劉春花，梁慧麗，孫承文，陶家發(fā)，鞏 華，石存斌，吳淑勤

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，廣東 廣州 510380；2.廣州普麟生物制品有限公司，廣東 廣州 510380）

【研究意義】水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)常出現(xiàn)區(qū)域特征的大規(guī)模發(fā)病流行，與病害發(fā)生最密切相關(guān)的共性問題是養(yǎng)殖水體環(huán)境惡化。水質(zhì)惡化時(shí)，正常的微生態(tài)平衡遭到破壞，致病菌被激活、快速繁殖，并分泌毒素侵襲魚體，同時(shí)由于對(duì)環(huán)境變化的應(yīng)激反應(yīng)，魚體抵抗力下降，導(dǎo)致疾病暴發(fā)或流行[1]。改善養(yǎng)殖水環(huán)境的傳統(tǒng)技術(shù)手段主要是加大換水量，但這不僅浪費(fèi)水資源，而且外排的養(yǎng)殖污水也會(huì)影響?zhàn)B殖區(qū)周圍的生態(tài)環(huán)境。常規(guī)的藥物調(diào)控方法將水體微生物、原生動(dòng)物、藻類等微型生物作為藥物干預(yù)的主體對(duì)象，雖然對(duì)病害防控有一定效果，但藥物的過量使用常引起嚴(yán)重的惡性循環(huán)，水生態(tài)系統(tǒng)失衡，疾病也因此不斷發(fā)生[2]。而通過微生物制劑優(yōu)化養(yǎng)殖水體微生物、原生動(dòng)物、藻類等微型生物多樣性，則可以維護(hù)養(yǎng)殖環(huán)境動(dòng)態(tài)相對(duì)穩(wěn)定，促進(jìn)養(yǎng)殖系統(tǒng)各層次關(guān)系的持續(xù)平衡，減少病害發(fā)生。

【前人研究進(jìn)展】研究表明，水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用微生物制劑不僅能分解和轉(zhuǎn)化水體中的有機(jī)物和無機(jī)氮等過剩物質(zhì)，提高養(yǎng)殖系統(tǒng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化效率，減少水體污染，改善水質(zhì)[3]，還可以通過與有害微生物競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生存繁殖空間等機(jī)制，抑制有害微生物的生長(zhǎng)繁殖，降低水產(chǎn)動(dòng)物的發(fā)病率[4]。但目前應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的微生物菌株大多是將農(nóng)業(yè)部允許在畜禽飼料中添加的部分微生物、或從異地養(yǎng)殖區(qū)采集的微生物作為其出發(fā)菌株，將這些原來在陸地上、畜禽消化道或不同水體環(huán)境中生存的微生物直接用于水產(chǎn)動(dòng)物，或者直接潑灑到養(yǎng)殖水體中，由于動(dòng)物生活環(huán)境與生理狀態(tài)的差異，一方面可能微生態(tài)制劑可發(fā)揮的功效有限，另一方面則有可能引起一些難以預(yù)料的生態(tài)學(xué)問題[5]。

