祝招玲,劉振生,高 惠,張致榮,姚緒新,劉 鵬,韓興志,王繼飛,4,滕麗微,*

1 東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物與自然保護(hù)地學(xué)院,哈爾濱 150040 2 佳木斯大學(xué)經(jīng)濟(jì)與管理學(xué)院,佳木斯 154007 3 國(guó)家林業(yè)局野生動(dòng)物保護(hù)學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室,哈爾濱 150040 4 寧夏賀蘭山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局,銀川 750021

巖羊(Pseudoisnayaur)屬偶蹄目牛科羊亞科巖羊?qū)?是典型的高山動(dòng)物,棲息于高原丘原和高山裸巖與山谷間的草地,被世界自然保護(hù)聯(lián)盟物種生存委員會(huì)(IUCN/SSC)收錄為低危種,在我國(guó)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄中,被列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物。目前對(duì)巖羊的研究主要集中在種群生態(tài)學(xué)[1]、行為生態(tài)學(xué)[2]和種群遺傳學(xué)[3]等領(lǐng)域。伴隨著非損傷性取樣技術(shù)的應(yīng)用,利用糞便DNA結(jié)合微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)羊亞科動(dòng)物進(jìn)行個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定和遺傳多樣性等方面開(kāi)展了豐富的研究[4-5],同時(shí)對(duì)動(dòng)物的婚配制也進(jìn)行了一定的研究,如對(duì)倭黑猩猩(Panpaniscus)[6]、黑麂(Muntiacuscrinifrons)[7]、小麂(Muntiacusreevesi)[8]和黑犀牛(Dicerosbicornis)[9]等婚配制的研究,這使得分子生物學(xué)手段成為研究巖羊親權(quán)鑒定和婚配制的新視角。

本研究采用非損傷性取樣技術(shù),通過(guò)微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定,并分析雌雄巖羊的交配策略,探討巖羊的婚配制度,為進(jìn)一步開(kāi)展巖羊種群分子行為學(xué)研究而完成基礎(chǔ)性技術(shù)研發(fā)工作,同時(shí)也為該物種的保護(hù)、利用和管理提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究地概況及樣本采集

本研究采樣地點(diǎn)為賀蘭山巖畫風(fēng)景區(qū)(N 38°44′,E 106°01′),位于賀蘭山東麓,北起拜寺口,南至三關(guān)口,南北長(zhǎng)30 km,東西寬4 km,海拔1448 m,是典型的大陸性氣候特征,全年干旱少雨,年均降水量200—400 mm之間,年平均蒸發(fā)量2000 mm[1]。植被以山楊(Populusdavidiana)、灰榆(Ulmuspumila)、酸棗(Zizyphusjujubevar.spinosa)、冰草(Agropyroncristatum)、針茅(Stipacapillata)、早熟禾(Poaannua)等為主。此處巖羊數(shù)量較多,具有一定的代表性。在2017年7—8月和11—12月采用樣線法進(jìn)行巖羊新鮮糞便樣本的采集,依據(jù)賀蘭山實(shí)際溝道走向和地形地貌特征布設(shè)了7條樣線,樣線長(zhǎng)度為2—6 km[10]。在樣線行走過(guò)程中,搜尋巖羊的新鮮糞便,若發(fā)現(xiàn)巖羊?qū)嶓w,等待巖羊自行離開(kāi)后,再進(jìn)行新鮮糞便樣本的收集。為了避免樣本交叉污染,戴口罩和一次性PE手套,用已消毒的鑷子采集糞便樣本,在新鮮的糞便中選取20粒左右放入50 ml的管中,貼上標(biāo)簽,每采集完一次樣本,更換PE手套和鑷子。樣本采集后帶回實(shí)驗(yàn)室,放入-80℃冰箱保存。兩次共獲得369份巖羊糞便樣本,巖羊皮張1份。

1.2 基因組DNA的提取和PCR擴(kuò)增

1.2.1DNA提取和質(zhì)量檢測(cè)

巖羊糞便用試劑盒(QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit)提取DNA,巖羊皮張用血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒提取DNA,按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)巖羊糞便DNA質(zhì)量。

