王曉嬌 練孝春 劉正人

摘要：目的 ?通過(guò)檢測(cè)埃茲蛋白在浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌及正常乳腺組織中的表達(dá)，探究埃茲蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)的臨床意義。方法 ?隨機(jī)選取南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院40例浸潤(rùn)性乳腺癌患者及32例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者，另外選擇同期來(lái)我院健康體檢者22例。通過(guò)免疫組化鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶法（S-P）法分別檢測(cè)埃茲蛋白在22例正常乳腺組織、32例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌組織和40例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)，參照病理結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 ?埃茲蛋白在40例浸潤(rùn)性乳腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率為72.50%、在32例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌的陽(yáng)性表達(dá)率為40.63%、在正常乳腺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率13.64%，浸潤(rùn)性乳腺癌中埃茲蛋白的表達(dá)高于其他兩種組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;埃茲蛋白在G3期乳腺癌組織中的表達(dá)高于在G1～G2期乳腺癌組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;埃茲蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽(yáng)性表達(dá)率高于在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中的陽(yáng)性表達(dá)率，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01）;埃茲蛋白在<40歲的患者中的陽(yáng)性表達(dá)率低于在年齡≥40歲的患者中的表達(dá)率，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著（P<0.01）;埃茲蛋白在PR陽(yáng)性患者中的陽(yáng)性表達(dá)率低于在PR陰性患者中的表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;乳腺癌患者中埃茲蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及年齡呈正相關(guān)（P<0.05），與PR呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）;埃茲蛋白在浸潤(rùn)性潤(rùn)腺癌中的表達(dá)與乳腺癌臨床分期、脈管侵犯、腫瘤大小、患者月經(jīng)狀態(tài)以及Her-2、ER、Ki-67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 ?埃茲蛋白在乳腺癌和正常乳腺組織中的表達(dá)不同，對(duì)判斷乳腺腫瘤性質(zhì)具有重要參考意義;此外，埃茲蛋白能夠幫助判斷乳腺癌的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后，可能啟發(fā)乳腺癌新的靶向治療。

關(guān)鍵詞：乳腺癌;埃茲蛋白;侵襲;轉(zhuǎn)移;免疫組化

中圖分類號(hào)：R737.9 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.027

文章編號(hào)：1006-1959（2019）21-0088-04

Abstract：Objective ?To investigate the clinical significance of ezrin expression in breast cancer tissues by detecting the expression of ezrin in invasive breast cancer， intraductal carcinoma of the breast and normal breast tissue. Methods ?40 patients with invasive breast cancer and 32 patients with intraductal carcinoma of the breast in the First Affiliated Hospital of Nanchang University were randomly selected. In addition， 22 healthy subjects were enrolled in our hospital. The expression of ezrin in 22 normal breast tissues， 32 breast ductal carcinoma tissues and 40 invasive breast cancer tissues was detected by immunohistochemical streptavidin-peroxidase （S-P） method. The analysis was performed with reference to the pathological results. Results ?The positive expression rate of ezrin in 40 cases of invasive breast cancer was 72.50%， the positive expression rate in 32 cases of breast ductal carcinoma was 40.63%， and the positive expression rate in normal breast tissue was 13.64%.The expression of ezrin in invasive breast cancer was higher than that in the other two tissues，the difference was statistically significant （P<0.05）; the expression of ezrin in G3 breast cancer tissues was higher than that in G1～G2 breast cancer tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）; The positive expression rate of ezrin in patients with lymph node metastasis was higher than that in patients without lymph node metastasis， the difference was statistically significant （P<0.01）; The positive expression rate of ezrin in patients <40 years old was lower than that in patients aged 40 years or older， the difference was statistically significant （P<0.01）; the positive expression of ezrin in PR positive patients the rate was lower than that in PR-negative patients，the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of ezrin in breast cancer patients was positively correlated with histological grade， axillary lymph node metastasis and age （P<0.05），negative correlation with PR （P<0.05）; expression of ezrin in invasive adenocarcinoma and clinical stage of breast cancer， vascular invasion， tumor size， patient's menstrual status and Her-2， ER， Ki-67 there was no correlation in expression （P>0.05）. Conclusion ?The expression of ezrin in breast cancer and normal breast tissue is different， which has important reference significance for judging the nature of breast tumor. In addition， ezrin can help determine the metastatic potential and prognosis of breast cancer， and may inspire new targets of breast cancer treatment.

