黃 遠(yuǎn)，董福越，李楚源

（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州510515）

板藍(lán)根名源于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是十字花科Brassicaceae植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fortune的干燥根，適于生長在山地林緣較濕潤的環(huán)境，在全國各地均有栽培。板藍(lán)根入藥歷史悠久，臨床長期用于防治感冒，特別是流感。近年來，已從板藍(lán)根中分離出近200種化合物，主要包括生物堿類、有機(jī)酸類、木脂素類、氨基酸類、核苷類及其他，分子多樣性豐富，其中不乏結(jié)構(gòu)新穎的化合物。本研究中根據(jù)近10余年的科研成果和相關(guān)文獻(xiàn)，對板藍(lán)根化學(xué)成分的分離和含量測定方法進(jìn)行了系統(tǒng)綜述，為板藍(lán)根的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 主要化學(xué)成分含量測定

1.1 核苷類

核苷（nucleoside）是一類糖苷胺（glycosylamine）分子，組成物為堿基加環(huán)狀核糖或脫氧核糖，如胞苷、尿苷、腺苷、鳥苷與胸腺苷。板藍(lán)根藥材中的尿苷、鳥苷、腺苷等核苷類成分能干擾病毒核酸的合成，是中成藥抗病毒的活性成分[1-2]。核苷類成分在板藍(lán)根藥材中含量較高且易溶于水，對板藍(lán)根及其制劑的療效和質(zhì)量影響較大。故核苷類成分可作為板藍(lán)根藥材及其制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。

板藍(lán)根藥材中的核苷類成分易通過水提工藝提取，其含量的高低能影響板藍(lán)根制劑的質(zhì)量和療效。肖慧等[3]以核苷類成分的總含量為評價(jià)指標(biāo)，用正交試驗(yàn)對板藍(lán)根水提工藝的加水量、回流次數(shù)、回流時(shí)間進(jìn)行了分析，確定了最優(yōu)條件。

目前，對于核苷類成分含量測定的研究，主要基于高效液相色譜（HPLC）[4-10]和高效毛細(xì)管電泳[11]的方法。

辛敏通等[4]以水為溶劑超聲提取不同企業(yè)的板藍(lán)根顆粒中核苷類成分，以Agilent Zorbox SB C18柱為色譜柱，采用快速HPLC法以不同比例的水和甲醇為流動相對核苷類成分進(jìn)行梯度洗脫、分離，并比較其含量差異，結(jié)果表明，不同企業(yè)或同一企業(yè)生產(chǎn)的不同批次板藍(lán)根顆粒核苷類成分含量差異較大，不同板藍(lán)根藥材及不同生產(chǎn)工藝過程對核苷類成分含量影響較大。

肖慧等[5]以20%甲醇為溶劑超聲提取板藍(lán)根藥材中的核苷類成分，以Prevail C18柱為色譜柱，采用HPLC法，以水和乙腈為流動相梯度洗脫測定核苷類成分的含量，方法簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于板藍(lán)根藥材、飲片制備、板藍(lán)根制劑生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

張葉等[6]以70%乙醇對不同產(chǎn)地的板藍(lán)根藥材進(jìn)行超聲提取，以Lichrocorb-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（15∶85，V/V）為流動相對板藍(lán)根中腺苷成分進(jìn)行分離，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材中腺苷成分差異明顯，為保證其有效性和可靠性，必須嚴(yán)格控制板藍(lán)根藥材質(zhì)量。

蔣麗蓉等[7]利用15%甲醇超聲提取板藍(lán)根藥材成分，以Kromasil-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（10∶90，V/V）為流動相測定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中腺苷的含量，為更好地控制該制劑的質(zhì)量提供了較實(shí)用的檢測方法。

1.2 木脂素類

木脂素（lignan）是一類由2分子苯丙素衍生物氧化聚合而成的植物次級代謝產(chǎn)物，是板藍(lán)根、連翹、厚樸、細(xì)辛、五味子、牛蒡子等中藥的活性成分，具有抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤和保肝等功效[12-14]。木脂素類化合物中的直鐵線蓮寧B被證實(shí)具有體外抑制流感病毒復(fù)制的功效[15]，作用機(jī)制可能是抑制流感病毒的核輸出[16]，并通過抑制病毒介導(dǎo)的NF-κB通路的活化，從而抑制流感病毒誘導(dǎo)的炎性因子的釋放[17]。

