李秉岳，李 杰，鄭 靖，吳 萍，王仁嬡，張發(fā)斌，趙協(xié)慧，楊 艷，陳湘宏，劉占厚，高 威

(青海大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810001)

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾胃主運(yùn)化和受納，若脾的功能發(fā)生障礙，則出現(xiàn)受納、吸收、轉(zhuǎn)輸?shù)裙δ苁С?，故脾胃與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的消化系統(tǒng)的關(guān)系很密切?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，飲食物的消化、吸收不僅是胃腸的主要功能，而且與胰腺有著密切的關(guān)系。為了弄清中醫(yī)學(xué)的脾胃與胰腺是否存在相關(guān)性，我們通過觀察太陰病(脾陽(yáng)虛證)模型大鼠脾與胰腺組織形態(tài)學(xué)變化，探討太陰病(脾陽(yáng)虛證)脾與胰腺的相關(guān)性。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康未孕SD大鼠840只，購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)：SYXK(甘)2011-0001，合格證號(hào)：62001000000133。雌雄各半，質(zhì)量180～220 g。

1.2 藥物制備

造模用大承氣湯：按《傷寒論》配伍，芒硝、大黃、枳實(shí)、厚樸(購(gòu)自青海中藏藥材市場(chǎng))比例為3∶4∶5∶5，參照王琦所著《經(jīng)方應(yīng)用》折合今量。大黃粉碎后冷水浸泡12 h，絞汁、水浴加熱濃縮至所需劑量[1]；枳實(shí)、厚樸冷水浸泡12 h，于煎藥機(jī)中煮沸40 min后三層紗布過濾，如此煎煮2次，將2次濾液合并、水浴加熱濃縮至所需劑量；最后將大黃液、枳實(shí)厚樸混煎液、芒硝液混合，使得混合液含生藥2 g/mL，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 儀器

常規(guī)手術(shù)器械；PL203電子天平(上海梅勒特-托利多儀器有限公司)；100 mL量筒，1 000 mL量筒；5 L燒杯；DC-NSG多功能提取濃縮機(jī)組(上海達(dá)程實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電熱恒溫水溫箱(北京西城區(qū)醫(yī)療器械廠)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海公私合營(yíng)國(guó)光醫(yī)化儀器廠)；Leitz石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leitz公司)；載玻片和蓋玻片；倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司)。

2 方法

2.1 分組

所購(gòu)SD大鼠到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，置于恒溫(20±2) ℃，相對(duì)濕度為(40±5)%的環(huán)境中，適應(yīng)性分籠喂養(yǎng)3天后，剔除不健康大鼠；將健康大鼠隨機(jī)分為正常組240只、模型組288只、干預(yù)組288只，藥物組隨機(jī)均分為藥物1組、藥物2組，各組均雌雄各半分籠；實(shí)驗(yàn)組、藥物組大鼠進(jìn)行太陰病(脾陽(yáng)虛證)造模。每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物再隨機(jī)分成28組，每組10～13只。

2.2 造模

根據(jù)文獻(xiàn)[2]及預(yù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，采用大承氣湯室溫灌胃法造模。造模過程分為兩個(gè)階段，共12天。第一階段1～6天，模型組、藥物組大鼠在室溫下用大承氣湯灌胃，劑量為3.5 mL/200g，1次/d，以損傷大鼠脾氣，空白組大鼠以相同劑量的生理鹽水灌胃；第二階段7～12天，模型組、藥物組大鼠在室溫下用大承氣湯灌胃，劑量為4.0 mL/200g，以損傷大鼠脾陽(yáng)，空白組大鼠以相同劑量的室溫生理鹽水灌胃。造模過程中大鼠均采用自由取食飲水，3天稱量1次體重。

2.3 理中湯干預(yù)

