張艷，李慧冬，丁蕊艷，郭長(zhǎng)英，毛江勝，陳子雷*

1. 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所（濟(jì)南 250100）；2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南 250100）；3. 山東省食品質(zhì)量與安全檢測(cè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南 250100）

中國(guó)是梨的起源地之一，也是目前梨栽培面積最大的國(guó)家[1]。為了防治病蟲(chóng)害和提高梨的外觀品質(zhì)，有機(jī)磷農(nóng)藥在梨園中被廣泛使用。它具有經(jīng)濟(jì)、高效、方便等特點(diǎn)[2]，是果品中農(nóng)藥殘留的主要種類(lèi)之一[3]。但它殘留量高、急性毒性強(qiáng)，具有致癌性和生殖毒性，長(zhǎng)期接觸此類(lèi)農(nóng)藥可引起免疫功能損害[4]，部分有機(jī)磷農(nóng)藥代謝產(chǎn)物還可在食品中殘留富集，對(duì)人體健康危害巨大[5]。因此，有必要建立一種準(zhǔn)確、快速、可靠的農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法，對(duì)梨中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定。

目前，有機(jī)磷農(nóng)藥的主要檢測(cè)方法有氣相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、高效液相色譜法[8]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9]。其中，氣相色譜-質(zhì)譜法可以達(dá)到更好的分離效果和檢測(cè)效果，能夠?qū)Χ喾N有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)，目前水果中定量模式主要依靠選擇離子模式（SIM）檢測(cè)[10]。Pereira等[11]用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)儀以選擇離子監(jiān)測(cè)模式測(cè)定了椰汁中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，該方法檢測(cè)限為0.12～0.86 μg/mL，方法快捷、準(zhǔn)確度較高。張兵等[12]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以選擇離子監(jiān)測(cè)方式對(duì)蔬菜中含有的包括有機(jī)磷、氨基甲酸酯及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)等15種農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行定性分析和定量分析。Qu等[13]采用氣相色譜-四極桿質(zhì)譜儀以選擇離子監(jiān)測(cè)方式建立了快速測(cè)定韭菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的方法。王海鳳等[14]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以選擇離子監(jiān)測(cè)方式對(duì)果蔬中含有的包括有機(jī)磷進(jìn)行檢測(cè)，其分離效果較好。但目前關(guān)于梨中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速前處理及檢測(cè)方法研究報(bào)道仍較少。

PSA、C18和GCB是QuEChERS方法凈化樣品時(shí)最常選用的吸附劑，PSA可用于去除各種有機(jī)酸、色素、一些糖類(lèi)和脂肪酸[15]。因此，試驗(yàn)采用QuEChERS法結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜以選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式同時(shí)對(duì)梨中21種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，該方法操作簡(jiǎn)便，成本低，以期為梨等水果中多農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

梨（市售）；正己烷、乙腈（HPLC級(jí)，美國(guó)Fisher公司）；N-丙基乙二胺吸附劑（PSA，40～60 μm）：天津博納艾杰爾公司；乙酰甲胺磷、滅線(xiàn)磷、治螟磷、甲拌磷、內(nèi)吸磷、地蟲(chóng)硫磷、氯唑磷、磷胺、甲拌磷亞砜、馬拉硫磷、甲拌磷砜、倍硫磷、對(duì)硫磷、水胺硫磷、甲基異柳磷、硫環(huán)磷、殺撲磷、苯線(xiàn)磷、丙溴磷、亞胺硫磷、蠅毒磷共21種有機(jī)磷農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度為10 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所（天津）。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 5977B-7890A氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；BSA224S-CW萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；LDZS-2高速離心機(jī)（北京京立離心機(jī)公司）；MS3 D S25漩渦混合器（德國(guó)IKA公司）；T25 D均質(zhì)機(jī)（德國(guó)IKA公司）；RV10 D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司）；50 mL離心管（美國(guó)康寧公司）；0.22 μm有機(jī)系微孔濾膜（北京科瑞?？茖W(xué)儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 GC-MS條件

色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。色譜柱溫度程序：40 ℃保持1 min，然后以30 ℃/min程序升溫至130 ℃，再以5 ℃/min升溫至250 ℃，再以10 ℃/min升溫至300 ℃，保持 5 min。載氣，氦氣，純度≥99.999%；流速，1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度，280 ℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量，1 μL。

質(zhì)譜條件：離子源EI（70 eV）；離子源溫度，230 ℃；接口溫度，280 ℃；采集方式，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式；溶劑延遲，6 min。