制劑生產(chǎn)中，板藍(lán)根多采用傳統(tǒng)水提醇沉法提取分離，在去除一些多糖等大分子物質(zhì)的同時(shí)也去除了木脂素類等有效成分，且該工藝周期長，雜質(zhì)去除不盡、易產(chǎn)生絮凝物。王盛等[18]以總木脂素含量及直鐵線蓮寧B（clemastanin B）單體含量作為篩選指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對提取過程中的微波輻照功率、提取時(shí)間、料液比、浸泡時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選。孫東東等[19]以單體直鐵線蓮寧B提取率、總木脂素提取率等多指標(biāo)綜合加權(quán)評分為指標(biāo)，以粉碎度、加水倍數(shù)、浸泡時(shí)間、提取次數(shù)、提取時(shí)間作為考察因素，優(yōu)選板藍(lán)根提取工藝。李進(jìn)等[20]以板藍(lán)根有效部位如總木脂素等與單體含量結(jié)合作為指標(biāo)，探討應(yīng)用超濾膜分離純化板藍(lán)根有效成分的工藝。潘以琳等[21]以板藍(lán)根木脂素活性部位作為研究對象，研究了板藍(lán)根藥材經(jīng)微波提取、膜分離處理后的藥液進(jìn)行大孔樹脂吸附純化的工藝。

基于木脂素的藥用價(jià)值，有較多木脂素類化合物直鐵線蓮寧B在藥材或制劑中的含量研究。譚宇萍等[22]利用發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1誘導(dǎo)菘藍(lán)毛狀根，探索不同懸浮培養(yǎng)時(shí)間毛狀根中直鐵線蓮寧B積累變化規(guī)律，通過超高效液相色譜（UPLC）法測定不同生長期菘藍(lán)根和葉中直鐵線蓮寧B的含量，結(jié)果葉中未檢測到直鐵線蓮寧B，而根和毛狀根中均含直鐵線蓮寧B，且直鐵線蓮寧B動態(tài)積累差異顯著，菘藍(lán)毛狀根不僅能積累直鐵線蓮寧B，且其含量穩(wěn)定，隨培養(yǎng)時(shí)間延長逐漸積累，可達(dá)板藍(lán)根含量最高值的2.5倍，表明菘藍(lán)毛狀根同樣也具有用于生產(chǎn)直鐵線蓮寧B的潛力。陳勇等[23]對不同廠家、不同批次的板藍(lán)根顆粒經(jīng)50%甲醇超聲提取、離心后取上清液水浴濃縮，以Agilent TC-C18柱為色譜柱，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，通過甲醇和水梯度洗脫，于280 nm波長處檢測鐵線蓮寧B和異落葉松脂素的含量，結(jié)果表明，不同廠家、不同批次的板藍(lán)根顆粒中鐵線蓮寧B和異落葉松脂素成分含量差異較大。何立巍等[24]將板藍(lán)根粉末用60%甲醇經(jīng)超聲提取，離心后取上清液，以甲醇-乙腈-水（24∶1∶75，V/V/V）為流動相、Lichrospher-C18柱為色譜柱，采用HPLC法，在280 nm波長處測定板藍(lán)根主要產(chǎn)地藥材中直鐵線蓮寧B的量，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材直鐵線蓮寧B的量差異較大，以江蘇、吉林、安徽、河北的含量較高。

1.3 氨基酸類

氨基酸（amino acid）是生物學(xué)上重要的有機(jī)化合物，是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使其分子具有生化活性。板藍(lán)根大多以水煎方式入藥，其水溶性成分中含有多種氨基酸類成分，板藍(lán)根中的氨基酸類成分為其抗病毒的代表性有效成分。2015年版《中國藥典（一部）》中板藍(lán)根藥材及顆粒中分別針對氨基酸類成分進(jìn)行薄層色譜或化學(xué)反應(yīng)鑒別，但無含量測定項(xiàng)。目前常見測定中藥中氨基酸含量的方法包括氨基酸分析儀測定或衍生化法。氨基酸分析儀測定，樣品處理復(fù)雜；柱前衍生化法常有鄰苯二甲醛（OPA）法、2，4-二硝基氟苯（FDNB）法、氯甲酸芴甲酯（FMOC）法、異硫氰酸苯酯（PITC）法等。