Key words：Breast cancer;Ezrin;Invasion;Metastasis;Immunohistochemistry

乳腺癌（breast cancer）是女性惡性腫瘤中最常見的一種，侵襲和轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者生存和預(yù)后的重要因素[1]。多項(xiàng)研究表明，埃茲蛋白與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有著密切的聯(lián)系[2]。然而，目前對(duì)埃茲蛋白促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)埃茲蛋白在浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌及正常乳腺組織中的表達(dá)，參照病理分析埃茲蛋白對(duì)浸潤(rùn)性乳腺癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用，旨在探索其在乳腺癌中的臨床意義，現(xiàn)在報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1材料來(lái)源 ?隨機(jī)選取南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的第一次手術(shù)且術(shù)前均未經(jīng)新輔助化療及內(nèi)分泌等其他治療的，有完整的臨床病理和隨訪資料的乳腺腫瘤患者72例，均為女性，另外選擇同期來(lái)我院健康體檢者22例。40例浸潤(rùn)性乳腺癌患者年齡28～72歲，平均年齡（41.55±11.58）歲;32例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者年齡28～72歲，平均年齡（43.09±11.45）歲;22例健康體檢者年齡28～73歲，平均年齡（46.64±12.34）歲。浸潤(rùn)性乳腺癌按照腫瘤TNM 分期Ⅰ～Ⅳ期分別為 4例、24例、9例和3例。

1.2試劑 ?埃茲蛋白單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Immunoway公司，一抗?jié)舛扰浔葹?∶100。S-P試劑盒、DBA試劑盒購(gòu)買自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3方法 ?結(jié)合研究期間患者的病理結(jié)果，采用免疫組化鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶法（S-P法）分別檢測(cè)埃茲蛋白在浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌和正常乳腺組織中的表達(dá)，并根據(jù)腫瘤TNM分期分級(jí)。S-P法按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，以試劑盒內(nèi)的陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照，用 PBS液代替一抗為陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定 ?定位：在20倍光學(xué)顯微鏡下（埃茲蛋白陽(yáng)性通常表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，呈黃色或棕黃色顆粒），觀察不同乳腺組織埃茲蛋白染色的情況和分布。定性：計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率：隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞/張切片。百分率≥10%，定為陽(yáng)性片（+）;百分比<10%，定為陰性片（-）。根據(jù)Mathew[3]等推薦的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)：-：無(wú)表達(dá);+：<50%為細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)或者染色較淺;++：50%～70%陽(yáng)性表達(dá)且深染;+++：>70%且深染。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?采用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料采用（n）表示，行？字2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，相關(guān)性分析采用線性趨勢(shì)檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2結(jié)果

2.1埃茲蛋白在不同乳腺組織中的表達(dá) ?浸潤(rùn)性乳腺癌組織中埃茲蛋白表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色或棕褐色顆粒彌漫性分布（圖1），埃茲蛋白在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為72.50%（29/40）;埃茲蛋白在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌組織中主要以棕黃色或棕褐色顆粒彌散分布在細(xì)胞質(zhì)中，少部分呈淺黃色染色分布在導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜上（圖2），其在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為40.63%（13/32）;埃茲蛋白在正常乳腺組織主要呈淺黃色分布于乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜上，其在正常乳腺組織的陽(yáng)性表達(dá)率為13.64%（3/22）。浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌及正常乳腺組織中的埃茲蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，浸潤(rùn)性乳腺癌中埃茲蛋白的表達(dá)與其他兩種組織比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

存在惡性程度高、易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，Her-2基因擴(kuò)增是乳腺癌患者總體生存率及復(fù)發(fā)的負(fù)性預(yù)測(cè)因子[19]，其預(yù)測(cè)價(jià)值高于激素受體狀態(tài)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等多數(shù)其他預(yù)后因子。埃茲蛋白的表達(dá)與這些因素具有相關(guān)性說(shuō)明埃茲蛋白可能與乳腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后相關(guān)。已有研究顯示年輕乳腺癌比年長(zhǎng)乳腺癌預(yù)后差[20]，本研究與之不同，本次結(jié)果顯示40歲及以上患者的埃茲蛋白陽(yáng)性率高于40歲以下患者。因一般年輕乳腺癌具有高淋巴轉(zhuǎn)移率、高組織學(xué)分級(jí)、高臨床分期、高三陰性比例及腫塊大的特點(diǎn)，預(yù)期設(shè)想實(shí)驗(yàn)結(jié)果埃茲蛋白的表達(dá)與年齡呈負(fù)相關(guān)，與實(shí)際結(jié)果存在差異，這可能與實(shí)驗(yàn)樣本量少及乳腺癌病理分型有關(guān)。