1.3.2 樣品前處理

將鮮梨樣品去柄勻漿。準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g樣品，加入20.0 mL乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿3 min，加入5 g氯化鈉，渦旋3 min，靜置分層，在離心機(jī)中12 000 r/min 離心5 min，吸取10 mL上清液于PSA凈化管，搖勻，在離心機(jī)中12 000 r/min離心5 min，取5 mL上清液于250 mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋蒸至干，用2.5 mL正己烷定容，裝進(jìn)樣小瓶，混勻，上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用丙酮稀釋?zhuān)渲?.4 μg/mL農(nóng)藥混標(biāo)溶液。首先采用Full Scan模式對(duì)21種有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和添加混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的梨樣品進(jìn)行全掃，全掃描范圍為m/z 40～450，掃描結(jié)果用特征離子挑選，對(duì)挑選結(jié)果進(jìn)行NIST譜庫(kù)比對(duì)。21種有機(jī)磷農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及添加混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)梨樣品的總離子流圖見(jiàn)圖1。對(duì)比數(shù)據(jù)庫(kù)中的特征離子信息，以確認(rèn)各目標(biāo)化合物的保留時(shí)間進(jìn)行定性分析。

圖1 總離子流圖

根據(jù)全掃結(jié)果，選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM），每種農(nóng)藥選擇3～4個(gè)特征離子，選擇一個(gè)豐度高、荷質(zhì)比較大的離子作為定量離子。按照農(nóng)藥出峰順序采用分時(shí)間段監(jiān)測(cè)模式，在某一時(shí)間段監(jiān)測(cè)一個(gè)或幾個(gè)待測(cè)物質(zhì)，使得特征離子在單位時(shí)間內(nèi)被掃描的次數(shù)增多，從而降低背景干擾，提高信噪比。通過(guò)對(duì)質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化，最終確定了質(zhì)譜條件，這21種有機(jī)磷農(nóng)藥均得到了很好的分離，且峰型良好。21種有機(jī)磷農(nóng)藥的分子式、保留時(shí)間和定性、定量離子見(jiàn)表1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和檢出限

將10 μg/mL的21種混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液用1.3.2方法處理后的梨提取溶液稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛确秶?.01～1.0 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按選定的色譜條件和質(zhì)譜條件，用選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得到21種有機(jī)磷農(nóng)藥的線(xiàn)性方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，在0.01～1.0 μg/mL線(xiàn)性范圍內(nèi)，21種目標(biāo)化合物線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）在0.990 7～0.999 4之間，檢出限在0.2～2.6 μg/kg之間。

表1 21種有機(jī)磷農(nóng)藥的保留時(shí)間及質(zhì)譜條件參數(shù)

2.3 回收率與精密度

在相應(yīng)的線(xiàn)性范圍內(nèi)對(duì)梨空白樣品進(jìn)行三個(gè)水平（0.01，0.1和0.5 mg/kg）的添加回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表3。21種有機(jī)磷農(nóng)藥在0.01，0.1和0.5 mg/kg 3個(gè)添加水平下的回收率在85.4%～100.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.9%～6.8%之間。用此方法測(cè)定梨樣品中21種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度均較好，能夠滿(mǎn)足殘留分析的要求。

表3 21種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率精密度

2.4 實(shí)際樣品檢測(cè)

根據(jù)試驗(yàn)建立的試驗(yàn)條件，對(duì)市場(chǎng)采集的100批梨樣品進(jìn)行檢測(cè)，在1批梨中檢出馬拉硫磷農(nóng)藥，其含量為0.032 mg/kg，低于GB 2763—2016[16]中梨的農(nóng)藥最大殘留限量值（Maximum residue limit，MRL）2 mg/kg，其余20種有機(jī)磷農(nóng)藥均未檢出。研究表明，該方法可用于梨中21種有機(jī)磷農(nóng)藥的同時(shí)測(cè)定。

3 結(jié)論

試驗(yàn)采用QuEChERS前處理技術(shù)，與氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法相結(jié)合，梨樣品采用乙腈提取，氯化鈉鹽析后，經(jīng)N-丙基乙二胺（PSA）凈化，采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方法檢測(cè)，外標(biāo)法定量，建立了一種簡(jiǎn)便、快速測(cè)定梨中21種有機(jī)磷農(nóng)藥的分析方法。該方法在保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和再現(xiàn)性的同時(shí)，操作簡(jiǎn)單、效率高，適合實(shí)際檢測(cè)工作中大批量梨樣品的檢測(cè)。