劉虹，楊杰，劉欣，李素玲，張程

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 食用菌研究所，山西 太原 030031)

位于中國華北地區(qū)山西省呂梁山北部的管涔山海拔1 800～2 600 m，生長著大面積的云杉Piceasp.、落葉松Larixsp.純林或混交林內(nèi)，是中國北溫帶高山地區(qū)生長的寒溫性針葉林的代表地區(qū)之一，每年7月下旬到9月中下旬，林內(nèi)地面上會(huì)大量生長許多菌帽紫色或紫紅色、菌柄純白色、個(gè)體中等大小的紅菇類Russula蘑菇，同時(shí)還有一些菇體形態(tài)非常類似，但菌帽呈淺褐色或蛋殼色的類型，偶爾有幾乎完全白色的個(gè)體。這些個(gè)體無論何種顏色，都會(huì)有一些紫色色調(diào)的痕跡，從而暗示它們之間似乎有著特定的內(nèi)在聯(lián)系。多次查閱山西已有的相關(guān)專業(yè)文獻(xiàn)，沒有找到吻合這種紅菇的記載[1,2]。為弄清這種紫色紅菇具體是哪一個(gè)物種，以及這幾種外形相似但有不同顏色菌帽的個(gè)體之間的關(guān)系， 2017-2018年連續(xù)在本研究地區(qū)進(jìn)行野外采樣調(diào)查，對(duì)采到的樣本進(jìn)行了nrDNA-ITS片段的提取和分析。

1 材料與方法

1.1 采集樣本及記錄

調(diào)查采集采用樣線調(diào)查方法，于2017年和2018年7～9月間在呂梁山北部的管涔山云杉Piceasp.、落葉松Larixsp.純林或兩者的混交林中進(jìn)行。樣本野外采集拍攝照片，記錄的主要形態(tài)學(xué)特征包括蘑菇擔(dān)子果的菌蓋顏色、菌褶顏色、菌褶與菌柄的連接方式、寬度和密度、菌柄形狀、長度及直徑，菌肉顏色及變色情況，氣味和味道。每份樣本都制備2份，一份用干燥器烘干，用作憑證標(biāo)本，另一份用硅膠干燥，備后續(xù)分子鑒定使用。標(biāo)本分別保存在山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所標(biāo)本館(HSA)和北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院標(biāo)本館(BJTC)。

1.2 標(biāo)本形態(tài)學(xué)鑒定

對(duì)采集的每份標(biāo)本，采用形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行初步鑒定。用于形態(tài)分類的特征包括：野外記錄的宏觀形態(tài)特征；室內(nèi)顯微鏡下觀察的孢子形狀及大小，擔(dān)子的形狀和大小，囊狀體的有無、形狀和大小以及菌蓋表面表皮細(xì)胞的特征等。

1.3 DNA分子鑒定

nrDNA-ITS分子片段的提取、測(cè)序等參照Fan等[3]的方法。所得序列與NCBI數(shù)據(jù)庫所收錄的序列用BLAST工具進(jìn)行比對(duì)，選取每個(gè)樣本序列比對(duì)到的相似度最高的目標(biāo)序列，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征對(duì)標(biāo)本進(jìn)行鑒定和比對(duì)。

本研究引證的山西管涔山相關(guān)標(biāo)本信息如表1所示。

表1 本研究引證樣本信息表Table 1 The specimens information cited in this study

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA分子分析結(jié)果

本研究共在山西管涔山云杉落葉松林內(nèi)地上采集具有不同顏色菌帽的紅菇樣本8份(表1)。從8份樣本中，提取到nrDNA-ITS分子片段8份。將這8份ITS片段相互比對(duì)，以確定這些樣本相互間的關(guān)系(表2)。將這8份nrDNA-ITS分子片段用BLAST工具在NCBI數(shù)據(jù)庫比對(duì)，選取相似度高于97%的結(jié)果用于本研究物種確定分析(表3)。

表2 本研究引證樣本間BLAST比對(duì)結(jié)果一覽表信息表/%Table 2 BLAST results between each of the specimens cited in this study

表3 本研究引證樣本在NCBI上的比對(duì)結(jié)果Table 3 The BLAST results of Russula specimens cited in this study in NCBI

表2結(jié)果顯示，這8份取自管涔山云杉落葉松純林或混交林內(nèi)的標(biāo)本，盡管存在菌帽顏色差異，但nrDNA-ITS片段BLAST比對(duì)結(jié)果為相互間的相似度均高于99%，這個(gè)結(jié)果證實(shí)這些DNA片段來自同一個(gè)物種，也就是說這8份樣本屬于同一個(gè)分類學(xué)物種。