大鼠造模成功后，將干預(yù)組大鼠在室溫下用理中湯灌胃，劑量為3.5 mL/200 g，連續(xù)干預(yù)12天。

2.4 標(biāo)本采集

正常組、模型組均從造模成功后第2天開始，在以后的12天中，每天各隨機(jī)抽取10～13只大鼠，斷頭處死大鼠并迅速解剖取出脾臟和胰腺；干預(yù)組于造模成功后第2天開始，以后12天中，分別予理中湯干預(yù)12 h，然后隨機(jī)抽取10～13只斷頭處死，取脾臟和胰腺。所有大鼠處死前均稱重，記錄體重。

2.5 標(biāo)本處理及制備

2.5.1 脾臟與胰腺的處理 用0.9%生理鹽水洗凈表面血跡，然后置于0.4%中性甲醛中固定。

2.5.2 病理切片 脾臟、胰腺固定24 h后制作病理切片。具體過程如下：①取材：脾臟、胰腺縱切，取一塊厚約2 mm左右組織，與標(biāo)簽紙一起置于專用銅盒中；②脫水：將銅盒放在不同濃度乙醇中浸泡；③浸蠟：脫水后將銅盒依次置于苯蠟、蠟Ⅰ、蠟Ⅱ中浸泡；④包埋：浸蠟后打開銅盒，將組織置于裝有液態(tài)石蠟的銅格中，脾臟和胰腺平埋；⑤切片：待蠟塊冷卻后將其固定于切片機(jī)上切片，厚度5 mm。攤片，水溫48 ℃。貼片，用載玻片撈取無(wú)皺折的2片，并在載玻片打磨處用鉛筆標(biāo)記。65 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中烤片4 h；⑥HE染色：浸泡在二甲苯、梯度乙醇中脫蠟，然后浸泡在蘇木素、伊紅中染色；⑦透明：放入梯度乙醇、二甲苯浸泡脫水透明；⑧封片觀察：加拿大樹膠封片，蓋上蓋玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 脾臟的組織病理學(xué)觀察

光鏡下觀察造模結(jié)束第1天的正常組大鼠脾臟，鏡下可見：脾臟被膜清楚、無(wú)增厚，紅、白髓質(zhì)邊緣結(jié)構(gòu)正常，脾小體結(jié)構(gòu)正常，無(wú)明顯增生及萎縮，脾竇及血管無(wú)明顯擴(kuò)張。觀察造模結(jié)束第1天后模型組大鼠的脾臟可見：脾臟被膜清楚、無(wú)增厚，紅、白髓質(zhì)邊緣結(jié)構(gòu)正常，脾小體結(jié)構(gòu)正常，無(wú)明顯增生及萎縮，脾竇及血管無(wú)明顯擴(kuò)張，但脾小梁靜脈血管明顯擴(kuò)張充血；理中湯干預(yù)后第12天，干預(yù)組大鼠脾小梁靜脈血管無(wú)明顯擴(kuò)張充血，與正常組比較，無(wú)明顯病理改變，說明理中湯干預(yù)對(duì)脾臟組織有明顯的改善作用。見圖1。

造模結(jié)束后第1天正常組40× 造模結(jié)束后第1天后模型組20× 干預(yù)第12天后干預(yù)組20×

3.2 胰腺的組織病理學(xué)觀察

光鏡下觀察造模結(jié)束第1天正常組大鼠的胰腺組織，鏡下可見：胰腺組織中胰島數(shù)及島內(nèi)細(xì)胞較多，細(xì)胞排列整齊，胞漿豐滿，結(jié)構(gòu)清楚，胰島毛細(xì)血管蟠曲呈球狀，血管管徑基本一致，無(wú)擴(kuò)張現(xiàn)象；觀察造模結(jié)束后第1天模型組大鼠的胰腺組織可見：胰腺組織中胰島數(shù)及島內(nèi)細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化，但少數(shù)細(xì)胞呈空泡狀，胰島毛細(xì)血管無(wú)擴(kuò)張。理中湯干預(yù)12天后，胰腺組織中胰島數(shù)及島內(nèi)細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化，少數(shù)空泡狀細(xì)胞消失，細(xì)胞分布均勻，核大小基本相等，無(wú)核固縮，胰島未見毛細(xì)血管擴(kuò)張，與正常組比較，無(wú)明顯病理改變，說明理中湯干預(yù)對(duì)胰腺組織有明顯的改善作用。見圖2。

