符 群，王夢(mèng)麗，李 娜，吳 桐

（東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

莢蒾屬ViburnumLinn.為忍冬科Caprifoliaceae的一類(lèi)落葉灌木植物，溫帶、亞熱帶地區(qū)均有分布，天然資源頗為豐富[1]。莢蒾植物的活性成分主要為多酚類(lèi)[2]、黃酮類(lèi)[3]、多糖類(lèi)、揮發(fā)油、萜類(lèi)、生物堿類(lèi)、甾體類(lèi)等[4-6]；其根、莖、葉及成熟果實(shí)均可入藥，有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、健脾消食、鎮(zhèn)咳祛痰、通經(jīng)活絡(luò)、抗衰老等功效[7-10]。暖木條莢蒾Viburnum burejaeticumRegel et Herd 又名修枝莢蒾，是莢蒾屬分布較廣的一類(lèi)，產(chǎn)于中國(guó)大部分地區(qū)，朝鮮、日本、歐洲等地也有分布，資源極為豐富[11-13]，目前該植物多作為綠化植物，葉及嫩枝入藥可治療瘡疥、皮膚瘙癢、風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)炎類(lèi)疾病，果實(shí)無(wú)毒可食，但是口味不佳，相關(guān)深入開(kāi)發(fā)研究報(bào)道很少，處于落果荒山的現(xiàn)狀，造成天然資源極大的浪費(fèi)。

天然活性物質(zhì)的高效提取是對(duì)原料精深加工、獲得高附加值產(chǎn)品的關(guān)鍵技術(shù)[14]。溶劑提取法往往存在提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大、提取效率低的問(wèn)題。超聲波具有特有的空化作用、機(jī)械效應(yīng)及熱效應(yīng)，可增大介質(zhì)的分子穿透力，增強(qiáng)對(duì)原料細(xì)胞壁破壞[15]，配合溶劑提取可使提取物有效溶出，提高得率，縮短時(shí)間和能耗，彌補(bǔ)溶劑提取的缺點(diǎn)，且設(shè)備形式可根據(jù)需要靈活設(shè)計(jì)為罐體式、隧道式、極板式等，操作簡(jiǎn)單、無(wú)污染，產(chǎn)業(yè)化程度高[16-18]。

人的疾病和衰老主要來(lái)源于體內(nèi)自由基的氧化作用。在人體正常代謝中，自由基處于生成和消除的動(dòng)態(tài)平衡，若自由基生成過(guò)多或清除過(guò)少，蓄積的自由基則會(huì)損害機(jī)體，增加高血壓、糖尿病、腫瘤等疾病的發(fā)病率。相對(duì)于藥物合成類(lèi)抗氧化劑，天然食源性植物類(lèi)抗氧化劑具有無(wú)毒副作用、來(lái)源廣泛、且可直接作用于自由基或通過(guò)破壞自由基鏈的反應(yīng)，從而有效地抑制或緩解疾病的發(fā)病率等優(yōu)點(diǎn)更受到社會(huì)的認(rèn)可及研究者的關(guān)注[19-20]。

本研究采用超聲波輔助乙醇溶劑法對(duì)暖木條莢蒾果抗氧化成分進(jìn)行提取，以DPPH·清除率為指標(biāo)優(yōu)化工藝條件，以獲得最大的利用價(jià)值；并初步測(cè)定果實(shí)中主要成分及其與抗氧化指標(biāo)的相關(guān)性，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)旨在填補(bǔ)暖木條莢蒾高值化研發(fā)領(lǐng)域的空白，為莢蒾屬植物的高效利用提供科學(xué)依據(jù)與理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與主要試劑

暖木條莢蒾鮮果：黑龍江省蘿北林業(yè)局林場(chǎng)提供。

蘆?。ā?8%），Solarbia；抗壞血酸（≥98%），Sigma；1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)，Sigma；沒(méi)食子酸，上海鼓臣生物科技有限公司；牛血清蛋白，生工生物工程（上海）股份有限公司；2,2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS），Sigma；其它化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器設(shè)備