【本研究切入點(diǎn)】區(qū)域池塘水體微型生物養(yǎng)護(hù)劑（簡(jiǎn)稱護(hù)料）[2]是中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所研發(fā)的新型微生物制劑，具有區(qū)域?qū)傩?，由養(yǎng)殖當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)池塘分離的土著微生物發(fā)酵當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)生產(chǎn)次產(chǎn)品如麩皮、米糠、豆粕等制成，包含養(yǎng)殖池塘泥水、微生物菌群富集培養(yǎng)物和微生物培養(yǎng)料等組分，可根據(jù)不同養(yǎng)殖時(shí)期的需要，調(diào)整培養(yǎng)物料配比制成不同C/N比值的護(hù)料，與飼料關(guān)聯(lián)使用，并適時(shí)調(diào)節(jié)水體總堿度和總硬度，以維持養(yǎng)殖水體生態(tài)環(huán)境動(dòng)態(tài)穩(wěn)定，促進(jìn)健康養(yǎng)殖?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究通過在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)水族缸模擬的池塘生態(tài)環(huán)境使用護(hù)料，評(píng)價(jià)護(hù)料對(duì)水質(zhì)因子、浮游藻類、原生動(dòng)物及魚體的養(yǎng)護(hù)作用，以探討微型生物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中維持水體生態(tài)環(huán)境動(dòng)態(tài)穩(wěn)定的作用機(jī)理與調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2015年分別從南沙、清遠(yuǎn)草魚養(yǎng)殖池塘采集塘泥及塘水，分裝在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置于南向窗臺(tái)的4個(gè)透光玻璃水族缸（長(zhǎng)49 cm×寬24 cm×高34 cm）中，使缸底鋪滿3～4 cm塘泥，對(duì)各水族缸分別編號(hào)，各試驗(yàn)組的采樣背景及建模時(shí)情況見表1，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置2個(gè)重復(fù)。塘A、塘B位于廣州市南沙，塘A養(yǎng)殖魚體健康，生態(tài)條件良好；塘B養(yǎng)殖魚體發(fā)病，采樣時(shí)已使用抗生素類魚藥；塘C是清遠(yuǎn)的一口荒廢老塘，水體有異味。處理1、處理3均采樣自塘A，但處理1從采樣過程引入水族缸的時(shí)間較處理3晚，藻體在不利環(huán)境中死亡過多，建模時(shí)藻類數(shù)量較少。試驗(yàn)期間對(duì)水族缸充氣，以底泥不被吹起為宜。以窗臺(tái)的日照為光源，且每天于8: 30—18: 00開燈補(bǔ)充光照，當(dāng)水溫降至18℃以下時(shí)，用電暖器室內(nèi)加溫。

表1 建模時(shí)各試驗(yàn)組情況Table 1 Situation of each experimental group at modeling time

1.2 實(shí)驗(yàn)魚放養(yǎng)與存活監(jiān)測(cè)

從廣東肇慶某苗場(chǎng)購(gòu)進(jìn)鳙魚（Aristichthys nobilis）（體長(zhǎng)12±1 cm）、羅非魚（Oreochromis mossambicus）（體長(zhǎng) 10±1 cm）、清道夫魚（Pterygoplichthys multiradiatus）（ 體 長(zhǎng) 10±1 cm）等，暫養(yǎng)1周以上，分別向各處理引入健康的鳙魚3尾、羅非魚2尾、清道夫魚2尾，用粗蛋白含量為40%的浮性飼料投喂各處理試驗(yàn)魚，撈出浮于水面未攝食完畢的全部剩料，陰、雨天氣時(shí)少投或停料，魚體死亡后立即撈出，計(jì)數(shù)。

1.3 微型生物養(yǎng)護(hù)劑的應(yīng)用

從南沙、清遠(yuǎn)草魚養(yǎng)殖區(qū)的代表性高產(chǎn)魚塘獲得護(hù)料的制備材料，按照專利“一種區(qū)域養(yǎng)殖水體微型生物養(yǎng)護(hù)劑及其制備方法”的方法制成護(hù)料[2]。處理1、2、4使用護(hù)料制成的料水，作為試驗(yàn)組；處理3不使用護(hù)料，作為對(duì)照組。根據(jù)不同養(yǎng)殖時(shí)期的水質(zhì)情況，護(hù)料在不同試驗(yàn)階段的物料成分及C/N比值不同，開始模擬護(hù)料養(yǎng)護(hù)試驗(yàn)當(dāng)天記作D1，D1—D24時(shí)護(hù)料的C/N比值平均為18.18，D25—D60時(shí)C/N比值平均為21.75，D60—D90時(shí)C/N比值平均為24.12。

1.4 指標(biāo)監(jiān)測(cè)