造模后第1天正常組20× 造模后第1天模型組40× 干預(yù)第12天干預(yù)組 40×

4 討論

有學(xué)者認(rèn)為無(wú)論是從解剖實(shí)質(zhì)、生理功能還是病理變化來(lái)看，胰腺應(yīng)屬于“脾”的一部分[3，4]。

4.1 脾與胰腺生理功能的相關(guān)性

就生理功能而言，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾的主要功能是運(yùn)化，即指胃在受納、腐熟水谷，將之變?yōu)槭趁雍?，再通過胃的“降濁”功能將食糜降至小腸，脾(小腸)進(jìn)一步將之化為水谷精微(“化”)，然后經(jīng)過脾之升清功能將其運(yùn)達(dá)全身(“運(yùn)”)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，飲食物消化首先是胃通過容受性舒張，接受來(lái)自食管的食物(“受納”)，并通過推進(jìn)性蠕動(dòng)進(jìn)行初步消化，使之成為食糜(“腐熟”)。食糜在小腸內(nèi)進(jìn)行進(jìn)一步的消化，而消化的過程主要依靠消化酶的作用來(lái)完成。消化酶主要來(lái)源于胰腺的外分泌液——胰液。胰液中的胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶能將糖類、脂類、蛋白質(zhì)三大類物質(zhì)分解成細(xì)小、易通過腸黏膜吸收的微粒或小分子物質(zhì)，這與中醫(yī)脾主“化”(化生精微)的功能十分相似。上述微粒或小分子物質(zhì)可被腸黏膜吸收進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而運(yùn)達(dá)全身。這與中醫(yī)脾主“運(yùn)”(運(yùn)達(dá)全身)的功能又十分相似，這些與中醫(yī)學(xué)“脾主運(yùn)化”的功能相契合，胰的功能可納于“脾”之“升清”“散精”功能范疇之中，即運(yùn)化水谷精微、運(yùn)行布散津液精氣。由此可見現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的胰腺與中醫(yī)學(xué)之“脾”在生理功能上的關(guān)系是非常密切的。

清末至民國(guó)時(shí)期醫(yī)家張山雷先生在《難經(jīng)匯注箋正·四十二難》中指出：“謂有散膏半斤，則脾不中虛，膏何可貯？今西國(guó)學(xué)者，謂胃后有甜肉一條……所生之汁，如口中津水，則古所謂散膏半斤，蓋即指此。古之所謂脾者，固并此甜肉而言……亦所以助消化者，正與古人脾運(yùn)化之義符合?！盵5]現(xiàn)代著名中醫(yī)學(xué)家任繼學(xué)先生則對(duì)“散膏”有著進(jìn)一步的論述，任繼學(xué)指出：“散膏乃由先天之精化生而成，其體有多種肌核組成，內(nèi)通經(jīng)絡(luò)血脈，為津、精之通道，外通玄府，以行氣液，故人體內(nèi)外之水精，其升降出入皆由‘散膏’行之?！盵6]按照此理論，散膏相當(dāng)于現(xiàn)今之胰腺，其功能與脾相吻合。