T6 新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；SB25-12DTD 超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；酶標(biāo)分析 儀（EPOCH12）：BioTek Instruments，Inc.；XSE204 電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器中國(guó)有限公司）。

1.2.1 原料預(yù)處理

原料去雜，45 ℃烘干，破碎為60 目粉末，冷藏保存。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取2 g 原料粉，用70%乙醇溶液進(jìn)行提取。在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取提取工藝中的顯著影響因素：料液比1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g/mL，提取時(shí)間30、40、50、60、70 min，提取溫度30、40、50、60、70 ℃，超聲功率270 W，進(jìn)行提取。研究3 組因素對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響，每組實(shí)驗(yàn)做3 組平行。

1.2.3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用中心組合Box-Benhnken Design 設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以DPPH·清除率為響應(yīng)值，建立回歸模型，得到最佳提取條件。

1.2.4 DPPH·清除率的測(cè)定

配制濃度為2×10-4mol/L 的DPPH·乙醇溶液，取提取液2 mL 于10 mL 具塞試管中，加入2 mL DPPH·乙醇溶液，混勻，室溫避光放置30 min，75%乙醇調(diào)零，在波長(zhǎng)517 nm 下測(cè)吸光值（Ai）；同時(shí)取2 mL95%的乙醇代替DPPH·乙醇溶液，測(cè)定吸光值（Aj）；再取2 mL DPPH·乙醇溶液代替提取液，測(cè)定吸光值（A0）；每組試驗(yàn)做3 組平行，按照公式（1）計(jì)算清除率[21-22]。

1.2.5 ·ABTS+清除率的測(cè)定

取等體積7 mmol/L 的ABTS 溶液和2.45 mmol/L 的過(guò)硫酸鉀溶液配制混合液，于23 ℃下避光反應(yīng)12～16 h，制備ABTS+溶液。用蒸餾水稀釋基液（40～50 倍）使其在波長(zhǎng)734 nm 處吸光度（A0）為0.700±0.005，制得ABTS+工作液。取 0.1 mL 供試液于10 mL 具塞試管中，與3.9 mL上述工作液混合，23 ℃下避光反應(yīng)6 min，以蒸餾水作為空白對(duì)照，于734 nm 波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度值（A）；每組試驗(yàn)做3 組平行，按照公式（2）計(jì)算清除率[23-24]。

1.2.6 羥基自由基清除率的測(cè)定

取10 mL 比色管，加入1 mL 0.15 mg/mL 的1,10- 鄰二氮菲溶液，3.8 mL pH 值7 的PBS 緩沖溶液，1.5 mL 0.2 mg/mL 的FeS04溶液，再加入供試液，混勻，最后加入蒸餾水定容至刻度，于37 ℃水浴恒溫1 h，在波長(zhǎng)536 nm 處測(cè)定吸光度（A0）；受損傷管中加入1 mL 濃度為0.01%的NaOH 溶液代替供試液，測(cè)定吸光值（A2）。未受損傷管加入蒸餾水代替供試液，測(cè)定吸光值（A1）；每組試驗(yàn)做3 組平行，按照公式（3）計(jì)算清除率[25-26]。

1.2.7 固形物提取率的測(cè)定

將提取濾液放入恒溫干燥箱中，揮干溶劑，得干燥固形物質(zhì)量（m1），原料質(zhì)量為m2，按公式（4）計(jì)算提取率，每組試驗(yàn)做3 組平行。

1.2.8 主要活性成分的測(cè)定

1）總黃酮的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[15]，以不同濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

式（5）中：C為樣液黃酮質(zhì)量濃度（mg/mL）；V為樣液體積（mL）；M為樣品質(zhì)量（g）

總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=2.706 2x+0.002，R2=0.999 5。

2）可溶性多糖的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[27]，制作測(cè)定葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