1.4.1 水質(zhì)指標(biāo)監(jiān)測(cè) 將采樣的泥水裝入水族缸，當(dāng)缸內(nèi)水體澄清開始模擬護(hù)料養(yǎng)護(hù)試驗(yàn)，分別于 D1、5、10、20、30、40、50、60、90 用美國(guó)維賽儀器YIS ProPlu水質(zhì)分析儀測(cè)量缸內(nèi)pH值、氨氮、溶氧、水溫、亞硝酸鹽等各項(xiàng)水質(zhì)指標(biāo)，于D1、D90用廣州普麟生物制品有限公司的總堿度、總硬度檢測(cè)試劑盒分別測(cè)量缸內(nèi)水體的總堿度和總硬度。

1.4.2 浮游藻類監(jiān)測(cè) 于D1、5、10、20、30、40、50、60、90早上9:30采集水樣，用魯哥氏液固定、保存。計(jì)數(shù)浮游藻類的細(xì)胞數(shù)，以公式（1）計(jì)算藻類密度；計(jì)數(shù)密度較大藻類的數(shù)量，計(jì)算優(yōu)勢(shì)種及主要種類的百分比；參考《中國(guó)淡水藻類志》等資料鑒定藻類種類，無法定種時(shí)鑒定到屬；以公式（2）計(jì)算浮游藻類的Margalef多樣性指數(shù)。

式中，N為每升水中浮游藻類細(xì)胞數(shù)，A為計(jì)數(shù)結(jié)果的平均值，B為計(jì)數(shù)的血球計(jì)數(shù)板中方格數(shù)，C為濃縮的倍數(shù)。

式中，d為多樣性指數(shù)，S為種類數(shù)，N為個(gè)體數(shù)。

1.4.3 底棲原生動(dòng)物監(jiān)測(cè) 于D10、20、30、40、50、60采集PFU泡沫（大小：50 mm×75 mm×65 mm，孔徑：100～150 μm）中的水樣，計(jì)數(shù)原生動(dòng)物數(shù)量，以公式（3）計(jì)算原生動(dòng)物密度；根據(jù)原生動(dòng)物的形態(tài)，參考《水生生物學(xué)》等資料記錄底棲原生動(dòng)物的種類；以公式（2）計(jì)算原生動(dòng)物的Margalef多樣性指數(shù)。

式中，N為每升水中原生動(dòng)物的數(shù)量，VD為沉淀體積，VS為采樣體積，n為計(jì)算個(gè)數(shù)，C為計(jì)算體積。

2 結(jié)果與分析

2.1 水體水質(zhì)理化因子

水體總堿度、總硬度有地域差異（表2），處理1、2、3（南沙）的總堿度、總硬度水平均高于處理4（清遠(yuǎn)）。試驗(yàn)期間，各處理pH值、溶氧、氨氮等水質(zhì)理化因子如表3所示，pH值7.1～8.6，溶氧4.03～8.01 mg/L，D1—D10水溫偏高、為 27～28℃，D20—D40 水溫為 23～24℃，D50—D90時(shí)氣溫偏低，通過在室內(nèi)用電暖器加熱，使水溫保持18～19℃；D1—D10各組的水體氨氮及亞硝酸鹽濃度差異極大，處理2及處理4的氨氮與亞硝酸鹽濃度極高；隨后水體氨氮水平降低明顯，從D20起各處理間無明顯差異，維持較低水平；亞硝酸鹽水平在處理1、2、3中逐步降低，但處理4在D60前無明顯變化，D60后降至其他試驗(yàn)處理的水平。

表2 水體總堿度、總硬度檢測(cè)結(jié)果Table 2 Testing result of total alkalinity and total hardness in water

表3 微型生物養(yǎng)護(hù)劑對(duì)水質(zhì)因子、浮游藻類及原生動(dòng)物的養(yǎng)護(hù)作用Table 3 Curing effect of micro biological conserving stuff on water quality factors, phytoplanktonand protozoa