1.2.2微衛(wèi)星位點(diǎn)的選取和PCR擴(kuò)增

本研究通過(guò)查閱文獻(xiàn)得到31對(duì)賀蘭山巖羊的微衛(wèi)星位點(diǎn)[5,11-12],并委托生工生物工程(上海)股份有限公司(Sangon)合成引物,經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)后篩選出擴(kuò)增穩(wěn)定且多態(tài)信息含量高的10對(duì)引物(見(jiàn)表1),在上游引物5′端分別標(biāo)記FAM、HEX、TAMRA三色熒光重新合成。PCR反應(yīng)體系：總體積12 μL,2×PCR Buffer for KOD FX Neo 6 μL；2 mM dNTPs 2.4 μL；10 pmol/μL的上、下游引物各0.36 μL；100 ng/μL的DNA模板1.5 μL；1 U/50 μL KOD FX Neo 0.24 μL；ddH2O 1.14 μL。PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性2 min,98℃變性10 s,54℃—60℃退火30 s,68℃延伸30 s,反應(yīng)35個(gè)循環(huán),最后68℃延伸7 min。

實(shí)驗(yàn)采用Huber等[13]提供的2對(duì)引物SRY12、BMCl009和牙釉蛋白基因PCR法[14]進(jìn)行性別鑒定(見(jiàn)表2)。對(duì)實(shí)驗(yàn)的所有樣本進(jìn)行3次PCR 擴(kuò)增,并用實(shí)驗(yàn)室已知性別的巖羊皮張DNA樣本作為對(duì)照。性別鑒定多重PCR擴(kuò)增：出現(xiàn)雙條帶(180 bp和300 bp)判定為雄性；出現(xiàn)一條帶(300 bp)則判定為雌性。牙釉蛋白基因PCR擴(kuò)增法：出現(xiàn)雙條帶(218 bp和263 bp)判定為雄性；出現(xiàn)一條帶(263bp)則判定為雌性。最后比較兩套PCR體系的結(jié)果來(lái)判斷樣本的性別。PCR反應(yīng)體系同上。

表1 10對(duì)微衛(wèi)星引物序列Table 1 Ten microsatellite primer sequences

表2 性別鑒定引物序列Table 2 Primer sequences of sex determination

1.3 數(shù)據(jù)分析

微衛(wèi)星位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物送上海生工用ABI測(cè)序測(cè)儀(3730xl DNA Analyzer)進(jìn)行分型,用Excel整理微衛(wèi)星數(shù)據(jù),之后用Cervus 3.0[15](Allele Frequency Analysis)功能,計(jì)算等位基因數(shù)目、雜合度、多態(tài)信息含量、親權(quán)排除概率、無(wú)效等位基因頻率及Hardy-Weinberg平衡檢測(cè),同時(shí)對(duì)巖羊進(jìn)行個(gè)體識(shí)別,鑒定個(gè)體時(shí)設(shè)定以下原則：所有微衛(wèi)星座位上的基因型都相同或只有一個(gè)座位上的一個(gè)等位基因存在差異則為同一個(gè)個(gè)體[16]。運(yùn)行Cervus 3.0的 Simulation of Parentage Analysis 和 Parentage A nalysis 功能,由于父本、母本均未知,所以將所有雄性和雌性分別作為候選父本和候選母本,取樣概率均設(shè)為1.0(取樣概率為候選父占取樣中雄性比例及候選母占取樣中雌性比例),其他選項(xiàng)均為系統(tǒng)默認(rèn)值,進(jìn)行親權(quán)鑒定。實(shí)驗(yàn)中為了保證鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性,所有位點(diǎn)全匹配的才確認(rèn)親子關(guān)系。使用Kingroup V2[17]計(jì)算個(gè)體間的親緣系數(shù)(r),作為親權(quán)鑒定的補(bǔ)充,親緣系數(shù)范圍在-1到1之間,表示親緣相近的程度。理論上,當(dāng)種群處于Hardy-Weinberg平衡時(shí),0.5≤r<1時(shí)為同父同母的兄弟姐妹關(guān)系,0.25≤r<0.5時(shí)為同父異母或同母異父的兄弟姐妹關(guān)系[18]。通過(guò)Genepop[19]對(duì)10個(gè)位點(diǎn)組成的45組進(jìn)行連鎖不平衡檢驗(yàn),采用馬爾科夫鏈法(Markov chain method)分析各位點(diǎn)間的連鎖關(guān)系,參數(shù)均設(shè)為5000 dememorization、100 bateh和5000 iteration[20]得到無(wú)偏估計(jì)P值,當(dāng)P<0.05表明連鎖不平衡具有顯著性。運(yùn)用POPGENE 32[21]計(jì)算種群的近交系數(shù)Fis值,其值范圍為-1—1,Fis值為顯著正值時(shí),表示種群內(nèi)存在較嚴(yán)重的近交現(xiàn)象,Fis值為顯著負(fù)值時(shí),表示種群內(nèi)存在遠(yuǎn)交[22]。

