韓鵬宇,鄭慧芳,畢秀欣,孫殿興

1 冠狀病毒簡介

冠狀病毒(Coronavirus ，CoVs)在系統(tǒng)分類上屬冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬，因其外包膜突起顆粒形似冠狀而得名。CoV基因組是單股正鏈RNA(+ssRNA)，大小約為27～32 kb，序列長度在所有RNA病毒基因組中排名第2。相比其它RNA病毒，之所以CoV具有較大基因組，主要與其復(fù)制保真度有關(guān)，而龐大的基因組又進(jìn)一步促進(jìn)了CoV獲取額外的基因，用來編碼輔助蛋白，從而適應(yīng)特定宿主[1]。因此，重組、基因交換和基因插入或刪除引起的基因組變化在CoVs中很常見。由于下一代測序技術(shù)的廣泛應(yīng)用，新的CoV正在不斷被發(fā)現(xiàn)，病毒亞系也在迅速擴(kuò)展。根據(jù)最新的國際病毒分類委員會(ICTV)分類，CoV共有4個屬(α, β, γ, δ)，由亞系的38個獨(dú)特物種組成[2]。因為目前仍然有許多未分類的CoVs, 未來CoVs的物種數(shù)量還將繼續(xù)增加[3-4]。CoVs 會導(dǎo)致家畜，野生動物和人類患病，其中α和β 屬CoVs主要感染哺乳類動物，γ和δ屬CoV主要感染鳥類[5]。

SARS冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome-corona virus,SARS-CoV)起源于中國，然后蔓延到世界其它地區(qū)，在2002-2003年大流行期間感染了大約8 000人，總病死率為10%。MERS冠狀病毒(Middle East Respiratory Syndrome- corona virus，MERS-CoV)自2012年在中東出現(xiàn)以來，傳播到27個國家，導(dǎo)致2 249例實(shí)驗室確診病例，平均病死率為35.5%(截至2018年9月)[6]。除上述兩種CoV外，α-CoVs 229E，NL63，β-CoVs OC43 和HKU1 也可引起較輕微的人類呼吸道疾病[7]。此外，CoVs在家畜和野生動物中也可引起疾病大流行[8-9]。豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒(swine acute diarrhea syndrome corona virus, SADS-CoV)最近被確定為引發(fā)2016年廣東省清遠(yuǎn)市豬群致死性腹瀉疫情的病因，該疫情導(dǎo)致2萬多頭仔豬死亡[8]。分別屬于α-CoV 和豬δ- CoV(PDCoV)的流行性豬腹瀉病毒(PEDV)和傳染性胃腸炎病毒(TGEV)是對食品產(chǎn)業(yè)沖擊較大的新發(fā)和再發(fā)病毒，此外，冠狀病毒也與水貂的胃腸炎(MCoV)和鯨魚死亡(BWCoV-SW1)有關(guān)[9]。

2 SARS疫情

2.1疫情概況 SARS于2002年底首次出現(xiàn)于中國廣東省，導(dǎo)致一種新型臨床重癥疾病(“非典型肺炎”)，其特征是發(fā)熱、頭痛及隨后出現(xiàn)的呼吸道癥狀，包括咳嗽、呼吸困難和肺炎。SARS在人類中快速傳播，迅速蔓延至中國香港及其他省份，隨后蔓延至其他28個國家[13-14]。截止2003年7月，全球范圍內(nèi)共報道8 069例SARS確診病例，波及29個國家，其中死亡病例774例(9.6%)。2004年又新增4例病例，并未出現(xiàn)死亡病例和傳播擴(kuò)散[15]。

2.2基因結(jié)構(gòu)分析 冠狀病毒基因組在5′至3′的特征基因順序方向上有6～7個主要開放閱讀框(ORF)。其中，ORF1a和1b，約占CoV基因組的三分之二，負(fù)責(zé)編碼非結(jié)構(gòu)多蛋白；下游4個ORF編碼結(jié)構(gòu)蛋白：spike蛋白(S)、envelope蛋白(E)、membrane蛋白(M)和nucleocapsid蛋白(N)。有些冠狀病毒在ORF1b和S之間具有血凝素-酯酶(HE)基因。冠狀病毒除保守基因序列外，SARS-CoV基因組還包含許多特定的附屬基因，包括ORF3a、3b，ORF6、ORF7a、7b，ORF8a、8b和9b[16-18]。