式（6）中：C為測(cè)得的樣品溶液的葡萄糖質(zhì)量濃度（mg/mL）；V為樣液體積（mL），本實(shí)驗(yàn)取 100 mL；m為供試品質(zhì)量（mg）；

可溶性多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=13.643x+0.063 3，R2=0.990 1。

3）總多酚的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[22]，以不同濃度的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

式（7）中：C為沒(méi)食子酸濃度（mg/mL）；V為樣液體積（mL）；N為稀釋倍數(shù)；M為樣品質(zhì)量（g）。

總多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=9.83x+0.009 7，R2=0.999 4。

4）可溶性蛋白的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[28]，以不同濃度的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

式（8）中：C為測(cè)得的樣品溶液的可溶性蛋白濃度 （μg/mL）；M為供試品質(zhì)量（mg）。

可溶性蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=1.535 3x-0.010 5，R2=0.991 2。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016、Origin 8.6、Design-Expert 8.0.6進(jìn)行繪圖及數(shù)據(jù)分析、SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取率及DPPH·清除率的單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 料液比的影響

在提取時(shí)間50 min、提取溫度50 ℃、超聲功率270 W 條件下，用70 %乙醇進(jìn)行提取，研究不同水平的料液比對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響，每組實(shí)驗(yàn)做3 組平行，結(jié)果如圖1所示。

由圖1可得，隨著提取溶劑比例的增大，清除率逐漸增大，當(dāng)料液比為1∶20 時(shí)莢蒾果提取物有最大DPPH·清除率（92.21±0.86）%；在1∶15時(shí)固形物提取率最高為（55.03±0.79）%，而此時(shí)清除率偏低，說(shuō)明此時(shí)提取的物質(zhì)不完全具有抗氧化活性，同時(shí)溶劑的大量使用帶來(lái)成本的大幅提高，因此選取料液比1∶20 為最佳條件。

2.1.2 提取時(shí)間的影響

在料液比（1∶20）g/mL、提取溫度50 ℃、超聲功率270 W 條件下，用70 %乙醇進(jìn)行提取，研究不同提取時(shí)間對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響，每組實(shí)驗(yàn)做3 組平行結(jié)果如圖2所示。

圖1 料液比對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響Fig.1 Effect of ratio of material to liquid on DPPH radical scavenging capacity and solid matter extraction rate

圖2 提取時(shí)間對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響Fig.2 Effect of extraction time on DPPH radical scavenging capacity and solid matter extraction rate

由圖2可知，隨時(shí)間的增加超聲波的機(jī)械效應(yīng)、氣蝕作用、空化作用增強(qiáng)，原料活性物質(zhì)逐漸被溶出，莢蒾果提取物對(duì)DPPH·清除率持續(xù)上升，當(dāng)時(shí)間50 min 時(shí)達(dá)到最大值（94.65±0.914 02)%；時(shí)間進(jìn)一步增加易造成物料升溫使提取物失活，導(dǎo)致清除率下降。固形物提取率隨時(shí)間增加逐步降低，時(shí)間為50 min 時(shí)最低為（55.18±0.67）%，抗氧化活性卻逐步增強(qiáng)，說(shuō)明提取物中的抗氧化有效成分充分溶出。可見(jiàn)超聲時(shí)間越長(zhǎng)，活性物質(zhì)提取越充分；但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)又對(duì)活性物質(zhì)起到破壞作用，且提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)在生產(chǎn)實(shí)踐時(shí)造成能源浪費(fèi)，選擇提取時(shí)間50 min 為最優(yōu)值。

2.1.3 提取溫度的影響

在料液比（1∶20）g/mL、提取時(shí)間50 min、超聲功率270 W 條件下，用70 %乙醇進(jìn)行提取，研究不同的溫度對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響，每組實(shí)驗(yàn)做3 組平行，結(jié)果如圖3所示。

圖3 提取溫度對(duì)DPPH·清除率、固形物提取率的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on DPPH radical scavenging capacity and solid matter extraction rate