2.2 浮游藻類的平均密度、種類與多樣性

整個(gè)采樣期間共有141種浮游藻類（圖1），隸屬6門70屬，綠藻門和藍(lán)藻門的種類數(shù)較多，分別有45屬100種、11屬18種，各占總種數(shù)的70.9%、12.8%。藻類的起始平均密度、種類數(shù)、多樣性指數(shù)（表3、圖2）均是處理4＞處理3＞處理2＞處理1，試驗(yàn)過程中，浮游藻類震蕩增加，在護(hù)料的作用下，試驗(yàn)組比對(duì)照組增速快、變動(dòng)幅度窄，總體增長(zhǎng)更平穩(wěn)，尤以來源于健康養(yǎng)殖塘的處理1特征明顯；D90時(shí)平均密度、種類數(shù)及多樣性指數(shù)分別依次處理4＞處理1＞處理3＞處理2、處理2＞處理4＞處理1＞處理3、處理4＞處理2＞處理1＞處理3；處理1的平均密度及種類數(shù)明顯超出對(duì)照處理3，來源于不健康水體的處理2、處理4，其種類數(shù)與多樣性指數(shù)明顯增加，處理2的增長(zhǎng)趨勢(shì)比處理4更明顯，但處理2的平均密度仍均低于對(duì)照處理3。藻類優(yōu)勢(shì)種及主要種類的變動(dòng)情況（表4）顯示，使用護(hù)料可將主要浮游藻類種類養(yǎng)護(hù)為綠藻門、硅藻門種類，并降低單一優(yōu)勢(shì)種類的比例。

圖1 浮游藻類的種類組成Fig.1 Species composition of phytoplankton

表4 藻類主要種類的變動(dòng)情況Table 4 Changes in major species of phytoplankton

圖2 不同處理的浮游藻類平均密度（A）、種類數(shù)（B）與多樣性指數(shù)（C）Fig.2 The mean density（A）, species number（B）and diversity index（C） of phytoplankton under different treatments

2.3 底棲原生動(dòng)物的平均密度、種類與多樣性

試驗(yàn)中，各處理以輪蟲、纖毛蟲為主，使用護(hù)料后水質(zhì)得到改善，輪蟲、纖毛蟲數(shù)量增加。原生動(dòng)物平均密度、種類數(shù)量及多樣性的變動(dòng)情況如表3、圖3所示。試驗(yàn)開始時(shí)，各處理原生動(dòng)物的平均密度依次為處理3＞處理1＞處理2＞處理4，種類數(shù)及多樣性指數(shù)均依次為處理3＞處理1＞處理4＞處理2，試驗(yàn)期間呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，D60時(shí)各處理的平均密度、種類數(shù)量及多樣性指數(shù)均是處理1＞處理3＞處理2＞處理4。在護(hù)料的作用下，處理1的平均密度及多樣性指數(shù)明顯超出對(duì)照處理3；來源于不健康水體的處理2、處理4，其物種豐富度明顯增加，處理2的增長(zhǎng)趨勢(shì)比處理4更明顯，但平均密度與多樣性指數(shù)仍低于對(duì)照處理3；至D60，處理1、處理2的種類數(shù)各增加3種，處理3、處理4均增加1種。

2.4 放養(yǎng)魚類的存活情況

圖3 不同處理的原生動(dòng)物平均密度（A）、種類數(shù)（B）與多樣性指數(shù)（C）Fig.3 The mean density（A）, species number（B） and diversity index（C） of protozoa under different treaments

放養(yǎng)魚類的存活情況如表5所示，使用護(hù)料后，各處理存活率依次為處理1（85.7%）＞處理2（57.1%）＞平均數(shù)（50.0%）＞處理4=處理3（28.6%）。4個(gè)處理中，鳙魚在處理1、處理2中均有1尾存活，在處理3、處理4組中全部死亡；羅非魚在處理1中全部存活，處理2中死亡1尾，處理3、處理4中死亡2尾；清道夫魚在處理1、處理2中全部存活，處理3、處理4中均死亡1尾。