任國萍等[25]以水超聲提取藥材中的氨基酸成分，以Inertsil ODS-3為色譜柱，采用2，4-二硝基氟苯柱前衍生法及微波水解-柱前衍生法測定板藍(lán)根藥材中含量較高、水解前后差值較大的10種游離氨基酸和水解氨基酸的含量，再通過水解氨基酸與游離氨基酸的差值計(jì)算出結(jié)合氨基酸的含量，建立了HPLC法測定板藍(lán)根藥材中10種游離氨基酸和結(jié)合氨基酸含量的方法。

劉西京等[26]以4個(gè)含量較高氨基酸蘇氨酸、脯氨酸、精氨酸、纈氨酸為指標(biāo)，以磷酸鹽緩沖液和乙腈水溶液為流動相，采用2，4-二硝基氟苯柱前衍生化，以Eclipse XDB C18柱為色譜柱，測定游離氨基酸和酸水解后氨基酸的含量，即測定板藍(lán)根水提液、人工胃液、人工腸液和酸水解液中的氨基酸含量，結(jié)果表明，板藍(lán)根多肽經(jīng)人工胃液和人工腸液消化后，未水解為游離氨基酸。

辛敏通等[27]對5家企業(yè)生產(chǎn)的板藍(lán)根顆粒中6種常見氨基酸（精氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、纈氨酸），以Waters AccQ TagTMUltra C18柱為色譜柱，采用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯（AQC）進(jìn)行柱前衍生化，以乙腈、甲酸和甲酸銨水溶液為流動相，采用UPLC法測定其含量，結(jié)果表明，5家企業(yè)生產(chǎn)的板藍(lán)根顆粒中氨基酸類成分的含量存在差異。

吳家紅等[28]以70%乙醇超聲提取板藍(lán)根中氨基酸成分，以茚三酮溶液作為顯色劑，采用分光光度法在570 nm波長處測定藥材中總氨基酸的含量，結(jié)果表明，3%茚三酮乙二醇溶液顯色完全，且陰性無干擾，該方法測定總氨基酸適用范圍廣。

何軼等[29]以水超聲提取板藍(lán)根粗粉的成分，在醋酸-醋酸鹽作緩沖鹽作用下，以乙腈和水為流動相，以Phenomenex ODS3柱為色譜柱，采用異硫氰酸苯醋柱前衍生法測定13批板藍(lán)根樣品中精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸和纈氨酸顯示的含量，結(jié)果顯示，河北安國中藥材市場的板藍(lán)根氨基酸含量明顯高于其他來源的板藍(lán)根。陳凱等[30]研究發(fā)現(xiàn)，以精氨酸為對照，利用紫外分光光度法測總氨基酸含量的方法簡便易行、合理可靠。

1.4 生物堿類

生物堿（alkaloid）是一種主要包含堿性氮原子化合物，包括脂溶性的靛藍(lán)、靛玉紅和水溶性成分表告依春等。現(xiàn)代藥理試驗(yàn)表明，板藍(lán)根的生物堿類成分能抗炎、抗病毒、解熱，2015年版《中國藥典（一部）》中板藍(lán)根的質(zhì)量控制指標(biāo)是表告依春，故考察優(yōu)化板藍(lán)根生物堿部位的工藝及含量測定研究較多[31-47]。

徐麗華等[31]采用色譜法對板藍(lán)根總生物堿進(jìn)行分離，得到2，4（1H，3H）喹唑二酮、表告依春、靛玉紅3個(gè)單體，采用雞胚法對其進(jìn)行了抗體外流感病毒活性測定，結(jié)果表明，抗流感病毒作用表告依春及生物堿提取物明顯有，喹唑二酮略有，靛玉紅無。馬麗娜等[32]對板藍(lán)根藥材粉末進(jìn)行水提醇沉后取其濾液，借助超濾質(zhì)譜技術(shù)，通過比對不同組別板藍(lán)根樣品超濾前后成分的變化情況，篩選并鑒定出告依春與神經(jīng)氨酸酶結(jié)合能力顯著。進(jìn)一步以體外神經(jīng)氨酸酶活性試驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)告依春可能是板藍(lán)根抗流感病毒的活性成分，靛藍(lán)、靛玉紅是板藍(lán)根中抑菌的主要活性成分，尤其靛玉紅是板藍(lán)根中治療慢性粒細(xì)胞白血病的有效成分，因其對腫瘤細(xì)胞生成有選擇性抑制作用[33]。

