服后24h時(shí)間段內(nèi)，兩組氯沙坦血藥濃度差距逐漸縮小。見圖2。

圖2 兩組SD大鼠不同時(shí)間的平均血藥濃度分布情況

2.2兩組SD大鼠藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較實(shí)驗(yàn)組T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組CL/F、Cmax高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組Tmax比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 兩組SD大鼠藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較（±s）

表1 兩組SD大鼠藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較（±s）

組別 n T1/2（h） CL/F［L/（h·kg）］ AUC（0-t）［ng/（ml·h）］ AUC（0-∞）［ng/（ml·h）］ Cmax（ng/ml） Tmax（h）實(shí)驗(yàn)組 12 1.48±0.21 2186.89±131.54 2174.05±135.62 2021.62±132.65 832.63±92.36 0.57±0.22對照組 12 1.80±0.52 2024.58±254.36 2398.08±248.62 2342.25±256.38 702.65±65.82 0.64±0.18 t值 2.685 2.028 3.125 3.524 2.952 1.852 P值 0.038 0.049 0.018 0.012 0.031 0.053

3 討論

本資料對SD大鼠進(jìn)行阿魏酸聯(lián)合氯沙坦灌服，其中阿魏酸普通人群常規(guī)用量為100~400mg/d（注射液），100~200mg/d（片劑）。氯沙坦普通人群常規(guī)使用劑量為50mg/d，根據(jù)等效劑量換算原則，計(jì)算SD大鼠使用的阿魏酸的灌服劑量為50mg/（kg·d），氯沙坦的灌服劑量為5mg/（kg·d），但由于阿魏酸在水中的溶解度不高，且對光敏感，為此本研究通過以羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）為溶媒，制成阿魏酸混懸液進(jìn)行灌注。實(shí)驗(yàn)組灌服后的20min、30min、45min、60min的氯沙坦血藥濃度與對照組較為接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min的氯沙坦血藥濃度高于對照組。灌服后24h時(shí)內(nèi)，兩組氯沙坦血藥濃度差距逐漸縮小。實(shí)驗(yàn)組T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組CL/F、Cmax高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組Tmax對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表明阿魏酸會改變氯沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)特征。推測其原因：（1）CYP3A4和（或）CYP2C9是氯沙坦主要代謝酶。有研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體代謝氯沙坦的主要酶類為CYP450酶系，口服氯沙坦后會經(jīng)CYP450酶系中的CYP3A4和（或）CYP2C9進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，并有接近14%的氯沙坦被代謝為氯沙坦羧酸（E-3174），后者是發(fā)揮相應(yīng)生理作用的活性物質(zhì)［8］。有研究［9］發(fā)現(xiàn)阿魏酸灌服后會引起增加CYP2C9、CYP3A4的啟動(dòng)子的活性，氯沙坦代謝加快。提示臨床上在聯(lián)合使用阿魏酸及氯沙坦時(shí)，需考慮兩者間的相互作用，從而盡可能避免藥物間的相互作用所帶來的安全性問題，提高治療效果。（2）口服氯沙坦吸收。有研究［10］證實(shí)阿魏酸對機(jī)體有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性有明顯抑制作用，會影響部分藥物的吸收，但具體機(jī)制仍不明確。而氯沙坦口服后，其吸收效果是否受阿魏酸的影響，目前仍未有相關(guān)的研究證實(shí)。本資料中實(shí)驗(yàn)組和對照組在灌服后60min內(nèi)氯沙坦平均血藥濃度較為相似，提示阿魏酸對氯沙坦口服吸收影響不明顯。

綜上所述，阿魏酸聯(lián)合氯沙坦使用，氯沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)改變更多是有由于阿魏酸增加了CYP2C9、CYP3A4等酶類的活性，而不是通過影響氯沙坦的口服吸收導(dǎo)致。