表5 放養(yǎng)魚類存活情況Table 5 The survival statistics of fish

2.5 護(hù)料對(duì)健康池塘水體的模擬養(yǎng)護(hù)效果

處理1、處理3均取樣于南沙一口健康池塘，水質(zhì)良好，水體微生物物種豐富，生態(tài)穩(wěn)定。處理1在采樣后處理過遲，使得試驗(yàn)開始時(shí)浮游藻類、原生動(dòng)物損失較多，其平均密度、種類數(shù)及多樣性指數(shù)均低于對(duì)照處理3。使用護(hù)料的處理1，浮游藻類D20時(shí)平均密度達(dá)到峰值，在D20—D30期間短暫降低后，藻類數(shù)量持續(xù)快速增長(zhǎng)，整個(gè)試驗(yàn)期間小球藻（Chlorella vulgaris）始終維持較高比例。原生動(dòng)物增長(zhǎng)迅速，D20時(shí)即在數(shù)量上超過對(duì)照處理3；D30時(shí)種類數(shù)達(dá)到最多種，并保持不變，多樣性指數(shù)達(dá)峰值，隨后稍微降低。魚體存活率高達(dá)85.7%，對(duì)水質(zhì)要求較高的鳙魚也存活良好。相比于此，不使用護(hù)料的對(duì)照處理3，采樣后處理及時(shí)，浮游藻類及原生動(dòng)物的起始平均密度、種類數(shù)和多樣性指數(shù)均高于處理1，但試驗(yàn)期間浮游藻類平均密度的震蕩幅度大于處理1，D30—D40期間單一種類小球藻占比極高、達(dá)70%，而D50時(shí)又驟降至20%，同時(shí)出現(xiàn)25%藍(lán)藻門藻類銀灰平裂藻（Merismopedia glauca）；隨著氣溫降低、陰雨天時(shí)間延長(zhǎng)，D60后銀灰平裂藻激增、占比高達(dá)70%。原生動(dòng)物增加強(qiáng)度不如處理1，增速慢，數(shù)量少，穩(wěn)定性低，甚至在D30前的多樣性指數(shù)呈下降趨勢(shì)。魚類存活率低、僅28.6%，遠(yuǎn)低于處理1，且僅剩對(duì)水質(zhì)要求不高的羅非魚及清道夫。試驗(yàn)結(jié)果表明，在健康塘使用護(hù)料后，浮游藻類與原生動(dòng)物得到養(yǎng)護(hù)，放養(yǎng)魚類的存活率提高。

2.6 護(hù)料對(duì)非健康池塘水體的模擬養(yǎng)護(hù)效果

處理2的泥、水來自南沙一口發(fā)病池塘，試驗(yàn)起始時(shí)構(gòu)建的模擬生態(tài)條件差，氨氮水平較高，浮游藻類與原生動(dòng)物的平均密度、種類數(shù)、生物多樣性指數(shù)均較低；處理4采樣于清遠(yuǎn)一口荒廢老塘，該塘底為黏土底質(zhì)，水體總堿度、總硬度水平偏低，氨氮水平極高，水體有異味，采樣時(shí)藍(lán)藻暴發(fā)。在護(hù)料的作用下，兩個(gè)試驗(yàn)組的整體情況均得到改善，處理4在試驗(yàn)開始1周后水體異味消失，處理2、處理4的氨氮水平均在D20時(shí)降低，與來源于健康塘的處理1、處理3水平相當(dāng)，浮游藻類與原生動(dòng)物的種群平均密度提高，種類數(shù)與多樣性指數(shù)明顯增長(zhǎng)，處理2的魚類存活率為57.1%，明顯高于未用護(hù)料的對(duì)照處理3。但另一方面，因處理2的來源背景較差，D60后受氣溫降低的影響，藻類密度緩慢降低，嚙蝕隱藻（Cryptomonas erosa）與赤眼裸藻（Euglena sanguinea）增殖較快，提示水質(zhì)有潛在變差的風(fēng)險(xiǎn)。而處理4起始條件差，且對(duì)水質(zhì)起緩沖調(diào)節(jié)作用的堿度與硬度偏低，魚群結(jié)構(gòu)不合理，隨著后期氣溫降低等多因素的影響下，D50時(shí)開始出現(xiàn)較高比例的銀灰平裂藻，在D90時(shí)大量暴發(fā)，種群數(shù)量高達(dá)70%，原生動(dòng)物的生物多樣性水平偏低，魚體存活率也很低、僅28.7%。由處理2及處理4的試驗(yàn)結(jié)果可知，只有在使用護(hù)料的同時(shí)結(jié)合調(diào)整魚群結(jié)構(gòu)、適當(dāng)提高堿度、硬度等綜合調(diào)控方式，才能養(yǎng)護(hù)池塘的生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定，促進(jìn)健康養(yǎng)殖。