表3結(jié)果顯示，8份樣本對(duì)應(yīng)的高于97%的NCBI上的序列包含有3條共同的序列，這3條序列對(duì)應(yīng)的名稱分別為Russulanauseosa(KT933985)，Russulalaricina(AY061685)和Russulacessans(KP406550)。結(jié)合本研究引證的8條為同一物種(表2)這一事實(shí)判斷，3條序列可以肯定來自同一個(gè)物種，其中有2個(gè)名字源于錯(cuò)誤的鑒定。形態(tài)學(xué)上，3個(gè)物種有點(diǎn)相似，有時(shí)會(huì)被混淆。依據(jù)文獻(xiàn)記載，Russulacessans的擔(dān)孢子表面紋飾是短棘狀到不完整網(wǎng)紋，而Russulanauseosa的擔(dān)孢子表面紋飾是獨(dú)立的小疣或刺[4,5]，本研究的管涔山8份樣本的擔(dān)孢子表面紋飾為獨(dú)立的小疣或刺，與Russulanauseosa的擔(dān)孢子表面紋飾吻合。同時(shí)可以確定這里Russulacessans的名字下的序列(KP406550)源于錯(cuò)誤的鑒定。Russulalaricina也是一個(gè)紫紅色到紅色的物種，但其菌柄帶有明顯的紅色色調(diào)，而我們的山西管涔山樣本無論菌帽什么顏色，菌柄均為純正的白色，因此這里的這個(gè)名稱也是錯(cuò)誤的鑒定所致。而Russulanauseosa典型特征為菌帽紫紅色，常褪色為淡黃褐色，菌肉白色，菌柄白色[5]，非常吻合本研究采集到的山西管涔山樣本。綜上所述，確認(rèn)Russulanauseosa是本研究樣本的科學(xué)名稱，該種的中文名稱為淡味紅菇[6]。

2.2 分類學(xué)結(jié)果

淡味紅菇(圖1)

Russulanauseosa(Pers.)Fr., Epicr. syst. mycol. (Upsaliae): 363, 1838(1836-1838)

異名Synonymy:

AgaricusnauseosusPers.,Syn.meth.fung. (G?ttingen) 2: 446,1801

Russulafirmulaf.atropurpurea(Allesch.) Sarnari, MonografiaIllustrata del GenereRussulain Europa1: 755, 1998

Russulalaricinavar.flavida(Cooke) Bon, Docums Mycol.18(no. 69): 36,1987

那男子放下一杭，一杭瞪了他一眼，說：“我有幾句話想給雪螢說?！狈秷?jiān)強(qiáng)臉上重新浮現(xiàn)笑容，“這個(gè)沒問題，有什么話盡管說，不過，我們不用回避吧?！币缓紦u搖頭，說：“現(xiàn)在可以把她放了吧?！?/p>

Russulanauseosaf.japonicaHongo, J. Jap. Bot.42: 156, 1967

Russulanauseosaf.xanthophaea(Boud.) Singer,Beih. bot. Zbl., Abt. 2 49: 263, 1932

Russulanauseosavar.AlbidaBritzelm., Botan. Centralbl.54(4): 100, 1893

Russulanauseosavar.AtropurpureaAllesch.，Ber. bot. Ver. Landshut11: 33, 1889

Russulanauseosavar.FlavidaCooke, Illustrations of British Fungi (Hymenomycetes) (London) 7: pl. 1102 (1053), 1890

Russulanauseosavar.FuscaJ.E. Lange, Fl. Agaric. Danic.5: 81, 1940

Russulanauseosavar.SchaefferiKillerm.，Denkschr. Bayer. Botan. Ges. inRegensb.20: 43, 1939

Russulanauseosavar.StriatellaJul. Sch?ff. ex Mo?nne-Locc., in Reumaux, Bidaud & Mo?nne-Loccoz, RussulesRaresou Méconnues (Marlioz): 285, 1996

Russulanauseosavar.VitellinaFr., Epicr. syst. mycol.(Upsaliae): 363.1838(1836-1838)

Russulapulchralis Britzelm., Ber. naturhist. Augsburg28: 140, 1885

RussulaxanthophaeaBoud.,Bull.Soc.mycol.Fr.10(1): 60, 1894

菌蓋初期半球形，后漸漸平展，直徑3～14 cm，表面不粘，邊緣有時(shí)有不明顯的短條紋，紫色、紫紅色，中部較暗至黑紫色，有時(shí)為淺褐色或蛋殼色，偶爾為近白色(但通常有紫色色調(diào)存在)。菌肉較薄或稍厚，白色，無明顯的氣味，不苦，不辣。菌褶白色，干燥時(shí)為淡黃色，直生，等長，偶有分叉，密度中等。菌柄圓柱狀，純白色，受傷不變色，長3～8 cm，直徑1～2.5 cm。擔(dān)孢子無色或淺黃色，近球形，7～12.5×8～11 um，表面有分離的小疣或小刺狀紋飾，遇碘變藍(lán)色。側(cè)生囊狀體梭形，60～95×7.5～12.5 um。

A:淡味紅菇-淺褐色的擔(dān)子果；B:淡味紅菇-白色帶紫色色調(diào)的擔(dān)子果；C:淡味紅菇-紫紅色的擔(dān)子果；D:淡味紅菇-蛋殼色的擔(dān)子果。A:Brownishcap of Russula nauseosa, B: Whitish cap with purple tints of Russula nauseosa,C: Purple-reddishcap of Russula nauseosa, D:Yellow-brownish cap of Russula nauseosa.圖1 4種淡味紅菇Fig.1 Four kinds of Russula nauseosa

