吳 琛

深圳市計量質(zhì)量檢測研究院 廣東 深圳 518131

作為一種蔗糖衍生物,三氯蔗糖是經(jīng)過對蔗糖的鹵化之后形成的,拌入蔗糖,其化學(xué)名為三氯。其甜度達(dá)到了蔗糖的800倍,無吸濕性和臭味,形狀為白色粉末。

目前在強力甜味劑上,三氯蔗糖被人們認(rèn)為是功能性甜味劑之一,無論是在每日歐盟等發(fā)達(dá)國家被確認(rèn)安全性,同時經(jīng)過加拿大的率先批準(zhǔn),當(dāng)前在參用甜味劑中廣泛使用。我國也是在1997年正式將三氯蔗糖作為食品添加劑納入到食品使用范疇內(nèi),而且經(jīng)過對食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定,在線量和使用范圍上對三氯蔗糖進(jìn)行了詳細(xì)的劃定。經(jīng)過研究表明,依據(jù)我國相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn),運用高效液相色譜蒸發(fā)光檢測器法,對三氯蔗糖進(jìn)行分析。另外還有離子色譜法、毛細(xì)管電泳法、化學(xué)滴定法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等等。經(jīng)過檢測,最終集中在示差檢測器和高效液相蒸發(fā)光散射檢測器的檢驗。這兩種檢驗各有特點,在日常監(jiān)督檢測過程中都較為適用。

一、實驗與方法

1.1 實驗儀器與試劑,采用的是高效液相示差檢測器等,還有離心劑氮吹儀,檢測的三氯蔗糖純度為99%。經(jīng)過實驗用水的超純水的過濾,采用水系列濾膜以及中性氧化鋁、亞鐵氰化鉀等。

1.2 實驗方法

首先在容器中加入三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)樣件,50mg的燒杯中放置0.1g的三氯蔗糖,加入適量水之后溶解,稀釋到刻度搖勻,再轉(zhuǎn)移到10mg的容量器皿中,使用乙酸鋅溶液和亞鐵氯化鉀溶液,將樣品進(jìn)行混勻,超聲溶解,放置到室溫定量轉(zhuǎn)移到100mg的容量瓶中,再取乙酸鋅25克,放置在250mg的燒杯中加入3毫升的乙酸之后加水稀釋刻度,搖勻,進(jìn)行樣品的制備,漩渦混合兩分鐘,加入1克中性氧化鋁,精密稱取五克,樣品放置在50mg離心管中,果凍樣品用80℃攝氏度水進(jìn)行融化,下層80℃水浴中用氮氣進(jìn)行氣吹放置,室溫轉(zhuǎn)移到上清液達(dá)到50mg,離心管中再加入5mg的正乙烷,抽干純化之后,利用固相萃取柱進(jìn)行搖勻,用水容量達(dá)到5mg,放至室溫再加入一毫升的10%已經(jīng)溶解,殘渣在80℃水浴中,經(jīng)過甲醇洗脫,在進(jìn)行氮氣的吹干過濾,使用0.45μm 的濾膜進(jìn)行樣品溶液的獲取。儀器的條件,包括了高效液相色譜示差檢測器,高相液相色譜蒸發(fā)光檢測儀。在進(jìn)行檢測池的溫度設(shè)定時,使用等度洗脫進(jìn)樣量的設(shè)置等方法,最終得到了液相色譜梯度洗脫程序,包含了30%的進(jìn)樣量,霧化器溫度為30℃,柱溫為30℃,蒸發(fā)光散射檢測儀儀器條件,以及蒸發(fā)式溫度流量等均進(jìn)行了設(shè)置。

二、結(jié)果和分析

2.1 經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)對上述參數(shù)進(jìn)行檢測非常必要,示差檢測器在參比流露間液體折光指數(shù)差值的檢測器中進(jìn)行連續(xù)的樣品流入檢測,流動相可用于梯度先脫,當(dāng)蒸發(fā)溫度設(shè)置為80℃時,在加熱的蒸發(fā)光檢測器,進(jìn)行了容器的蒸發(fā),將助洗脫液進(jìn)行霧化形成氣溶膠,流動性可用于梯度洗脫。在重復(fù)性是差檢測器中進(jìn)行蒸發(fā),光檢測器的物化和蒸發(fā)檢出現(xiàn)水平達(dá)到了10mg/L,蒸發(fā)溫度設(shè)為100℃的時候,蒸發(fā)光檢測器的蒸發(fā)和物化屬于關(guān)鍵部分,優(yōu)化參數(shù)之后蒸發(fā)溫度達(dá)到80℃,檢出限水平為2mg/L,能夠滿足檢測要求[1]。