由圖3可得，隨溫度的提高，分子間的運(yùn)動(dòng)加速，活性物質(zhì)更易溶出，莢蒾果提取物對(duì)DPPH·清除率逐步增大，在60 ℃時(shí)達(dá)到最大值，（95.59±0.98）%，在70 ℃時(shí)清除率顯著下降，可見(jiàn)過(guò)高的溫度影響提取物活性，導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)性雜質(zhì)溶出，降低莢蒾果提取物對(duì)DPPH·清除率。隨溫度的提高，固形物提取率也逐步提高，可得提取物中活性成分比例相應(yīng)增加，抗氧化能力提高。因此選取60 ℃為最佳提取溫度。

2.2 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果

1）根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以DPPH·清除率為響應(yīng)值，利用Design-Expert 軟件設(shè)計(jì)試驗(yàn)水平，進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸擬合，得DPPH·清除率（Y）對(duì)料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取溫度（C）的回歸方程為：

Y=96.60+0.28A-0.15B-0.70C+0.34AB-0.52AC+ 0.57BC-1.46A2-1.05B2-1.18C2。

2）方差分析，結(jié)果如表1所示。

由表1可得，模型的F值為22.29，P＜0.01，說(shuō)明該模型極顯著，失擬項(xiàng)P＞0.05，不顯著。R2=0.996 3，校正決定系數(shù)(R2Adj)=0.922 9，說(shuō)明擬合度好，多項(xiàng)式回歸方程對(duì)于實(shí)際情況來(lái)說(shuō)較吻合，試驗(yàn)誤差小，方程的顯著性、可靠性高，可以反應(yīng)響應(yīng)值的變化。故可用回歸方程對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

對(duì)回歸模型顯著性分析可得：提取溫度（C）對(duì)DPPH·清除率有極顯著影響（P＜0.01），AC、BC、A2、B2、C2對(duì)DPPH·清除率均有顯著影響（P＜0.05），A、B、AB 影響不顯著（P＞0.05）。由F值可得，各因素對(duì)DPPH·清除率的影響順序?yàn)椋禾崛囟龋–）＞料液比（A）＞提取時(shí)間（B）。

表1 回歸模型方程系數(shù)及方差分析?Table1 Regression coefficients of equation and variance analysis

3）響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)圖分析

分析圖4～6 可得出料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取溫度（C）之間的交互作用對(duì)DPPH·清除率的影響。由圖4可知，料液比和時(shí)間的變化曲面均相對(duì)平緩，可得料液比、時(shí)間對(duì)DPPH·清除率均不顯著。由圖6可知，溫度的響應(yīng)曲面比時(shí)間的響應(yīng)曲面陡峭，說(shuō)明溫度對(duì)DPPH·清除率較時(shí)間更為顯著，與方差分析相符。當(dāng)?shù)雀呔€(xiàn)呈密集的橢圓形和馬鞍形時(shí)，說(shuō)明兩因素交互作用顯著；呈現(xiàn)圓形時(shí)說(shuō)明因素間交互作用不顯著[15]。由圖5、圖6可知，等高線(xiàn)偏橢圓形，說(shuō)明料液比和溫度、時(shí)間和溫度對(duì)DPPH·清除率的交互作用顯著。由圖4可知，等高線(xiàn)呈現(xiàn)圓形，說(shuō)明料液比和提取時(shí)間之間的交互作用不顯著，與方差的分析結(jié)果相符。

4）最佳條件的確定和試驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)證

圖4 料液比和提取時(shí)間對(duì)DPPH·清除率交互影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)Fig.4 Response surface diagram and contour plots of interaction effects of solid-liquid ratio and extraction time on DPPH radical scavenging rate

圖5 料液比和提取溫度對(duì)DPPH·清除率交互影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)Fig.5 Response surface diagram and contour plots of interaction effects of solid-liquid ratio and extraction temperature on DPPH radical scavenging rate