3 討論

3.1 護(hù)料對(duì)水質(zhì)理化因子的影響

養(yǎng)殖水體的自身污染以及對(duì)養(yǎng)殖地區(qū)水域生態(tài)系統(tǒng)的危害已經(jīng)成為當(dāng)前嚴(yán)重的環(huán)境問題，利用微生物自身生理特性進(jìn)行水質(zhì)凈化的生物法，可以改善溶解氧，減少pH值波動(dòng)，降低氨氮、硫化氫等有害物質(zhì)，使水環(huán)境保持相對(duì)穩(wěn)定，有效改善水質(zhì)狀況，使水體中有益菌種成為優(yōu)勢(shì)種群，從而減少病菌的滋生[6-7]。劉春花等[8]在草魚（Ctenopharyngodon idellus）養(yǎng)殖過程中潑灑一種商業(yè)有益微生物制劑，有利于優(yōu)化養(yǎng)殖水體環(huán)境，與空白對(duì)照組相比，有益微生物組水體中的氨氮、亞硝酸氮鹽含量顯著降低。李曉英等[9]在中國(guó)對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）養(yǎng)殖池塘中施放了一種復(fù)合微生態(tài)制劑，可以使水體中的氨氮含量維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，亞硝酸鹽和硫化氫的含量也顯著低于對(duì)照池。本研究使用的護(hù)料是一種復(fù)合微生物制劑，其功能比單一微生物制劑廣泛、作用穩(wěn)定、效果更佳，作用于非健康池塘水體處理2及處理4時(shí)，降氨氮的效果顯著，并在模擬試驗(yàn)期間維持各處理的水質(zhì)因子相對(duì)穩(wěn)定。

3.2 護(hù)料對(duì)浮游藻類的影響

研究發(fā)現(xiàn)，不同的浮游藻類對(duì)氨氮和硝酸鹽的利用情況有差別，Glibert等[10]報(bào)道，硅藻對(duì)硝酸氮的利用超過氨氮，在硝酸鹽豐富的水體中硅藻往往是優(yōu)勢(shì)種，而在氨氮豐富的水體中，藍(lán)藻和綠藻對(duì)氮的利用效率要高于其他藻類，此時(shí)藍(lán)藻和綠藻將占據(jù)優(yōu)勢(shì)。而微生物則可以分解蝦池中對(duì)藍(lán)藻類等生長(zhǎng)有積極影響的豐富有機(jī)質(zhì)，并且微生物的自身分泌物對(duì)不同的藻類有不同影響[11]。莊惠如等[12]發(fā)現(xiàn)光合細(xì)菌（Photosynthetic Bacteria）對(duì)水中藻類有明顯影響，使得有益的硅藻、綠藻數(shù)量增加，藍(lán)藻數(shù)量降低。對(duì)南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）養(yǎng)殖池塘使用不同微生物制劑，De等[13]發(fā)現(xiàn)，浮游植物結(jié)構(gòu)會(huì)受影響，甲藻的生物量降低；Lukwambe等[14]則發(fā)現(xiàn)，浮游植物的生物量減少，其中增加了硅藻門的比例，降低了藍(lán)藻門的比例。本研究中，護(hù)料對(duì)模擬池塘水體的浮游藻類有良好的養(yǎng)護(hù)作用，使用護(hù)料后，藻類密度及多樣性指數(shù)增速快、變動(dòng)幅度窄，可將主要浮游藻類種類養(yǎng)護(hù)為綠藻門、硅藻門種類，可能是由于護(hù)料微生物菌株為經(jīng)過持續(xù)馴化的土著微生物，可有效對(duì)模擬試驗(yàn)組水體中含氮營(yíng)養(yǎng)物進(jìn)行選擇性利用，持續(xù)分解的代謝產(chǎn)物更適合當(dāng)?shù)厮w綠藻門、硅藻門藻類的繁殖，促使藻類穩(wěn)定增長(zhǎng)，同時(shí)某些微生物菌株對(duì)特定藻類有抑制或溶解作用，使藍(lán)藻不能暴發(fā)性增長(zhǎng)，維持藻相結(jié)構(gòu)的相對(duì)穩(wěn)定。

