(貴州省大方縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 大方 551600)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正黏病毒科的甲型流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起禽類的高度接觸性傳染病[1，2]。根據(jù)病毒外膜血凝素(H)和神經(jīng)氨酸酶(N)蛋白抗原性的不同，分為16個(gè) H亞型(H1～H16)和9個(gè)N亞型(N1～N9)[3]。H5和H7亞型屬于高致病性禽流感，具有潛伏期短、傳播快、發(fā)病急、發(fā)病率和死亡率高等特點(diǎn)，不僅對(duì)家禽造成嚴(yán)重危害，還對(duì)人類健康構(gòu)成 嚴(yán)重威脅，并對(duì)國(guó)際貿(mào)易產(chǎn)生嚴(yán)重影響[4]。本試驗(yàn)對(duì)重組禽流感H5+H7二價(jià)滅活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)的免疫效果進(jìn)行評(píng)估，了解其抗體變化和影響因素，為本地區(qū)禽流感的免疫預(yù)防工作提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試劑(1)禽流感病毒(H5+H7)H5N1Re-8株+H7N9Re-1株二價(jià)滅活疫苗(批號(hào)2017025)，購(gòu)自乾元浩生物股份有限公司；禽流感病毒H5N1Re-8株HI抗原(批號(hào)2017002)、禽流感病毒H5N1Re-8株HI陽(yáng)性血清(批號(hào)2016004)，購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。(2)3只健康公雞心臟血(無(wú)AI抗體)，洗滌3次配制1%紅細(xì)胞懸液，由大方縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)生物實(shí)驗(yàn)室制備。(3)H5亞型禽流感病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)171106)、禽流感病毒H7亞型競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)171204)，購(gòu)自湖北武漢科前生物股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)雞及免疫在某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)選擇21日齡蛋雞100羽(要求飼養(yǎng)管理方法一致，日齡、品種、批次相同，母源抗體低且水平較整齊，本底情況較一致)，免疫前采集雞血清和雙腔拭子進(jìn)行AIV(H5、H7)核酸和抗體檢測(cè)，AIV核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性、抗體效價(jià)小于24者作為免疫試驗(yàn)雞。試驗(yàn)雞按禽流感疫苗免疫程序和相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行免疫注射，2017年11月28日進(jìn)行首次免疫，12月25日加強(qiáng)免疫1次。

1.3 樣品采集樣品采集參照《高致病性禽流感樣品采集、保存及運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范》(NY/T 765—2004)進(jìn)行。采樣時(shí)間分別為免疫后第0、21、42、72、102、132、162、192、222、252 d，共計(jì)采樣10次。

1.4 樣品檢測(cè)(1)血凝抑制試驗(yàn)(HI)：根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936—2003)規(guī)定，采用HI試驗(yàn)進(jìn)行AIV(H5、H7)免疫抗體檢測(cè)，詳細(xì)記錄相關(guān)的檢測(cè)結(jié)果。以完全抑制4個(gè)單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度?？贵w滴度>24為免疫抗體合格。所有免疫雞的平均免疫抗體合格率≥70%判定為群體免疫合格。(2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：嚴(yán)格按照禽流感ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作方法及結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1HI檢測(cè)結(jié)果由表1可見(jiàn)：免疫重組禽流感H5+H7二價(jià)滅活疫苗的雞群在免疫后21～252 d，H5抗體合格率為74%～100%，H7抗體合格率為78%～100%。

表1 H5、H7亞型禽流感免疫抗體HI檢測(cè)結(jié)果

2.2ELISA檢測(cè)結(jié)果由表2可見(jiàn)：免疫重組禽流感H5+H7二價(jià)滅活疫苗的雞群在免疫后21～252 d，H5抗體合格率為74%～100%，H7抗體合格率為76%～100%。

表2 H5、H7亞型禽流感免疫抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1通過(guò)HI檢測(cè)表明，重組禽流感H5+H7二價(jià)滅活疫苗首次免疫后21 d，H5、H7亞型免疫抗體合格率均達(dá)到100%，至162 d有所下降。252 d時(shí) H5亞型抗體合格率降至74%，H7抗體合格率降至78%，但均達(dá)到國(guó)家規(guī)定≥70%的要求，免疫效果好。H5亞型102 d抗體合格率為98%，而132 d 抗體合格率為100%，說(shuō)明HI試驗(yàn)過(guò)程中還存在一定誤差。

3.2為了驗(yàn)證HI試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，通過(guò)ELISA試驗(yàn)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示：在同一時(shí)間上，ELISA試驗(yàn)與HI試驗(yàn)檢測(cè)禽流感H5、H7免疫抗體合格率升降趨勢(shì)基本相同，由于ELISA試驗(yàn)較靈敏，整體檢測(cè)合格率略高。目前國(guó)內(nèi)一些廠家生產(chǎn)的禽流感診斷抗原效價(jià)較低，HI試驗(yàn)穩(wěn)定性相對(duì)較差，而用 ELISA 檢測(cè)方法更加敏感和方便，因此在進(jìn)行禽流感抗體監(jiān)測(cè)時(shí)可優(yōu)先選用 ELISA方法。

3.3我國(guó)禽流感的防制工作采用全面強(qiáng)制免疫政策，使本病在很大程度上得到了控制，杜絕了大面積暴發(fā)的可能。但仍不能放松禽流感的免疫與監(jiān)測(cè)工作，定期進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)、評(píng)估免疫效果仍是今后禽流感防控工作中的重點(diǎn)之一。在做好抗體監(jiān)測(cè)、保障群體良好抗體水平的同時(shí)，還應(yīng)當(dāng)注重養(yǎng)禽業(yè)的其他重要環(huán)節(jié)，建立積極主動(dòng)、卓有成效的綜合防控體系，結(jié)合品種、環(huán)境衛(wèi)生狀況、季節(jié)和氣溫、免疫接種次數(shù)等進(jìn)行綜合分析[5]。在禽流感免疫接種過(guò)程中，要注重疫苗的選擇和免疫次數(shù)的要求。購(gòu)買正規(guī)廠家生產(chǎn)的質(zhì)量好的疫苗，并按嚴(yán)格要求保存、運(yùn)輸、接種。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，重組禽流感H5+H7二價(jià)滅活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)免疫效果良好，在畢節(jié)大方地區(qū)可以推廣使用。