圖6 提取時(shí)間和提取溫度對(duì)DPPH 清除率交互影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)Fig.6 Response surface diagram and contour plots of interaction effects of extraction time and extraction temperature on DPPH radical scavenging rate

通過(guò)響應(yīng)面分析得到DPPH·清除率的最佳工藝條件為：料液比1∶21.6，提取時(shí)間39.2 min，提取溫度55.1 ℃；同時(shí)乙醇濃度70%，超聲功率為270 W，在此條件下DPPH·清除率的預(yù)測(cè)值為96.750 5%。為實(shí)際操作中更便于產(chǎn)業(yè)化控制，調(diào)整最佳工藝為：料液比1∶20，提取時(shí)間39 min，提取溫度55 ℃，乙醇濃度70%，超聲功率270 W。在此條件下進(jìn)行最優(yōu)工藝的驗(yàn)證，得到實(shí)際情況下的DPPH·清除率為（97.32±1.73）%，并測(cè)得此時(shí)固形物提取率為（56.28±0.96）%。

按照同樣方式，采用單一的溶劑法進(jìn)行提?。弦罕?∶20，提取時(shí)間39 min，提取溫度55 ℃，乙醇濃度70%），測(cè)得提取率為（43.78±0.72）%，DPPH·清除率為（90.07±1.67）%，說(shuō)明超聲輔助提取可大幅度提高提取效率，并顯著增強(qiáng)DPPH·清除率，可以有效提升抗氧化活性成分的溶出。

2.3 暖木條莢蒾果提取物抗氧化性分析

按照超聲輔助的優(yōu)化條件，進(jìn)行莢蒾果抗氧化成分的提取，測(cè)定不同濃度的莢蒾提取物對(duì)·ABTS+清除率、OH·清除率、DPPH·清除率的能力，并與同濃度的VC進(jìn)行抗氧化性比較，計(jì)算IC50值，分析莢蒾果抗氧化能力。

2.3.1 ·ABTS+清除率

以同質(zhì)量濃度的VC為陽(yáng)性對(duì)照考察莢蒾果提取物的·ABTS+清除能力，結(jié)果如圖7所示：

由圖7可得，在質(zhì)量濃度0～2.5 mg/mL 之間VC和莢蒾果提取物對(duì)·ABTS+清除力均呈現(xiàn)逐漸上升的線(xiàn)性關(guān)系，隨質(zhì)量濃度繼續(xù)上升，·ABTS+清除能力上升緩慢，當(dāng)質(zhì)量濃度為5mg/mL 時(shí)，VC清除·ABTS+的能力達(dá)到（99.73±1.649）%、莢蒾果提取物為（90.71±1.72）%。經(jīng)分析可得出VC清除·ABTS+的IC50=0.503 mg/mL，莢蒾果的醇提物清除·ABTS+的IC50=1.352 mg/mL?？寡趸瘎┨峁╇娮踊驓湓涌汕宄杂苫?，導(dǎo)致ABTS溶液顏色發(fā)生變化，導(dǎo)致吸光值的變化，進(jìn)而測(cè)其清除自由基的能力。莢蒾果提取物具有一定的·ABTS+清除力，可作為良好抗氧化原料的來(lái)源。

圖7 莢蒾果提取物對(duì)·ABTS+的清除能力Fig.7 Scavenging capacity of the fruits of Viburnum extraction on ABTS radicals

2.3.2 羥自由基清除率

由圖8可得，在質(zhì)量濃度為0.01～ 0.05 mg/mL 的范圍內(nèi)，表現(xiàn)出良好的劑量依賴(lài)關(guān)系。隨著濃度不斷增加，VC和莢蒾果提取物對(duì)OH·的清除能力均明顯上升，趨勢(shì)相似，但VC變化程度偏大。質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL 時(shí)清除率分別為（85.68±1.09）%、（58.63±1.69）%。分析得出VC清除OH·的IC50=0.039 mg/mL，莢蒾果提取物清除OH·的IC50=0.045 mg/mL，兩種物質(zhì)的IC50差異不顯著（P＜0.05），可以說(shuō)明莢蒾果提取物對(duì)OH·具有較強(qiáng)的清除能力，且與VC無(wú)顯著性差異。莢蒾果提取物清除OH·可能是因?yàn)槠浠钚詺渑c-OH自由基結(jié)合生成水，中斷了中間有色產(chǎn)物的積累。