相比SARS，MERS-CoV 編碼5種獨(dú)特的附屬基因：ORF3、ORF4a、ORF4b、ORF5和ORF8b。在發(fā)現(xiàn)MERS-CoV時，上述附屬基因均未被證明與其他已知的冠狀病毒基因相關(guān)。MERS-CoV中7個保守復(fù)制酶序列的氨基酸(aa)特征與先前發(fā)現(xiàn)的兩種蝙蝠冠狀病毒：BtCoV-HKU4和BtCoV-HKU5相似。根據(jù)國際病毒分類委員會(ICTV)的分類標(biāo)準(zhǔn)，SARS-CoV和MERS-CoV代表了β病毒屬中2種新的冠狀病毒物種。β冠狀病毒的成員被分成4個譜系，A、B、C和D。SARS-CoV和MERS-CoV分別聚集在譜系B和C[19-21]。

2.3 宿主

2.3.1最初猜測 流行病學(xué)調(diào)查顯示，2002-2003年“非典”早期病例和2004年出現(xiàn)的4例病例均有動物接觸史。分子生物學(xué)檢測和病毒分離研究顯示，引起“非典”流行的SARS-CoV可能源于在農(nóng)貿(mào)市場中交易的果子貍，而后續(xù)對果子貍的大規(guī)模撲殺也使得“非典”疫情逐漸得到控制，似乎也間接印證了果子貍是非典疫情的源頭。

2.3.2后續(xù)追蹤調(diào)查 由于早期SARS病例為在餐館工作并接觸野生動物的工作人員，所以先期的調(diào)查重點(diǎn)為市場銷售的野生動物。研究人員調(diào)查了深圳一家動物市場，被抽查的動物包括7種野生動物和1種家養(yǎng)動物，它們來自中國南方的不同地區(qū)，在到達(dá)市場之前一直存放在單獨(dú)的倉庫里，這些動物在市場里停留了一段時間，每個攤主只售賣幾只特定物種的動物，研究者對市場內(nèi)不同攤位的動物進(jìn)行了取樣，收集鼻腔和糞便樣本，其中，從果子貍的鼻拭子中分離的兩個病毒(SZ3和SZ16)被完全測序，其全長基因組序列與人類SARS-CoV有99.8%的同源性。通過對比動物SL-CoV(SARS-like CoV)病毒與人類SARS-CoV的S基因發(fā)現(xiàn)，動物病毒與人類病毒分屬不同譜系。完整基因組比較發(fā)現(xiàn)，相比于動物，人類SCoV的N基因上有29nt的刪除，刪除點(diǎn)位于N基因起始密碼子上游246 nt。動物病毒中額外的29nt序列導(dǎo)致開放閱讀框ORF10和11融合為編碼122個氨基酸的新ORF。4種動物SLCoVs和11種人類SARS-CoVs的S基因序列擁有38種核苷酸多態(tài)性，其中26種為非同義變化。4種動物SLCoVs之間的S基因有8個核苷酸差異，而11種人類病毒之間存在20個核苷酸差異。因此，動物SLCoVs雖然是從一個市場分離的，但卻與從香港、廣東、加拿大和越南分離的人類病毒具備相似的多樣性[22]。

在2004年1月果子貍撲殺開始前，研究者在廣州市新源動物交易市場的18家供應(yīng)商中，隨機(jī)挑選出91只果子貍(Paguma larvata)和15只浣熊狗(Nyctereutes procyonoides)進(jìn)行采樣，通過對樣本N基因和P基因的實(shí)時熒光定量PCR和巢式RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，所有樣本SL-CoV呈陽性反應(yīng)[24]。此外，與前期研究相同的是，在人類SARS-CoV中刪除的29nt序列在此次所有動物樣本中均可檢測到。為了追蹤SL-CoV病毒的地理來源，研究者從市場銷售商聲稱的動物交易來源省份抽取了1 107只果子貍進(jìn)行檢測。這些來源省市包括安徽、北京、福建、廣西、河南、河北、湖北、湖南、江蘇、江西、山西和陜西。然而，2004年1月至9月期間，采用同種方法，在以上地區(qū)采集的1 107個果子貍SL-CoV檢測卻均呈陰性[23]。新源動物市場銷售的動物種類多，包括活驢、小牛、山羊、綿羊、小豬、美國水貂、浣熊狗、養(yǎng)殖狐貍、豬獾、豪豬、貍獺、豚鼠、兔子和鳥類。對果子貍(2003年和2004年)和人類患者(2004年)病毒的5個主要編碼序列(ORF1ab、S、E、M和N)進(jìn)行突變率分析表明，SARS-CoV和SL-CoV在人類和果子貍中以相對恒定的速率進(jìn)化[24]。