3.3 護(hù)料對(duì)原生動(dòng)物的影響

在池塘生態(tài)系統(tǒng)中，原生動(dòng)物密切地與其生存的環(huán)境直接接觸，能直接、迅速地反應(yīng)環(huán)境變化，發(fā)生規(guī)律性變化[15-16]。池塘投入微生態(tài)制劑后，形成新的微生物群落，從而影響水生態(tài)系統(tǒng)中的營(yíng)養(yǎng)鹽及能量在微生物群落中的流動(dòng)途徑及其各種微生物之間的代謝偶聯(lián)關(guān)系，接種有益微生物的水體中浮游動(dòng)物數(shù)量最多，生物量最大[17]。Zink等[18]將微生物制劑應(yīng)用到褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）培養(yǎng)中，可以增加輪蟲種群的數(shù)量和種群穩(wěn)定性。這些結(jié)論與本研究相同，原生動(dòng)物的增長(zhǎng)與水體餌料生物（如藻類、細(xì)菌）和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如氮）數(shù)量密切相關(guān)，使用護(hù)料的試驗(yàn)組，微生物菌株有效地降解水中有機(jī)物，為浮游藻類的繁殖提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)藻類繁殖，這些藻類的光合作用，又為好氧菌、原生動(dòng)物提供氧氣，從而形成一個(gè)良性的生態(tài)循環(huán)，促使原生動(dòng)物的平均密度顯著增加，種類數(shù)變化趨勢(shì)相對(duì)穩(wěn)定，多樣性指數(shù)得以豐富。

3.4 護(hù)料對(duì)魚體的影響

微生物制劑一方面通過在空間、時(shí)間、定居部位和營(yíng)養(yǎng)等展開競(jìng)爭(zhēng)，抑制致病菌的生存和繁殖[19]，另一方面通過刺激機(jī)體產(chǎn)生干擾素，有效提高免疫球蛋白濃度和巨噬細(xì)胞活性，激發(fā)機(jī)體的免疫機(jī)能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[20]，對(duì)水生動(dòng)物的生存起促進(jìn)作用。如芽孢桿菌（Bacillus）成為優(yōu)勢(shì)菌種后能產(chǎn)生枯草素等物質(zhì)，可抑制其它細(xì)菌的生長(zhǎng)，減少甚至消滅病原體，減少疾病發(fā)生[21]。也有研究報(bào)道，微生物制劑的有益菌可在動(dòng)物腸道內(nèi)繁殖，產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體的消化吸收功能，促進(jìn)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)[22]。本研究也進(jìn)一步驗(yàn)證了微生物制劑對(duì)魚體的促進(jìn)作用，使用護(hù)料可顯著提高放養(yǎng)魚類的存活率。