2 結(jié)果

2.1 個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定

2.1.1基因組提取、性別鑒定和個(gè)體識(shí)別

369份巖羊糞便全部成功提取到DNA,經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),巖羊糞便中提取的DNA片段完整,質(zhì)量較高,可以直接用于PCR擴(kuò)增,共鑒定出282只巖羊個(gè)體,其中雄性152只,雌性130只。性別鑒定部分結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 巖羊SRY12和BMCl009位點(diǎn)的擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 The amplification results of SRY12 and BMCl009 loci of Pseudois nayaur1—9,13—17：巖羊糞便DNA；10：雌性巖羊皮張DNA；11：雄性巖羊皮張DNA；12：陰性對(duì)照

圖2 牙釉蛋白基因(AMELX和AMELY)擴(kuò)増結(jié)果Fig.2 The amplification results of amelogenin gene (AMELX &AMELY)1：雌性巖羊皮張DNA；2：雄性巖羊皮張DNA；3—12：巖羊糞便DNA；13：空白對(duì)照

2.1.2微衛(wèi)星位點(diǎn)的親權(quán)排除率

10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)共檢測(cè)到101個(gè)等位基因,平均等位基因(Na)為10.1,PIC在0.452—0.825之間,平均多態(tài)信息0.6129,為高度多態(tài)位點(diǎn)(PIC﹥0.5),平均觀測(cè)雜合度(HObs)為0.7737,平均期望雜合度(HExp)為0.6512。Fis平均值為-0.1836。無(wú)效等位基因(F(Null))頻率極低,平均值為-0.0790。Hardy-Weinberg平衡檢測(cè)顯示,8個(gè)位點(diǎn)完全符合哈溫平衡,位點(diǎn)SRCRSP3和ILSTS011則顯著偏離平衡。累積單親排除概率為0.9615(累積單親排除概率是根據(jù)多個(gè)位點(diǎn)累積排除任意一個(gè)可疑父親或母親為假父親或假母親的概率),累積雙親排除概率為0.9975(累積雙親排除概率是根據(jù)多個(gè)位點(diǎn)累積排除任意兩個(gè)可疑父親和母親為假父親和假母親的概率)(見(jiàn)表3)。

通過(guò)Genepop對(duì)10個(gè)位點(diǎn)組成的45組進(jìn)行連鎖不平衡檢驗(yàn)(見(jiàn)表4),由此得到11組連鎖不平衡具有顯著性的組合。經(jīng)Bonferroni[23]校正后,仍連鎖不平衡(P<0.05/45=0.0011)的組合有2組,PND01與INRABERN172,FCB48與PND05。

表3 10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的親權(quán)排除概率Table 3 Parental exclusion probability of 10 microsatellite locis

Na：位點(diǎn)等位基因數(shù),allele number of 1oci；HObs：位點(diǎn)觀測(cè)雜合度,observed heterozygosity；HExp：位點(diǎn)期望雜合度,Expected heterozygosity；PIC：位點(diǎn)多態(tài)信息含量,Polymorphic information content；NE-1P：第1個(gè)親本非排除概率,Combined non-exclusion probability (first parent)；NE-2P：第2個(gè)親本非排除概率,Combined non-exclusion probability (second parent)；NE-PP：雙親非排除概率,Combined non-exclusion probability (parent pair)；Fis：近交系數(shù)的F-統(tǒng)計(jì)量檢測(cè)值,inbreeding coefficient withF-statistics；HW：哈迪溫伯格平衡Hardy-Weinberg equilibrium；F(Null)：無(wú)效等位基因頻率,frequency with null；NS：不顯著偏離,no significant deviation