2.3.3 DPPH·清除率

由圖9可得，在質(zhì)量濃度為2～10 μg/mL 的范圍內(nèi)，VC對(duì)DPPH·清除力逐步上升，10 μg/mL 時(shí)為（98.72±1.62）%；分析得出VC清除DPPH·的IC50=3.406 μg/mL。在相同的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著提取物質(zhì)量濃度的增加，對(duì)DPPH·清除力先緩慢上升，大于8 μg/mL 時(shí)，清除能力大幅度上升，10 μg/mL 時(shí)為（68.28±1.12）%。分析得出莢蒾果的提取物清除DPPH·的IC50=7.859 μg/mL。莢蒾果能清除DPPH·可能是因?yàn)樘崛∥镝尫艢潆x子，可配對(duì)孤對(duì)電子，使DPPH·生成穩(wěn)定的化合物。

圖8 莢蒾果提取物對(duì)OH·的清除能力Fig.8 Scavenging capacity of the fruits of Viburnum extraction on OH radicals

圖9 莢蒾果提取物對(duì)DPPH·的清除能力Fig.9 Scavenging capacity of the fruits of Viburnum extraction on DPPH radicals

2.4 提取物中主要活性成分含量以及與抗氧化相關(guān)性分析

分別按照線(xiàn)性回歸方程及公式（5～8）計(jì)算莢蒾果中主要成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表20

表2 莢蒾果提取物中主要活性成分的含量Table2 The content of main active components in the extraction of the fruits of Viburnum

由表可2 得：莢蒾果提取物中活性成分的含量：可溶性多糖＞總多酚＞總黃酮＞蛋白質(zhì)?？扇苄远嗵呛投喾拥暮匡@著高于其它天然漿果資源，從而使其具有相關(guān)活性功能，可作為植物抗氧化劑的原料來(lái)源。

莢蒾果的抗氧化能力與總黃酮、總多酚、可溶性多糖和可溶性蛋白之間的相關(guān)性見(jiàn)表3。

表3 莢蒾果主要成分與抗氧化活性的相關(guān)性?Table3 Correlation between antioxidant capacity and antioxidant content

由表3可得：主要成分與抗氧化活性的比較，總黃酮、可溶性多糖、總多酚含量與DPPH·清除能力、·OH 清除能力、·ABTS+的清除能力之間存在極顯著相關(guān)性，綜合比較3 種抗氧化指標(biāo)，總多酚相關(guān)性最強(qiáng)可溶性多糖和總黃酮次之；可溶性蛋白與DPPH·清除率、·OH 清除能力無(wú)顯著相關(guān)性，與DPPH 的清除能力顯著相關(guān)。由此可得，與其他成分相比總多酚與3 種抗氧化指標(biāo)的相關(guān)性最高，因此總多酚為暖木條莢蒾果實(shí)抗氧化活性的主要成分。

3 結(jié)論與討論

DPPH·是一種比較穩(wěn)定的非生理自由基，能夠被具有抗氧能力的物質(zhì)清除，清除率越大表明抗氧化能力越強(qiáng)，常用于定量衡量天然活性物質(zhì)或食品的抗氧化能力。本研究采用超聲輔助法以固形物提取率及DPPH·清除率為單因素考察指標(biāo)，以DPPH·清除率為響應(yīng)值，優(yōu)化了暖木條莢蒾果中抗氧化活性物質(zhì)最佳提取工藝條件，最終得固形物提取率為（56.28±0.96）%，DPPH·清除率為（97.32±1.73）%。較非超聲法提取率高出12.5 % （P＜0.01），DPPH·清除率高出7.25%（P＜0.01），可實(shí)現(xiàn)高效提取，表明超聲波輔助提取可有效保持莢蒾果提取物的抗氧化活性?？赡苁遣煌幚磉^(guò)程活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生不同的改變，超聲輔助可使活性成分與活性作用有關(guān)的位點(diǎn)暴露出來(lái)，從而顯著提高其抗氧化活性。