3.5 護(hù)料的優(yōu)勢(shì)特征分析

雖然微生物制劑在動(dòng)物的整個(gè)養(yǎng)殖過程都可以使用，但不同養(yǎng)殖時(shí)期的劑量及作用效果卻不盡相同，在不同的水質(zhì)條件下發(fā)揮出的作用與功效也不一樣，有可能在使用后不適應(yīng)當(dāng)?shù)貧夂?、生態(tài)環(huán)境，導(dǎo)致效應(yīng)期延長(zhǎng)或使用效果不明顯。在改良水質(zhì)環(huán)境時(shí)，微生物制劑的菌株不可避免會(huì)與土著菌株發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)[23]。而當(dāng)前作為水產(chǎn)用微生態(tài)制劑的出發(fā)菌株大多是來自畜禽消化道內(nèi)的原籍菌株，這些微生物對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物生理狀況和生存環(huán)境究竟有何種程度的影響，尚缺乏系統(tǒng)研究，也沒有明確結(jié)論[5]。此外，有研究證明碳氮比能改變養(yǎng)殖水環(huán)境中細(xì)菌群落和功能[24-25]，通過補(bǔ)充碳水化合物以提高水體碳氮比，可促進(jìn)異養(yǎng)微生物利用水體中氮合成自身蛋白，從而降低水體氮化合物、提高飼料利用率[26]，一些能抑制有害病菌的益生菌比例則會(huì)隨著碳氮比升高而升高[25，27]，而添加不同碳源對(duì)水體水質(zhì)、藻類和微生物群落的調(diào)控存在差異[28]。本研究護(hù)料使用的菌株是經(jīng)持續(xù)馴化的養(yǎng)殖當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)池塘的土著菌族，菌株培養(yǎng)基組方C/N動(dòng)態(tài)調(diào)整，以匹配不同養(yǎng)殖時(shí)期的投喂飼料粗蛋白水平與池塘N積累程度?；谒a(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)病與區(qū)域水土、氣候、養(yǎng)殖習(xí)慣等關(guān)系密切，往往形成區(qū)域特征的發(fā)病規(guī)律，及養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)不盡合理，池塘C/N比值普遍較低（一般低于10）等現(xiàn)象，池塘微生物養(yǎng)護(hù)劑的應(yīng)用關(guān)聯(lián)了“護(hù)料-飼料-濾食性魚類搭配”三元素，在不同養(yǎng)殖時(shí)期，使用承載相應(yīng)期土著微生物族群和相匹配C/N的護(hù)料，優(yōu)化區(qū)域養(yǎng)殖水體微生物、原生動(dòng)物、藻類等微型生物多樣性，以維護(hù)養(yǎng)殖環(huán)境動(dòng)態(tài)穩(wěn)定，進(jìn)而促進(jìn)養(yǎng)殖系統(tǒng)各層次關(guān)系的動(dòng)態(tài)平衡，使得養(yǎng)殖過程不易發(fā)生疾病。

4 結(jié)論

本研究以養(yǎng)護(hù)養(yǎng)殖水體微型生物多樣性為導(dǎo)向，以護(hù)料為載體，將土著良好菌族在同區(qū)域內(nèi)共享，關(guān)鍵銜接養(yǎng)殖對(duì)象、飼料、水體總堿度與總硬度等系統(tǒng)元素，目標(biāo)是促進(jìn)“微生物-原生動(dòng)物-藻類”“養(yǎng)殖對(duì)象-飼料-環(huán)境” “病原-宿主-環(huán)境”等多層次關(guān)系的平衡，使得病原在養(yǎng)殖系統(tǒng)多樣性機(jī)制中共存而不致病。水族缸中模擬的池塘養(yǎng)殖環(huán)境在護(hù)料的作用下，水質(zhì)因子維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，藻類密度及多樣性指數(shù)增速更快、變動(dòng)幅度更窄，更易將主要浮游藻類種類養(yǎng)護(hù)為不產(chǎn)生藻毒素的綠藻門、硅藻門種類，原生動(dòng)物種類和數(shù)量均增加明顯，顯著提高魚體存活率。微生物養(yǎng)護(hù)技術(shù)適合于養(yǎng)殖區(qū)域規(guī)?；⒏咝?、精準(zhǔn)應(yīng)用，操作簡(jiǎn)單、成本低，有利于水產(chǎn)養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)持續(xù)改善，可降低區(qū)域養(yǎng)殖病害發(fā)生率、改善養(yǎng)殖產(chǎn)品品質(zhì)、提高養(yǎng)殖效益。