何立巍等[34]應(yīng)用溶劑法和大孔吸附樹脂法提取、分離純化板藍(lán)根生物堿，并優(yōu)選出最佳提取工藝，但發(fā)現(xiàn)總生物堿量仍偏低。

黃曉玲等[35]通過比較回流、滲漉、微波、超聲等不同提取方式的優(yōu)缺點(diǎn)，采用超聲提取法，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間、料液比對提取工藝的影響，確定了總生物堿的最佳提取工藝。

李進(jìn)等[36-37]以板藍(lán)根有效部位總生物堿等與單體表告依春等含量結(jié)合作為指標(biāo)，探討應(yīng)用超濾膜分離純化板藍(lán)根有效成分的工藝，考察了微波提取法優(yōu)選板藍(lán)根生物堿部位的工藝。該工藝能降低分離純化成本，提高有效成分保留率和雜質(zhì)去除率。

安益強(qiáng)等[40]以水為溶劑，對板藍(lán)根藥材進(jìn)行超聲提取及對其制劑（板藍(lán)根顆粒、復(fù)方板藍(lán)根顆粒、板藍(lán)根含片、板藍(lán)根糖漿）以水浴加熱方式溶解，以乙腈-水-磷酸-三乙胺（8.50∶90.72∶0.73∶0.05，V/V/V/V）為流動相，以Zorbax SB-C18柱為色譜柱，采用RPHPLC法測定板藍(lán)根藥材及其制劑中表告依春的含量，結(jié)果該方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可作為板藍(lán)根藥材及其制劑中測定表告依春的方法。

胡曉燕等[41]對板藍(lán)根藥材以水為溶劑進(jìn)行回流提取，以甲醇-0.02%磷酸水溶液（7∶93，V/V）為流動相，以Waters SunFire C18柱為色譜柱，采用RP-HPLC法測定不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材表告依春的含量并建立指紋圖譜，以指紋圖譜相似度和表告依春含量為指標(biāo)，運(yùn)用SPSS軟件進(jìn)行類聚分析。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地板藍(lán)根的表告依春含量和化學(xué)指紋圖譜不盡相同，化學(xué)成分差異與產(chǎn)地呈相關(guān)性。該方法既能評價(jià)藥材質(zhì)量，又能有效辨別不同產(chǎn)地藥材，可為道地藥材化學(xué)質(zhì)量控制提供借鑒。

徐小飛等[42]對板藍(lán)根粉末以水為溶劑超聲提取，以甲醇和水為流動相，以Agilent C18柱為色譜柱，采用HPLC法對提取液進(jìn)行梯度洗脫，同時(shí)測定不同采收期的板藍(lán)根藥材中5種核苷類成分和（R，S）-告依春，可為板藍(lán)根藥材最佳采收期的確定及板藍(lán)根規(guī)范化種植提供參考。

靛藍(lán)、靛玉紅為脂溶性成分，含量測定方法已有氧化滴定法、直接比色測定法、薄層色譜（TLC）法、雙波長分光光度法、RP-HPLC法，其中RP-HPLC法測定較普遍。范麗芳等[43]以氯仿回流提取20批來自不同產(chǎn)地的板藍(lán)根藥材，以乙腈-0.05%磷酸為流動相，以Diamonsil C18柱為色譜柱，采用HPLC-UV法對提取液進(jìn)行梯度洗脫，以測定板藍(lán)根中靛藍(lán)和靛玉紅的含量，并進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，結(jié)果表明，靛藍(lán)、靛玉紅含量的高低與地域相關(guān)，但同一地區(qū)的板藍(lán)根藥材中靛藍(lán)、靛玉紅的最高濃度與最低濃度相差也較大，表明板藍(lán)根的質(zhì)量除地域因素外，還與其他因素相關(guān)。