當(dāng)時，研究者懷疑，果子貍、浣熊狗和雪貂都是被一種迄今仍不為人知的動物宿主所感染，而由于中國南方的烹飪習(xí)俗，城市中銷售的野生動物很可能通過中間宿主傳染人類。

2.3.3跨物種傳播屏障 隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)是SARS-CoV進(jìn)入細(xì)胞的受體，SARS-CoV S 蛋白的193 個氨基酸片段(aa 318-510)可有效地結(jié)合ACE2，并被定義為SARS-CoV的受體結(jié)合域(Receptor Binding Dormine，RBD)。晶體結(jié)構(gòu)分析顯示， 與ACE2直接接觸的(aa 424-494)子域為受體結(jié)合引發(fā)域(Receptor Binding Motif，RBM)。在RBM中，幾個關(guān)鍵氨基酸物對受體結(jié)合至關(guān)重要，而不同SARS-CoV分離毒株中關(guān)鍵氨基酸的改變會導(dǎo)致其與受體結(jié)合能力的變化[25-27]。

在隨后的研究中，人們從晶體結(jié)構(gòu)角度解釋了果子貍SL-CoV不能直接傳染人類的原因。人類流行性感染病毒株hTor02中的479氨基酸殘基為天冬酰胺(asparagine)，但果子貍病毒株cSz02的479氨基酸殘基為賴氨酸(lysine，Lys)。人類ACE2 Lys31 在疏水環(huán)境中與人類ACE2 Glu35 形成鹽橋，果子貍Sz02毒株的Lys479 會與人類Lys31競爭Glu35， 使受體結(jié)合不穩(wěn)定。而果子貍ACE2 的Thr31不與Glu35競爭形成鹽橋，從而使得有足夠的Glu35與果子貍Sz02 Lys479形成鹽橋從而穩(wěn)定結(jié)合接口，所以，擁有Lys479的果子貍病毒株對果子貍ACE2有較高的親和力，而非人類ACE2。此外，人類毒株hTro02中的487殘基為蘇氨酸(threonine)，果子貍毒株cSz02中的487殘基為絲氨酸(serine)，在疏水環(huán)境中，Lys353與人類ACE2的Asp38形成鹽橋，這個過程需要甲基化的Thr487，而低致病性的人類毒株hcGd03中的487殘基為絲氨酸，這也解釋了為何其不能在人間傳播。相比而言，果子貍ACE2 中的Glu38側(cè)鏈比人類ACE2 中的Asp38 長，在沒有甲基化Thr487支持的情況下，也可以與 Lys353 形成鹽橋，因此，帶有Ser487的果子貍病毒株可以在果子貍中傳播，但不能人傳人。因此，果子貍毒株不能感染人體細(xì)胞，因其不適應(yīng)人類ACE2，而SARS-CoV已經(jīng)進(jìn)化，通過逐步突變在RBD上獲得可以持續(xù)感染人類細(xì)胞的氨基酸殘基479和487[28]。

2.3.4突破 為進(jìn)一步探尋SARS的真正自然宿主，研究者在中國云南省昆明市的1個調(diào)查點(diǎn)對中華菊頭蝠 (Rhinolophus sinicus)群落進(jìn)行了縱向調(diào)查(2011年4月至2012年9月)，并從蝙蝠肛拭子和糞便樣本中發(fā)現(xiàn)了兩種新毒株，即RsSHC014和Rs3367。毒株全長基因組序列被確定，大小均為29 787 bp(不包括多聚腺苷酸尾)。兩個新發(fā)現(xiàn)的毒株基因組與人類SARS-CoV(Tor 2)的基因組同源性為95%，顯著高于之前在中國(88%～92%)和歐洲觀察到的蝙蝠SL-CoVs(76%)。研究者從SL-CoV PCR陽性樣品中成功分離出活體病毒株。序列分析表明，分離出的毒株與Rs3367幾乎相同，兩者擁有 99.9%的基因同源性，而S1區(qū)氨基酸序列更是達(dá)到了100%相同。該分離株被命名為SL-CoV-WIV1。