表4 10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的連鎖不平衡檢驗(yàn)結(jié)果Table 4 Linkage disequilibrium test result of 10 microsatellites locis

圖3 微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)與累積排除率之間的關(guān)系Fig.3 Relationship between the combined probability of exclusion and the number of microsatellite lociCE-1P,CE-2P,CE-PP：PIC由低到高排列的累積排除概率；CE-1P-1,CE-2P-1,CE-PP-1：PIC由高到低排列的累積排除概率

按照多態(tài)信息含量(PIC)由低到高和由高到低的順序依次增加微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)進(jìn)行累積排除率分析,結(jié)果由圖3可知,隨著微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)的增加,累積排除率逐漸增加,當(dāng)微衛(wèi)星位點(diǎn)達(dá)到7個(gè)(PIC由高到低)和9個(gè)(PIC由低到高)時(shí),累積親權(quán)排除概率大于0.9900,說(shuō)明所篩選的10個(gè)微衛(wèi)星衛(wèi)點(diǎn)能進(jìn)行準(zhǔn)確的親權(quán)判定。

2.1.3親權(quán)鑒定

運(yùn)用 Cervus3.0 軟件的Parent pair(Sexes known)功能進(jìn)行親權(quán)鑒定,共鑒定出父-母-子7對(duì),父-子21對(duì),母-子19對(duì)。28對(duì)父-子的親緣系數(shù)(r)在0.5000—0.8462之間,26對(duì)母-子的親緣系數(shù)(r)在0.5000—0.8000之間,所有父子間、母子間、同父同母?jìng)€(gè)體間的親緣系數(shù)平均分別為0.6164、0.6251和0.5426。實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行親子鑒定,親權(quán)排除概率為99.75%。

2.2 婚配制度

由表5、表6可知,X162(♂)、X173(♂)各自3個(gè)后代間的親緣系數(shù)在0.25≤r<0.5之間,說(shuō)明X162(♂)、X173(♂)均與3個(gè)雌性交配過(guò)；D31(♀)、D33(♀)、D18(♀)、X168(♀)、D148(♀)各自后代間的親緣系數(shù)在0.5≤r<1之間,說(shuō)明它們只與1個(gè)雄性交配過(guò)；D73(♀)、D78(♀)、D89(♀)各自后代間的親緣系數(shù)在0.25≤r<0.5之間,說(shuō)明它們與2個(gè)雄性交配過(guò)；X163(♂)、X3(♂)、D145(♂)、X160(♂)、X112(♂)、D15(♂)各自后代間的親緣系數(shù)在0.25≤r<0.5之間,說(shuō)明它們與2個(gè)雌交配過(guò)；D45(♂)、D70(♂)各自后代間的親緣系數(shù)在0.5≤r<1之間,說(shuō)明它們只與1個(gè)雌性交配過(guò)。研究中多次出現(xiàn)1個(gè)雄性與2個(gè)或2個(gè)以上的雌性交配并產(chǎn)下后代,可知巖羊的婚配制屬于一雄多雌。

表5 巖羊的親子關(guān)系和親緣系數(shù)Table 5 The coefficient of parentage and genetic relationship in Pseudois nayaur

表6 后代之間的親緣系數(shù)Table 6 The relationship coefficient among the offsprings

3 討論

3.1 親權(quán)鑒定

目前普遍采用STR來(lái)鑒定個(gè)體間的親權(quán)關(guān)系,其排除非親本能力依賴于微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)和等位基因的多樣性[24]。一般8—10個(gè)及以上微衛(wèi)星位點(diǎn)即可確定較高的親權(quán)鑒定準(zhǔn)確率[15]。本研究選用10個(gè)高度多態(tài)性(PIC>0.5)微衛(wèi)星位點(diǎn)(見(jiàn)表3),進(jìn)行親權(quán)鑒定是可行的。