馬莉等[44]對9批不同產(chǎn)地板藍(lán)根藥材及板藍(lán)根顆粒用三氯甲烷提取后經(jīng)減壓回收溶劑后用甲醇-三氯甲烷（8∶2，V/V）溶解定容，以Waters Symmetry-C18柱為色譜柱，采用HPLC法以甲醇-水（65：35，V/V）為流動相測定板藍(lán)根藥材及制劑中靛藍(lán)和靛玉紅含量，結(jié)果表明，產(chǎn)于道地產(chǎn)區(qū)河北和安徽的板藍(lán)根藥材中靛藍(lán)和靛玉紅含量較高，在中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）生產(chǎn)基地生產(chǎn)的藥材的主要成分含量明顯高于普通種植的藥材，表明道地產(chǎn)區(qū)和規(guī)范種植會影響藥材質(zhì)量。

謝友良等[45]以N，N-二甲基甲酰胺超聲提取板藍(lán)根藥材成分，以Kromasil C18柱為色譜柱，采用HPLC法以乙腈-水（70∶30，V/V）為流動相同時(shí)測定青黛中有效成分靛藍(lán)和靛玉紅的含量。

王金鵬等[46]將復(fù)方板藍(lán)根顆粒以三氯甲烷加熱提取后，采用HPLC法以甲醇和2%磷酸為流動相進(jìn)行含量測定，建立以HPLC法測定復(fù)方南板藍(lán)根顆粒中靛藍(lán)和靛玉紅含量的方法。

孫立新等[47]以氯仿回流提取，以Spherisorb C18柱為色譜柱，以安宮黃體酮為內(nèi)標(biāo)物，采用RP-HPLC法，以甲醇-水（62∶38，V/V）為流動相同時(shí)測定板藍(lán)根、大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅的含量，結(jié)果在避光條件下，24h內(nèi)板藍(lán)根、大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅在氯仿中穩(wěn)定，時(shí)間過長，靛藍(lán)、靛玉紅分解，故應(yīng)保證在24h內(nèi)完成試驗(yàn)。

1.5 有機(jī)酸類

有機(jī)酸（organic acid）是指一些酸性有機(jī)化合物，板藍(lán)根中的有機(jī)酸具有較強(qiáng)的抗內(nèi)毒素活性[48]。劉云海等[49]對從板藍(lán)根中分離得到的31個(gè)化合物的抗內(nèi)毒素活性進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)丁香酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸和苯甲酸等有抗內(nèi)毒素作用。對于板藍(lán)根總有機(jī)酸的工藝優(yōu)化研究，主要采用的是微波法[50-51]，對板藍(lán)根中各種有機(jī)酸的測定方法主要有高效毛細(xì)管電泳法[52]、HPLC法[53]、電位滴定法[54-55]和離子色譜法[56]等。

在板藍(lán)根中有機(jī)酸類的分離純化方面，湯杰等[57]將板藍(lán)根以75%乙醇（pH=2）索氏提取，以丁香酸為指標(biāo)篩選吸附樹脂，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化影響樹脂吸附的因素。結(jié)果表明，D101型樹脂對板藍(lán)根中有機(jī)酸組分的吸附與解吸性能較好，采用樹脂床體積（2BV）50%乙醇易于洗脫通過優(yōu)選樹脂洗脫液；正交試驗(yàn)結(jié)果表明，以藥液質(zhì)量濃度1.0 g/mL、pH=3.0及流速為2 BV/h的參數(shù)組合對板藍(lán)根有機(jī)酸成分的分離效果良好。王小雪等[52]采用高效毛細(xì)管電泳法，以硼砂作為緩沖液，對水楊酸、苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、丁香酸的毛細(xì)管電泳遷移行為進(jìn)行了研究，并考察了緩沖液酸度、濃度、有機(jī)添加物濃度、電壓等因素對待測物質(zhì)分離的影響，結(jié)果表明，選用乙腈-硼砂（15%乙腈，25 mmol/L，15 mmol/L β-環(huán)糊精，pH=9.10）作為運(yùn)行緩沖液，工作電壓為11.5kV時(shí)對板藍(lán)根有機(jī)酸成分的分離效果較好。