通過病毒轉(zhuǎn)染表達(dá)和不表達(dá)ACE2的不同細(xì)胞，研究者發(fā)現(xiàn)WIV1能夠使用包括不同物種來源的ACE2作為受體，并在表達(dá)ACE2的細(xì)胞中有效復(fù)制。這是人類首次發(fā)現(xiàn)能夠使用ACE2作為受體的野生型蝙蝠SL-CoV，為證明SARS-CoV起源于蝙蝠提供了最明確的證據(jù)[29]。在另一項研究中，研究者在中國云南省1個馬蹄蝠棲息洞穴中對SL-CoVs進(jìn)行了5年的持續(xù)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)了11個新的SL-CoV毒株，這些新毒株在S基因，ORF3和ORF8上具有多樣性。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗表明，11個新毒株中有3個毒株能夠使用人類ACE2作為受體，且其S蛋白序列也各不相同[30]。

這項發(fā)現(xiàn)為認(rèn)識SARS-CoV的起源和演變提供了新的見解，同時也警示人們，未來出現(xiàn)類似SARS的疾病的可能性。由于蝙蝠群落中存在基因池豐富的SL-CoVs，科學(xué)界普遍認(rèn)為，由蝙蝠傳播的CoVs很可能重新出現(xiàn)，導(dǎo)致下一次疾病暴發(fā)，而中國可能是下一個暴發(fā)地。

3 COVID-19

3.1疫情初始 2019年12月下旬，湖北武漢多家醫(yī)療機(jī)構(gòu)報告，發(fā)現(xiàn)不明原因肺炎患者。2019年12月27日，武漢1家醫(yī)院收治了3名重癥肺炎患者。患者甲為49歲婦女，乙為61歲男子，丙為32歲男子。臨床資料顯示，患者甲無潛在慢性疾病，報告發(fā)熱 (體溫37 ℃到38 ℃) ，咳嗽，胸部不適，發(fā)病4天后，咳嗽和胸部不適惡化，但發(fā)燒減退。甲的職業(yè)是海鮮批發(fā)市場的零售商?；颊咭易畛跤?019年12月20日報告發(fā)熱和咳嗽，呼吸窘迫在發(fā)病7天后出現(xiàn)，并在接下來的2 d內(nèi)惡化，流行病調(diào)查顯示，乙經(jīng)常光顧海鮮批發(fā)市場?；颊呒缀捅?020年1月16日康復(fù)出院，患者乙于2020年1月9日死亡[31]。

3.2分子生物學(xué)調(diào)查 2019年12月30日，武漢金銀潭醫(yī)院采集了患者的支氣管肺泡灌洗液，并進(jìn)行檢測，未發(fā)現(xiàn)HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43, HCoV-HKU1等病毒。通過聯(lián)合Illumina 和nanopore 測序技術(shù)，實(shí)驗人員在一個樣本中發(fā)現(xiàn)了1株與蝙蝠SL-CoV(bat-SL-CoVZC45, MG772933.1)同源性達(dá)85%的新病毒序列。該病毒隨后被成功分離并命名為2019-nCoV。經(jīng)檢測，3名患者均為2019-nCoV陽性。序列分析顯示，從患者支氣管肺泡灌洗液中得到的兩個近乎全長的冠狀病毒序列與先前公布的蝙蝠SL-CoV(SL-CoVZC45，MG772933.1)具有86.9%的同源性。進(jìn)化樹分析顯示，3名患者的2019-nCoV基因組聚集在一起，顯示出典型的β冠狀病毒組織結(jié)構(gòu)[31]。

隨后的研究又陸續(xù)得到6個幾乎相同的新型冠狀病毒基因組，研究人員選取WH-human_1基因組作為代表與SARS-CoV 和 MERS-CoV進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)，其與SARS-CoV基因組的序列同源性更高。WH-human_1與SARSCoV_Tor2之間的序列差異主要集中于ORF1a和S蛋白基因，WH-human_1與中東呼吸綜合征(MERS-CoV)的序列同源性較差。譜系分析顯示，蝙蝠可能是武漢CoV的原生宿主，同時，還可能存在從蝙蝠傳播到人類的中間宿主?；谖錆hCoV在遺傳譜系中的獨(dú)特位置，它很可能與SARS或SARS樣冠狀病毒有共同祖先，但由于其進(jìn)化過程中發(fā)生的頻繁的重組事件，導(dǎo)致其譜系路徑變得模糊。