3 討論與結(jié)論

本研究結(jié)果為淡味紅菇在山西省的首次記錄。劉波等在20世紀(jì)90年代曾報(bào)道過該地區(qū)的一個(gè)紅菇物種-黃孢紅菇Russulaxerampelina(Schaeff.)Fr.，生長在針葉林地上[1]。本研究在該地區(qū)沒有發(fā)現(xiàn)黃孢紅菇，也沒有研究劉波等報(bào)道該物種所依據(jù)的標(biāo)本，原因是存放該標(biāo)本的山西大學(xué)真菌標(biāo)本館(MHSU)已經(jīng)不再存在，多數(shù)標(biāo)本損毀丟失，僅有部分殘存標(biāo)本轉(zhuǎn)移到中國科學(xué)院微生物研究所標(biāo)本館(HMAS)，但其中沒有發(fā)現(xiàn)黃孢紅菇名下的標(biāo)本。黃孢紅菇與淡味紅菇形態(tài)上較為相似，所不同的是黃孢紅菇菇體粗壯，菌蓋顏色多為暗紫紅色到暗紫褐色，菌褶奶油色，特別是菌柄帶有明顯的粉紅色或淡紫色色調(diào)。從書中記載的描述和生長環(huán)境，推測(cè)有2種可能性：一是該書中記載分布于山西寧武縣管涔山針葉林內(nèi)的黃孢紅菇可能源于對(duì)淡味紅菇的錯(cuò)誤鑒定；二是淡味紅菇目前已經(jīng)替代了黃孢紅菇在本地區(qū)的分布。

本研究顯示，淡味紅菇在該地區(qū)菌蓋顏色以紫紅色或淡紫色為主，但淺褐色或蛋殼色的類型也較為常見，偶爾也會(huì)有白色(帶少許紫色色調(diào))的個(gè)體存在。該物種菌帽顏色的諸多變化，可能是導(dǎo)致該物種在形態(tài)分類階段出現(xiàn)眾多異名的原因之一。根據(jù)顯微形態(tài)鑒定，盡管菌蓋顏色變化較大，但是它們的孢子特征卻較為穩(wěn)定，形狀為近球形，表面紋飾為小刺或小疣，彼此間相互分離，不連接成網(wǎng)紋，這一點(diǎn)和上述8份nrDNA-ITS片段表現(xiàn)的高度一致性相互支持和對(duì)應(yīng)。

本次調(diào)查在該地區(qū)只發(fā)現(xiàn)少數(shù)紅菇物種，淡味紅菇是其中最為常見的物種，具有該地區(qū)地上真菌群落優(yōu)勢(shì)物種的特征。另一個(gè)較為常見的紅菇物種是四川紅菇RussulaSichuanensisLi et al，這是一種成熟時(shí)菌帽不能完全開傘、幾乎腹菌化的白色到灰白色菌帽的紅菇[7]，該種也是山西省新記錄種。初步的研究結(jié)果和目測(cè)觀察紅菇屬在此地區(qū)云杉落葉松林內(nèi)的生物量較大，但物種較為單一、多樣性貧乏。

紅菇屬物種均為外生菌根真菌[8]。近期有研究報(bào)告顯示：從根尖細(xì)胞提取的nrDNA-ITS片段分析支持淡味紅菇是陜西秦嶺辛家山林區(qū)一種云杉Piceasp.的外生菌根菌群落的優(yōu)勢(shì)物種[9]。據(jù)我們?cè)诠茕股秸{(diào)查林區(qū)地面連續(xù)兩年的目測(cè)觀察，淡味紅菇是本地夏秋季節(jié)落葉松或云杉落葉松混交林內(nèi)林內(nèi)極為常見的大型真菌物種之一，目測(cè)地面生物量較大，可以推斷它是本地區(qū)真菌群落中的優(yōu)勢(shì)物種之一。

本研究顯示，淡味紅菇在山西呂梁山脈北部針葉林內(nèi)極為常見，亦有研究顯示它在陜西秦嶺地區(qū)也是當(dāng)?shù)卦粕纪馍婢郝渲械膬?yōu)勢(shì)物種[9]。然而，在國內(nèi)幾本代表性大型真菌圖鑒中沒有該種的記載[10,11]，分析其原因，我們認(rèn)為這可能與在DNA分子鑒定手段出現(xiàn)之前，該物種易于和其它一些相似的物種混淆有一定的關(guān)系，如上面的黃孢紅菇、黑紫紅菇Russulaatropurpurea(Krombh.) Britz.等等。有文獻(xiàn)記載淡味紅菇是一種可以食用的野生蘑菇[6]，但據(jù)我們?cè)谠搮^(qū)域的走訪調(diào)查，沒有發(fā)現(xiàn)本地山民有采集食用該物種的歷史和習(xí)慣。