在板藍(lán)根有機(jī)酸類的含量測定方面，馬莉等[58]對板藍(lán)根中有機(jī)酸類成分進(jìn)行分析，采用酸堿滴定法測定總有機(jī)酸含量，并以Kromasil C18柱為色譜柱，以乙腈-1%醋酸水溶液（25∶75，V/V）為流動相，采用RPHPLC法測定板藍(lán)根提取物中水楊酸含量，試驗(yàn)中樣品經(jīng)D101大孔吸附樹脂制備，提取物粉末顏色淺，避免了滴定時(shí)顏色的干擾，使用酸性流動相抑制有機(jī)酸的離解，結(jié)果準(zhǔn)確。王文清等[59]對大青葉粉末用乙醚回流提取，經(jīng)揮干乙醚后用甲醇溶解樣品，以Lichrosorb C18柱為色譜柱，以乙腈-水-磷酸（18∶82∶0.3，V/V/V）為流動相，采用RP-HPLC法同時(shí)測定大青葉中鄰氨基苯甲酸與丁香酸的含量，該方法操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。李培啟[60]采用高效毛細(xì)管電泳法測定板藍(lán)根藥材中水楊酸、丁香酸、苯甲酸和鄰氨基苯甲酸的含量，并測定了3家公司的2批板藍(lán)根顆粒中的有機(jī)酸，建立了簡單、快速方法，可用于控制板藍(lán)根顆粒中抗內(nèi)毒素有機(jī)酸的質(zhì)量。

1.6 多糖類

多糖（polysaccharide）由多個(gè)單糖分子脫水聚合，以糖苷鍵連接而成，可形成直鏈或有分支的長鏈，水解后得到相應(yīng)的單糖和寡糖。板藍(lán)根多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，對特異性免疫、非特異性免疫均有一定促進(jìn)作用。許益明等[61]證實(shí)，腹腔注射板藍(lán)根多糖可顯著促進(jìn)小鼠免疫功能。同時(shí)，板藍(lán)根多糖能降低細(xì)菌脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬細(xì)胞株引起的NF-κB與DNA的結(jié)合活性升高，對于抑制炎性反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)，減少炎性因子產(chǎn)生，防治炎癥性疾病有一定療效[62]，其為板藍(lán)根主要活性成分。

板藍(lán)根多糖在板藍(lán)根提取物中的質(zhì)量較高，但板藍(lán)根制劑工藝尤其是提取方法不完善，導(dǎo)致提取不完全，造成藥材資源浪費(fèi)。多糖作為生物大分子，在熱水中溶解度較大，故目前大多采用水提醇沉法進(jìn)行板藍(lán)根多糖的提取，但也存在提取溫度高、提取時(shí)間長、能耗大、提取率較低的缺點(diǎn)。隨著提取技術(shù)的不斷進(jìn)步，新技術(shù)也應(yīng)用到板藍(lán)根多糖的提取中，如微波輔助、超聲波輔助和酶法輔助提取[63-69]。

國欣等[70]對80%醇沉板藍(lán)根粗多糖進(jìn)行DEAESepharose Fast Flow柱色譜、Sephacryl-200葡聚糖凝膠柱色譜及高效凝膠色譜系統(tǒng)分離純化，采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化HPLC法分離得到2種均一板藍(lán)根多糖（IRPS1A和IRPS1B）和2種均一板藍(lán)根糖蛋白（IRPS2A和IRPS3A）。其中，IRPS1A與IRPS1B的單糖組成均為甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；IRPS2A的單糖組成為半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖；IRPS3A的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。板藍(lán)根糖蛋白IRPS2A和IRPS3A中，單糖組成以葡萄糖為主，還含有少量半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖等。

馬莉等[71]采用DEAE纖維素離子交換色譜柱，Sephadex G75凝膠色譜柱分離純化板藍(lán)根多糖，從板藍(lán)根多糖中分離純化得到4種不同的均一多糖組分PS1，PS2，PS3，PS4，并結(jié)合高效凝膠滲透色譜（HPGPC），紅外光譜（IR）、TLC、UV等方法對板藍(lán)根多糖進(jìn)行組成結(jié)構(gòu)分析及理化性質(zhì)研究，其色譜分析表明，PS1，PS2，PS3，PS4均由單一木糖組成，且多糖的活性與相對分子質(zhì)量、溶解度、黏度和糖鏈結(jié)構(gòu)有關(guān)。

張?bào)w祥等[72]采用水煮醇沉法從板藍(lán)根中提取水溶性多糖，通過正交試驗(yàn)，考察液料比、提取時(shí)間、提取溫度、醇沉?xí)r間、醇液比對多糖得率的影響，對提取的粗多糖脫蛋白，通過Sehadex G-100凝膠色譜柱進(jìn)一步分離純化。結(jié)果表明，液料比是影響提取工藝的主要因素，最佳工藝條件為液料比30∶1，提取溫度90℃，提取時(shí)間6 h，采用三氯乙酸法去蛋白的多糖得率高，脫蛋白效果好，葡聚糖凝膠柱層析分離純化后的板藍(lán)根多糖為分子大小均一的單一組分多糖。