總體而言，2019-nCoV和SARS-CoV 之間存在較大的遺傳學(xué)距離，這種距離在對比MERS-CoV時更為明顯[32]。同源重組是生物進(jìn)化的重要力量，其發(fā)生在許多病毒中，包括登革熱病毒、人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和經(jīng)典豬瘟病毒等[33-37]。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生在2019-nCoV上21 500～24 000 bp 的同源重組源于蝙蝠-冠狀病毒和1種未知病毒的結(jié)合，而這種在S基因蛋白上的重組可能是促進(jìn)2019-nCoV跨物種傳播到人類的關(guān)鍵[38]。

3.3病毒感染機(jī)制分析 由于2019-nCoV與SARS-CoV和MERS-COV的遺傳學(xué)距離較遠(yuǎn)，那么2019-nCoV是采用與SARS-CoV或MERS-CoV相同的跨物種傳播機(jī)制，還是涉及一種新的、不同的傳播機(jī)制呢？如前所述，冠狀病毒的S蛋白分為兩個功能單元，S1和S2，S1 通過與受體結(jié)合來促進(jìn)病毒感染宿主。S1包含兩個域，N 終端域和 C-終端 RBD 域(直接與宿主受體作用)。盡管2019-nCoV與SARS-CoV的S蛋白序列同源性較低，但在RBD域卻有幾段與SARS-CoV_Tor2和HP03-GZ01高度同源性的序列。先前的研究指出，SARS-CoV中S蛋白的442、472、479、487和491氨基酸殘基參與組成受體界面復(fù)合結(jié)構(gòu)，對SARS-CoV的跨物種和人際傳播至關(guān)重要，而2019-nCoV中 S蛋白的RBD域高度保守，以上5個關(guān)鍵位點(diǎn)僅保留了Tyr491，但令人驚奇是，盡管其442、472、479和487位置的氨基酸被替換，其S蛋白的空間結(jié)構(gòu)并未改變。此外，2019-nCoV和SARS-CoV 的S蛋白在RBD域的三維結(jié)構(gòu)近乎相同，從而在受體交互界面產(chǎn)生相似的范德華力和靜電特性，因此，2019-nCoV的S蛋白被認(rèn)為對人類ACE2具有較強(qiáng)的結(jié)合親和力，并可能通過S蛋白-ACE2結(jié)合途徑在人際間傳播[39]。另一項關(guān)于COVID-19蛋白結(jié)構(gòu)的研究也表明，雖然其S蛋白受體結(jié)合域關(guān)鍵殘基與SARS-CoV不同，但其與人類ACE2作用時，卻仍能產(chǎn)生類似于SARS-CoV與人類ACE2結(jié)合時的空間結(jié)構(gòu)與親和力[40]。

為進(jìn)一步證實(shí)COVID-19是否通過ACE2途徑感染人類，中國武漢病毒研究所的人員開展了病毒感染實(shí)驗，使用表達(dá)和不表達(dá)ACE2蛋白的細(xì)胞進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗，結(jié)果顯示，COVID-19僅可以進(jìn)入表達(dá)人類、果子貍、豬和中華菊頭蝠ACE2的赫拉細(xì)胞，從而進(jìn)一步證實(shí)了COVID-19是通過ACE2途徑感染人類[41]。通過晶體結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，COVID-19 RBD區(qū)域與ACE2受體的整體結(jié)合模式與SARS-CoV RBD幾乎相同，COVID-19中結(jié)合ACE2的氨基酸殘基或高度保守，或與SARS-CoV RBD中殘基具有相似的側(cè)鏈特性，這種結(jié)構(gòu)和序列上的相似性提示COVID-19和SARS-CoV RBD之間存在融合進(jìn)化現(xiàn)象[42]。此外，值得注意的是，近期的研究顯示，不同于早期病例體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的病毒序列，后期二代病例體內(nèi)的COVID-19在開放閱讀區(qū)1ab、7a、8及S蛋白編碼區(qū)有17個非同義突變，提示這些位點(diǎn)的突變可能增加了病毒人際間傳播的能力[43-44]。后續(xù)的研究應(yīng)持續(xù)關(guān)注病毒變異的情況，及時掌握其適應(yīng)人類ACE2受體的進(jìn)化方向。

在關(guān)注ACE2途徑的同時，需要注意的是，冠狀病毒跨物種或人際傳播的風(fēng)險也受宿主免疫反應(yīng)、病毒復(fù)制效率、病毒突變率等許多其他因素的影響。