無(wú)效等位基因是影響親權(quán)鑒定準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)因素,本研究使用的10個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn),雜合子豐富,無(wú)效等位基因頻率極低,而Cervus3.0軟件使用似然率(似然率即某一可疑父親的似然值相對(duì)于理想父親似然值的比)容許這些錯(cuò)誤的存在,在統(tǒng)計(jì)處理上可以有效降低錯(cuò)配的敏感性,使親權(quán)鑒定結(jié)果更加科學(xué)化,同時(shí)還可以充分使用所占有的遺傳資料[25-26]。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有2個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)出現(xiàn)偏離平衡的現(xiàn)象,其余8個(gè)位點(diǎn)處于平衡狀態(tài),Cervus 中一兩個(gè)座位的Hardy-Weinberg不平衡并不影響親權(quán)分析中似然比的計(jì)算。Fis為負(fù)值,說(shuō)明種群內(nèi)不存在近交。賀蘭山巖羊是生活在特殊環(huán)境下的一個(gè)邊緣種群,集小群,隨著季節(jié)的變化,其集群類型、集群大小均會(huì)發(fā)生一定的變化,這種邊緣種群在適應(yīng)性進(jìn)化過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致不平衡選擇,使得基因組中的某些位點(diǎn)偏離Hardy-Weinberg平衡[5]。10個(gè)位點(diǎn)經(jīng)校正后有2組連鎖不平衡具有顯著性,可能是因?yàn)闊o(wú)效等位基因的存在導(dǎo)致了這些組合連鎖不平衡。

一般情況下,參照國(guó)際常用標(biāo)準(zhǔn),RCP>95%,傾向有親子關(guān)系；RCP>99.73%,認(rèn)定有親子關(guān)系[25]；對(duì)于人類的親權(quán)判定,累積排除概率99.0%—99.8%即可認(rèn)定為極其成立的親子關(guān)系[27]；王躍峰利用5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)白頭葉猴進(jìn)行個(gè)體識(shí)別和親緣鑒定,得到累積非父排除概率為99.70%[28]；程文科對(duì)144頭豬進(jìn)行個(gè)體親子鑒定時(shí)得到累積非父排除率為98.35%,與系譜記錄結(jié)果完全相同[4]；郭立平利用8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在3種情況下為西門塔爾牛進(jìn)行親子鑒定,累積排除概率分別為99%、99.95%和99.99%,鑒定結(jié)果與系譜一致[29]。

實(shí)驗(yàn)中親權(quán)排除概率為99.75%,并用Kingroup V2確定親緣系數(shù),進(jìn)一步驗(yàn)證了親權(quán)鑒定的準(zhǔn)確性。因此,實(shí)驗(yàn)中采用的10對(duì)微衛(wèi)星位點(diǎn)完全可以達(dá)到親子鑒定的要求。

3.2 巖羊的婚配制度

陳小南[7]用70個(gè)黑麂個(gè)體糞便樣本、任鵬[8]用177個(gè)小麂個(gè)體糞便樣本、Garnier[9]用35只野生黑犀牛的糞便樣本在親權(quán)鑒定的基礎(chǔ)上,通過(guò)分析雌雄間的交配關(guān)系確定婚配制。本研究利用282只巖羊個(gè)體糞便樣本,根據(jù)巖羊雌雄間的交配關(guān)系研究婚配制度,在樣本數(shù)量上完全滿足實(shí)驗(yàn)要求。

通常把婚配制度分為單配制(monogamy)和多配制(polygamy),多配制又包括一雄多雌(polygyny)、一雌多雄(polyandry)和混交制(promiscuity),動(dòng)物選擇哪一種婚配制度受個(gè)體之間的相互作用和對(duì)外界環(huán)境適應(yīng)的影響[30]。研究動(dòng)物的婚配制度,需要注意在一個(gè)繁殖季節(jié)里,個(gè)體以什么樣的方式獲得配偶,獲得配偶的數(shù)量以及雌雄個(gè)體的育幼行為等因素[31]。