樣品經(jīng)過前處理條件優(yōu)化之后,直接選用固相萃取小柱進(jìn)行凈化,包括食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)在內(nèi)的相關(guān)規(guī)定予以參照依據(jù)。添加三氯蔗糖的食品中包含了液體半固體固體,液體食品有飲料醋乳制品配制酒,半固體食品有腐乳、沙拉醬、蛋黃醬、果凍、果醬等。固體食品有冷凍飲品、焙烤食品、方便米面食品,蔬菜、水果、干制品等。提取后將提取液揮發(fā)到5mg以下,直接采用固相萃取小柱進(jìn)行凈化。如果發(fā)現(xiàn)有含有脂肪和蛋白的樣品,則要先將脂肪和蛋白予以剔除。上述步驟經(jīng)過不斷的重復(fù),并根據(jù)食品機制的不同,在進(jìn)行食品的配置和調(diào)取的時候,將提取液進(jìn)行五毫升以下的揮發(fā),并進(jìn)行固相萃取,小柱的凈化,提取溶液的選擇,在機制的差別上需要注意。

三氯蔗糖線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

對于甲醇乙醇以及不同比例的固體和半固體樣品進(jìn)行提取,出不去除蛋白質(zhì)之后,加入五毫升的水進(jìn)行充分浸潤。先加入溫水之后,充分溶解,在進(jìn)行三氯蔗糖的 多類食品的提取。由于水有良好的浸潤性,因此加入甲醇之后能夠?qū)崿F(xiàn)充分的提取,而且可以提升甲醇乙醇以及不同比例的甲醇對固體和半固體樣品的提取效率。除去蛋白方法之后,分別比較了亞鐵氫化鉀溶液和乙酸鋅溶液,發(fā)現(xiàn)增加了沉淀物質(zhì),例如調(diào)味乳,中間經(jīng)過50mg/L的增量,發(fā)現(xiàn)采用蛋白沉淀實驗的方法,離心后傾倒比較方便[2]。

實驗結(jié)果表明,不同體積的平均回收率可以達(dá)到從90%到93%不等。加入一毫升能夠使沉淀成結(jié)石,0.5mg則可使沉淀試劑沉淀,而且在后續(xù)操作上比較松散。因此綜合考慮,應(yīng)該進(jìn)行乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液的一毫升選取。

2.2 在進(jìn)行脂肪去除方法的選擇上,比較了石油醚和正乙烷等兩種添加劑。脂肪含量高的樣品,如果不進(jìn)行去除,進(jìn)行固相萃取時,流速較慢,而三氯蔗糖的提取回收率則不受此影響,因此采用正乙烷進(jìn)行脂肪的去除是非常好的。

2.3 凈化條件優(yōu)化之后,淋洗液的選擇是固相萃取技術(shù)的關(guān)鍵。淋洗液的選擇原則是將雜質(zhì)予以去除,并且目標(biāo)應(yīng)吸附在固相萃取液上,目標(biāo)物的回收率以及洗脫液的選擇應(yīng)該按照儀器條件進(jìn)行測定,發(fā)現(xiàn)淋洗液中有少量的目標(biāo)物,例如五毫升水中有5mg的10%甲醇,要進(jìn)行甲醇的洗脫,達(dá)到6mg時,目標(biāo)物的洗脫率應(yīng)接近100%[3]。

2.4 方法的線性范圍以及解除限峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,滿足樣品定量分析的需求,三氯蔗糖被配置成20、40、100到400mg/L的系列溶液,分別使用兩種檢測器進(jìn)行樣品的檢測,定量分析之后,得到了檢出限以及定量線數(shù)值,回收率和精密度實驗對于可知示差檢測器的低濃度點的回收率和蒸發(fā)光檢測器的回收率進(jìn)行結(jié)果的比較,發(fā)現(xiàn)平均測定6個樣品之后,對加標(biāo)回收率進(jìn)行計算,最終得到的蒸發(fā)光檢測器測定的數(shù)值是比較明顯的。

實際樣品經(jīng)過測定,例如冰淇淋、調(diào)味品、乳制品等,根據(jù)實際樣品測定的方法,結(jié)果令人滿意。

結(jié)語

對各類食品中的三氯蔗糖準(zhǔn)確定量進(jìn)行測試,采用機制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量,運用蒸發(fā)光散檢測器進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)樣品機制較為復(fù)雜,因此建議采用蒸發(fā)光散射檢測器,比示差檢測器的重復(fù)性要高。因此對于三氯蔗糖含量較高的樣品應(yīng)較多使用示差檢測器更好。