3.4自然宿主相關(guān)研究 最近一項基于病毒全基因組數(shù)據(jù)分析的研究對COVID-19的進(jìn)化來源進(jìn)行分析，通過對比96個COVID-19病毒序列全基因組，發(fā)現(xiàn)120個變異位點(diǎn)并得到58種單倍型，為了解病毒進(jìn)化路徑提供了參考[45]。然而，由于上述研究的樣本量較小，為更準(zhǔn)的預(yù)測病毒來源和進(jìn)化路徑，還需要對更多樣本進(jìn)行測序，掌握更多地區(qū)和時間段發(fā)病病例的病毒基因組序列。最近的一項研究發(fā)現(xiàn)，蝙蝠冠狀病毒(Bat SARSr-CoV RaTG13)與COVID-19的基因序列同源性高達(dá)96%，研究者據(jù)此推斷蝙蝠可能是COVID-19的原生宿主[46]。然而，蝙蝠攜帶的CoVs很少直接感染人類，所以蝙蝠不太可能是導(dǎo)致該流行病的直接原因。最新的一項研究調(diào)查了2019年3月-12月被海關(guān)和廣東林業(yè)廳收繳的走私馬來穿山甲 (Manis javanica)，其體內(nèi)分離的冠狀病毒在E、M、N和S蛋白區(qū)域與COVID-19分別具有100%、98.2%、96.7%和90.4%的氨基酸同源性，值得注意的是，穿山甲冠狀病毒的S蛋白的受體結(jié)合域與COVID-19的受體結(jié)合域幾乎相同，僅存在一個氨基酸差異，此外，晶體結(jié)構(gòu)分析顯示，穿山甲冠狀病毒與穿山甲ACE2有一定親和力[47]。然而，還需要通過感染實(shí)驗進(jìn)一步證實(shí)穿山甲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒是否采用ACE2受體作為感染途徑。此外，基于現(xiàn)有基因組數(shù)據(jù)的研究提示，COVID-19可能源于穿山甲-CoV的病毒與蝙蝠-CoV-RaTG13病毒的重組[48-49]。

4 啟 示

自2003年以來，冠狀病毒第3次在人類歷史上引發(fā)了嚴(yán)重疾病流行。根據(jù)最新的研究顯示，2019-nCoV 可在用于培養(yǎng)SARS-CoV和MERS-CoV的相同細(xì)胞中繁殖，值得注意的是，2019-nCoV在人類呼吸道上皮細(xì)胞中生長更好，這點(diǎn)與SARS-CoV或MERS-CoV不同。相比之下，MERS-CoV自發(fā)現(xiàn)以來，序列并沒有發(fā)生實(shí)質(zhì)性變異，其感染人類的能力也未見提高。所以，2019-nCoV 可能更像 SARS-CoV，通過增強(qiáng)與人類ACE2 的結(jié)合力而適應(yīng)人類宿主。為了及時掌握病毒的變異情況，必須盡可能多的獲取不同時間、地理位置發(fā)病患者病毒分離物的序列，動態(tài)評估病毒變異的程度，判別這些突變是否朝著適應(yīng)人類宿主的方向發(fā)展。

盡快確定病毒的來源是另一個急需解決的問題。冠狀病毒可感染哺乳動物、鳥類和爬行動物，包括人類、豬、牛、馬、駱駝、貓、狗、嚙齒動物、鳥類、蝙蝠、兔子、白鼬、水貂、蛇等[50-52]。然而，目前還未從任何野生動物中發(fā)現(xiàn)2019-nCoV。近年來，分子生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)迅猛發(fā)展，不同于“非典”疫情時期，現(xiàn)在的基因測序技術(shù)可以在短時間內(nèi)得到病毒的全基因組數(shù)據(jù)，在未知病原體檢測方面發(fā)揮了重要作用。盡管如此，截至目前，人們尚未發(fā)現(xiàn)2019-nCoV的原始宿主，病毒進(jìn)化的速度似乎又一次領(lǐng)先了科學(xué)的發(fā)展速度。冠狀病毒在自然界中的宿主廣泛，而其本身又變異頻繁，販賣野生動物的行為不僅為病毒提供了多物種的基因資源，同時也為病毒探索如何感染人類提供了實(shí)驗機(jī)會。病毒在挑戰(zhàn)人類科學(xué)水平和生存意志力的同時，也啟示人們需要對自己的行為進(jìn)行反思。