新疆天山北山羊(Caprasibirica)傾向于組成“一雄多雌”的小群完成交配[32]。捻角山羊(Caprafalconeri)是一雄多雌的交配系統(tǒng)[33]。赤羊(Ovisvignei)在交配時(shí)期,雄性赤羊會(huì)由獨(dú)居轉(zhuǎn)為與4—5頭雌性赤羊居住,是一雄多雌的交配系統(tǒng)[33]。盤羊(Ovisammon)在交配期間,活動(dòng)區(qū)域選擇地勢(shì)平坦、避風(fēng)暖和的低海拔區(qū)域,雄羊和雌羊開(kāi)始集群,5—6 只雄盤羊和數(shù)十只雌盤羊一起活動(dòng),雄性盤羊間爭(zhēng)偶激烈,相互劇烈格斗,勝者獲取這群盤羊的交配權(quán),交配季節(jié)結(jié)束后,雌雄又分開(kāi)活動(dòng)[34]。叉角羚(Antilocapraamericana)在交配季節(jié)占據(jù)了不設(shè)防的領(lǐng)地,雄性保護(hù)雌性的后宮[35]。阿爾卑斯羱羊(Capraibex)似乎能夠通過(guò)堅(jiān)持它們之間預(yù)先建立的穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)關(guān)系來(lái)減少因爭(zhēng)斗而消耗的能量,年長(zhǎng)的雄性通常采取撫育策略壟斷與雌性交配的機(jī)會(huì),而年輕的、處于從屬地位的雄性通過(guò)悄悄接近雌性的策略獲得交配,但成功率總體上較低[36]。賀蘭山巖羊集小群,發(fā)情期雌雄群、混合群和獨(dú)羊比例顯著上升,雌性巖羊相對(duì)分散,部分雄性巖羊在不同群之間遷移尋找發(fā)情的雌性巖羊,并通過(guò)爭(zhēng)斗獲得優(yōu)勢(shì)地位,進(jìn)一步獲得交配權(quán),盡可能增加繁殖機(jī)會(huì)[37],這一現(xiàn)象說(shuō)明了實(shí)驗(yàn)中1只雌性與2只雄性巖羊交配并產(chǎn)下后代的現(xiàn)象是在雌性不同的繁殖期之間,同時(shí)也證實(shí)了實(shí)驗(yàn)中1只雄性與多只雌性巖羊交配并產(chǎn)下后代的結(jié)果,推測(cè)巖羊是一雄多雌的婚配制度。

哺乳動(dòng)物具有較長(zhǎng)的妊娠期和哺乳期,雄性動(dòng)物在此期間不能提供更多的幫助,而是傾向于盡可能多地與多個(gè)雌性交配,這是提高自身適合度的一種進(jìn)化選擇[38]。巖羊發(fā)情交配期在每年的11月末到12月,在12月中旬時(shí)達(dá)到高峰,母羊經(jīng)過(guò)大約160 d的妊娠期后在次年5月中旬到6月中旬產(chǎn)仔,哺乳期3個(gè)月[39],這期間雄性巖羊不參與育幼活動(dòng),由雌性巖羊哺育下一代,觀察發(fā)現(xiàn)母仔群出現(xiàn)的頻率在一年的四個(gè)季節(jié)中均最高[10]。由于巖羊雌雄兩性在婚配中投資的不平衡性,促使雄性巖羊有更多的時(shí)間和精力參與到繁殖行為中,獲得與更多雌性交配的機(jī)會(huì),這也驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果,雄性巖羊與多個(gè)雌性巖羊交配并產(chǎn)下后代,表明巖羊是一雄多雌制的婚配制度。

實(shí)驗(yàn)從分子生物學(xué)角度對(duì)賀蘭山巖羊進(jìn)行親權(quán)鑒定和婚配制研究,填補(bǔ)了這一領(lǐng)域的研究空白,并為進(jìn)一步開(kāi)展巖羊種群分子行為學(xué)研究積累基礎(chǔ)資料。同時(shí)對(duì)采用非損傷性取樣技術(shù)研究有蹄類動(dòng)物的個(gè)體識(shí)別、性別鑒定、親權(quán)鑒定和婚配制等具有重要意義,特別是對(duì)瀕危有蹄類動(dòng)物的保護(hù)和利用提供了新的研究方法和視角。此外,希望通過(guò)實(shí)驗(yàn)的研究成果,可以為有關(guān)部門和科研單位提供有效數(shù)據(jù),促進(jìn)形成一套更加完整的賀蘭山巖羊保護(hù)、利用和管理體系。

致謝：寧夏賀蘭山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局胡天華高級(jí)工程師在野外調(diào)查中給予幫助,特此致謝。