4.2 脾與胰腺病理變化的相關(guān)性

若太陰病(脾陽(yáng)虛證)發(fā)生時(shí)，脾陽(yáng)虛衰，運(yùn)化無(wú)權(quán)，“脾”之運(yùn)化水谷、運(yùn)化水濕的功能失職，則可出現(xiàn)納少腹脹、腹痛腹瀉或完谷不化、或肢體浮腫等癥狀。這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)胰臟外分泌功能障礙、胰酶不足時(shí)引起的“胰源性腹瀉”的狀況相一致。患者可表現(xiàn)為消化功能不良、腹水、腹痛、黃疸、發(fā)育遲緩、消瘦等。季鳳清等[7]對(duì)脾虛大鼠胰腺進(jìn)行組織化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，脾虛組胰腺泡細(xì)胞的RNA、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶和硫胺素焦磷酸酶含量和活性均低于對(duì)照組，H.E染色標(biāo)本中脾虛組胰腺泡細(xì)胞中酶原顆粒比對(duì)照組減少，說明胰腺泡細(xì)胞能量代謝降低。胰腺泡細(xì)胞在合成消化酶的過程中，要消耗大量的能量，而能量供應(yīng)不足，勢(shì)必影響消化酶的合成，導(dǎo)致消化酶的合成下降。這些研究表明脾虛證時(shí)胰腺外分泌功能減弱可能是導(dǎo)致消化吸收障礙的重要原因之一，此與脾虛證出現(xiàn)一系列消化功能下降和失常有密切關(guān)系。當(dāng)脾虛動(dòng)物經(jīng)加味四君子湯治療后，胰腺泡細(xì)胞RNA和這幾種酶活性可恢復(fù)到接近對(duì)照組水平；與自然恢復(fù)組相比，腺細(xì)胞功能狀態(tài)與正常對(duì)照組相近，表明加味四君子湯對(duì)脾虛證有良好的治療作用。

本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明：太陰病(脾陽(yáng)虛證)模型大鼠造模結(jié)束后第1天脾臟組織中脾小梁靜脈血管明顯擴(kuò)張充血；同時(shí)在模型組大鼠的胰腺組織中出現(xiàn)少數(shù)細(xì)胞呈空泡狀。而在理中湯干預(yù)第12天后，干預(yù)組大鼠脾臟組織中脾小梁靜脈血管無(wú)明顯擴(kuò)張充血；同時(shí)干預(yù)組大鼠胰腺組織中少數(shù)空泡狀細(xì)胞消失。說明理中湯干預(yù)不僅對(duì)脾臟組織有明顯的改善作用，同時(shí)對(duì)胰腺組織也有明顯的改善作用，這些變化是同步的。究其原因，主要是由于：太陰病的主要病機(jī)是脾陽(yáng)虛損、脾氣不升、寒濕內(nèi)生。一方面由于寒性收引凝滯，使氣血凝結(jié)阻滯、澀滯不通，體內(nèi)產(chǎn)生瘀血，這是脾臟組織充血形成的主要原因；另一方面由于脾與胰腺的關(guān)系較為密切，當(dāng)脾陽(yáng)虛損、運(yùn)化失司，脾氣不升時(shí)，勢(shì)必會(huì)影響到胰腺，因此在組織結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)少數(shù)細(xì)胞呈空泡狀變化，在功能上使胰腺的分泌功能低下，表現(xiàn)為胰腺外分泌功能障礙、胰酶不足，導(dǎo)致“胰源性腹瀉”的發(fā)生。而理中湯具有溫中陽(yáng)、祛寒邪、益脾氣、助運(yùn)化的作用，使脾胃升清降濁機(jī)能得以恢復(fù)。表現(xiàn)為氣血在陽(yáng)氣的推動(dòng)下，運(yùn)行暢通，瘀血得散；由于脾陽(yáng)恢復(fù)，運(yùn)化功能正常，對(duì)胰腺的影響得以消除，因此在理中湯干預(yù)12天后，脾臟充血現(xiàn)象消失的同時(shí)大鼠胰腺組織中少數(shù)空泡狀細(xì)胞也隨之消失，二者的變化是同步的。這從另一個(gè)角度進(jìn)一步說明了脾與胰腺之間存在密切的聯(lián)系，即機(jī)體發(fā)生病證時(shí)，它們的組織結(jié)構(gòu)有著同步的變化；當(dāng)針對(duì)病證進(jìn)行治療后，它們的組織結(jié)構(gòu)改善的變化又是同步的。

綜上所述，從脾與胰腺的生理功能、病理變化及組織結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，太陰病(脾陽(yáng)虛證)脾與胰腺有著密切的聯(lián)系。中醫(yī)學(xué)之“脾臟”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的胰腺關(guān)系密切，胰腺應(yīng)視為“脾”的一部分。此理論為臨床治療太陰病(脾陽(yáng)虛證)提供了有益參考。