總之，不同的生理狀態(tài)下埃茲蛋白生物學(xué)功能也不同，其異常過(guò)度表達(dá)，既能抑制乳腺惡性腫瘤細(xì)胞的凋亡，同時(shí)還可增加細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。埃茲蛋白對(duì)判斷乳腺腫瘤的良惡性以及指導(dǎo)治療乳腺癌具有重大意義。此外，埃茲蛋白能夠幫助判斷乳腺癌的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后，可能啟發(fā)新的乳腺癌靶向治療。當(dāng)然，埃茲蛋白在乳腺癌中的作用機(jī)制需更深層次的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]蘭柯，李文翰，徐子森，等.卡培他濱在治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌中作用的Meta分析[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2015，11（4）：425-429.

[2]劉宏，張陽(yáng)德.Ezrin蛋白與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009，19（19）：952.

[3]于興燕，于東紅.Ezrin 蛋白在腫瘤中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2015，36（23）：4278-4280.

[4]孔界男，周憲春，韓龍哲，等.甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌中埃茲蛋白（ezrin）和SIX1蛋白表達(dá)水平的臨床病理意義[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2016，14（2）：236-239.

[5]Penchev VR，Chang YT，Begum A，et al.Ezrin Promotes Stem Cell Properties in Pancreatic Ductal Adenocarcinoma[J].Mol Cancer Res，2019，17（4）：929-936.

[6]Xie YH，Li LY，He JZ，et al.Heat shock protein family B member 1 facilitates ezrin activation to control cell migration in esophageal squamous cell carcinoma[J].Int J Biochem Cell Biol，2019（112）：79-87.

[7]Slik K，Kurki S，Korpela T，et al.Ezrin expression combined with MSI status in prognostication of stage Ⅱ colorectal cancer[J].PLoS One，2017，12（9）：e0185436.

[8]李運(yùn)華，劉紹華，歐陽(yáng)堅(jiān)，等.乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)變化及其與臨床分期的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2017，57（20）：58-59.

[9]馬小斌，王西京，劉小旭，等.Ezrin在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008，16（3）：362-364.

[10]Li N，Kong J，Lin Z，et al.Ezrin promotes breast cancer progression by modulating AKT signals [J].Br J Cancer，2019，120（7）：703-713.

[11]Ghaffari A，Hoskin V，Turashvili G，et al.Intravital imaging reveals systemic ezrin inhibition impedes cancer cell migration and lymph node metastasis in breast cancer[J].Breast Cancer Res，2019，21（1）：12.

[12]方軍.Ezrin蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（8）：1048-1049.

[13]Antelmi E，Cardone RA，Greco MR，et al.ss1 integrin binding phosphorylates ezrin at T567 to activate a lipid raft signalsome driving invadopodia activity and invasion[J].PLoS One，2013，8（9）：e75113.

[14]Mak H，Naba A，Varma S，et al.Ezrin phosphorylation on tyrosine 477 regulates invasion and metastasis of breast cancer cells[J].BMC Cancer，2012（12）：82.

[15]Jarvinen TA，Pelto-Huikko M，Holli K，et al Estrogen receptor beta is coexpressed with ERalpha and PR and associated with nodal status， grade， and proliferation rate in breast cancer[J].Am J Pathol，2000，156（1）：29-35.

[16]Itoh M，Iwamoto T，Matsuoka J，et al.Estrogen receptor（ER）mRNA expression and molecular subtype distribution in ER-negative/progesterone receptor-positive breast cancers[J].Breast Cancer Res Treat，2014，143（2）：403-409.

[17]Aleskandarany MA，Green AR，Benhasouna AA，et al.Prognosis value of proliferation assay in the luminal，HER2-positive，and triple-negative biologic classes of breast cancer[J].Breast Cancer Res，2012（14）：R3.

[18]Falck AK，Bendahl PO，Chebil G，et al.Biomarker expression and St Gallen molecular subtype classification in primary tumours，synchronous lymph node metastases and asynchronous relapses in primary breast cancer patients with 10 years' follow-up[J].Breast Cancer Res Treat，2013，140（1）：93-104.

[19]黃小娥.Her-2蛋白表達(dá)與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的相關(guān)性研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生雜志，2011，35（10）：39-40.

[20]秦穎，張同先.青年乳腺癌臨床病理特點(diǎn)分子分型及預(yù)后分析[J].中國(guó)腫瘤臨床，2014，14（4）：231-236.

收稿日期：2019-7-26;修回日期：2019-8-9

編輯/王朵梅