暖木條莢蒾果提取物對(duì)·ABTS+清除率、OH·清除率、DPPH·清除率的能力的IC50值分別為1.352、0.045、7.859 μg/mL，且對(duì)OH·清除率與VC相比無(wú)顯著性差異。莢蒾果提取物中以可溶性多糖、總多酚的含量居多，與其他活性成分相比總多酚與3 種抗氧化指標(biāo)相關(guān)性系數(shù)最大且極顯著（P＜0.01），可得總多酚為莢蒾果抗氧化成分的主要來(lái)源。相關(guān)文獻(xiàn)研究也表明，多酚類(lèi)化合物具有較強(qiáng)的抗氧化性[29]，可以通過(guò)抑制自由基產(chǎn)生、直接清除自由基、激活機(jī)體抗氧化的體系等方式進(jìn)行體內(nèi)的抗氧化作用，且抗氧化性可能是其發(fā)揮功效的藥理基礎(chǔ)。

綜上所述，超聲波的3 大效應(yīng)協(xié)同乙醇溶劑，能較好地提高提取效率，降低生產(chǎn)成本，且良好保留暖木條莢蒾果實(shí)的抗氧化活性，豐富了暖木條莢蒾植物活性功能研究領(lǐng)域的空白。當(dāng)然，僅研究了超聲輔助醇法這一種提取方式，其他的提取方式是否能更高效地提高其抗氧化活性有待于進(jìn)一步研究。如：唐仕榮等[30]采用溶劑回流、超聲波、微波、超聲波微波協(xié)同萃取和亞臨界水萃取5 種方法提取余甘子多酚，發(fā)現(xiàn)亞臨界水萃取的多酚提取率和抗氧化能力明顯高于其他方法，此方式可通過(guò)調(diào)節(jié)亞臨界水的狀態(tài)實(shí)現(xiàn)選擇性萃取，避免了有機(jī)溶劑殘留，被視為綠色環(huán)保的高效提取技術(shù)；何力等[31]采用DPPH·自由基清除率研究微波輔助提取黃岑多酚提取的抗氧化能力，結(jié)果表明多酚得率明顯優(yōu)于傳統(tǒng)回流提取，因?yàn)槲⒉芡ㄟ^(guò)偶極子旋轉(zhuǎn)和離子傳導(dǎo)兩種方式同時(shí)加熱，加劇分子的碰撞頻率，使多酚分子更易從藥材內(nèi)部擴(kuò)散到萃取溶劑中且大大縮短了加熱時(shí)間，尤其適合極性分子的萃取；徐彩紅等[32]采用超聲輔助酶法提取玉米皮總多酚，通過(guò)生物技術(shù)酶解破壁來(lái)改善提取效果，避免了提取溶劑的污染，測(cè)得其具有較強(qiáng)的抗氧化活性。關(guān)于活性物質(zhì)提取方式還有：減壓-超聲法、半仿生法、鹽析法等，這些方法均可適當(dāng)?shù)倪\(yùn)用到暖木條莢蒾果實(shí)活性物質(zhì)的提取，以期篩選簡(jiǎn)便且高效的方式。此外關(guān)于暖木條莢蒾果多酚的結(jié)構(gòu)、其他單體的組成成分以及其體內(nèi)抗氧化活性機(jī)制與多酚的構(gòu)效關(guān)系是也今后研究的重點(diǎn)。