其他的提取優(yōu)化試驗(yàn)，王莉等[64]采用微波技術(shù)提取板藍(lán)根多糖，反應(yīng)時(shí)間縮短12倍，多糖含量由0.81%提高到3.47%。唐志華[65]將條件設(shè)置為料液比1∶40、提取時(shí)間8 min、微波功率500 W，多糖提取率達(dá)到了6.55%。劉依等[66]用水浸泡藥材1 h后再用微波處理，多糖得率可達(dá)33.06%。

目前，對于板藍(lán)根中多糖的含量測定研究，主要是基于苯酚/蒽酮-硫酸比色法[73-76]，并制訂了相關(guān)的方法參數(shù)，為板藍(lán)根多指標(biāo)質(zhì)量評價(jià)體系的建立提供了參考。

2 存在問題

雖然板藍(lán)根化學(xué)成分的研究已開展多年[77]，但在分離提取等研究過程中仍有較多問題。如靛藍(lán)、靛玉紅為脂溶性成分，用水提取幾乎提取不出，而實(shí)際生產(chǎn)中板藍(lán)根多為水提取；且菘藍(lán)中的靛藍(lán)、靛玉紅主要存在于殘留的葉柄、葉片和根莖中，而根中含量很低，因此把靛藍(lán)、靛玉紅作為板藍(lán)根的指標(biāo)成分進(jìn)行控制仍需深入探討。提取時(shí)，受熱時(shí)間較長會大量破壞生物堿和氨基酸等活性成分。另外，醇提或醇沉的醇濃度過高，也會導(dǎo)致板藍(lán)根中的多糖和氨基酸類水溶性成分損失。對于板藍(lán)根氨基酸含量測定中常以含量較高的氨基酸為指標(biāo)，并不能完全反映氨基酸的總含量，且所選氨基酸能否有效控制板藍(lán)根質(zhì)量，還有待進(jìn)一步研究。提取時(shí)，對于含量極少，但可能存在較大藥用價(jià)值的成分，需經(jīng)過濃縮、富集等方法提取，該過程損失率較大，故測量含量較低的成分，其測定誤差較大。

由于板藍(lán)根化學(xué)成分復(fù)雜，藥效物質(zhì)尚不完全明確，檢測方法未成熟，目前尚未找到合適的成分作為質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。而且板藍(lán)根內(nèi)在有效成分之間的相互作用可能是決定其藥效的因素之一，因此單純以某一有效成分或指標(biāo)成分的量作為質(zhì)量評價(jià)的依據(jù)并不全面。且板藍(lán)根藥材作為板藍(lán)根中藥提取物和復(fù)方制劑的原料，其質(zhì)量穩(wěn)定性十分重要，但因受生長環(huán)境、土壤性質(zhì)、栽培技術(shù)、產(chǎn)地加工等多方面因素的影響，板藍(lán)根的成分種類、含量等有所不同，藥材質(zhì)量良莠不齊，從而表現(xiàn)出不同產(chǎn)區(qū)，甚至即使是同一產(chǎn)區(qū)的板藍(lán)根質(zhì)量存在較大差異，故必須發(fā)展道地藥材、實(shí)施板藍(lán)根GAP規(guī)范化種植，并加強(qiáng)規(guī)范化管理，以確保板藍(lán)根藥材的質(zhì)量。

3 小結(jié)

板藍(lán)根的藥效顯著，臨床應(yīng)用廣泛，但若無合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來控制其質(zhì)量，則難以保證其有效性和安全性。文中在結(jié)合前期板藍(lán)根主要活性成分藥理研究的基礎(chǔ)上，對板藍(lán)根主要成分的分離純化和含量測定研究的現(xiàn)狀與進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)，旨在為板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制研究提供參考，為明確板藍(lán)根的藥效與物質(zhì)基礎(chǔ)的關(guān)系，建立完備的質(zhì)量控制體系，全面提升質(zhì)量控制水平，以及保障臨床療效提供參考。