,

(1.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014000；2.包頭市第四醫(yī)院兒科)

肺炎支原體肺炎(Mycoplasmapneumoniaepneumonia，MPP)是學(xué)齡前和學(xué)齡期兒童常見(jiàn)的一種肺炎，嬰幼兒亦常見(jiàn)，占住院兒童社區(qū)獲得性肺炎(Communityacquiredpneumonia，CAP)的10%～40%[1-2]，其病原體為肺炎支原體(Mycoplasmapneumonia，MP)[3]。近年來(lái)MPP的發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，不典型病例較前多見(jiàn)，且重癥、難治病例發(fā)生率逐漸增加，早期識(shí)別重癥、難治MPP，并給予恰當(dāng)治療，能夠有效減輕并發(fā)癥或者避免后遺癥的出現(xiàn)。因此深入探討早期、快速檢測(cè)MP方法非常重要。本文就有關(guān)MPP檢測(cè)診斷方法的研究的綜述如下。

1 MP的分離培養(yǎng)

目前分離培養(yǎng)法可真實(shí)反映MP感染的存在，被認(rèn)為是診斷MP感染的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)操作繁瑣、耗時(shí)較長(zhǎng)、培養(yǎng)檢出率較低，不便于臨床常規(guī)項(xiàng)目開(kāi)展。因此，只用于科研及回顧性診斷[5]。大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室較少?lài)L試該法培養(yǎng)肺炎支原體。近年來(lái)，根據(jù)MP生長(zhǎng)繁殖對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求，產(chǎn)生了一種快速檢測(cè)MP的“肺炎支原體快速液體培養(yǎng)基”[3]，通過(guò)在培養(yǎng)基上合理分配營(yíng)養(yǎng)成分比例，并添加特殊的抑菌物質(zhì)，抑制雜菌及其他微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)MP快速生長(zhǎng)。MP生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物可以改變媒介的顏色，以此來(lái)確定有無(wú)MP生長(zhǎng)，結(jié)果可在培養(yǎng)24 h后判斷，具有簡(jiǎn)單、方便、快速等優(yōu)勢(shì)，有研究認(rèn)為這種方法可以用于早期診斷兒童MP感染[6-7]。然而，由于假陽(yáng)性和假陰性的結(jié)果，該方法的靈敏度和特異性有待進(jìn)一步驗(yàn)證[3]。

2 血清學(xué)檢測(cè)

目前我國(guó)臨床診斷MP感染所用的主要方法仍是血清學(xué)檢測(cè)，尤其是基層醫(yī)院的檢測(cè)，包括特異性試驗(yàn)和非特異性試驗(yàn)，前者常用的有明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。單次血清MP-IgM抗體持續(xù)高滴度≥1∶160可作為MP近期感染或急性感染的診斷依據(jù)；恢復(fù)期血清MP-IgM或IgG抗體滴度較急性期呈4倍或4倍以上增高或減低時(shí)，同樣可確診為MP感染[8-9]。但由于IgM抗體一般在MP感染后1周出現(xiàn)，3～4周達(dá)高峰，故MP-IgM須在感染1周后才能被檢測(cè)到，如在MP感染早期(<1周)MP-IgM滴度很可能低或陰性。免疫缺陷患者或免疫功能發(fā)育不成熟的嬰幼兒，其抗體產(chǎn)生能力低，可能導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。雙份血清MP抗體檢測(cè)雖可提高陽(yáng)性檢出率，但無(wú)早期診斷意義，可供回顧性診斷。且由于雙份血清標(biāo)本采集間隔需2周，受限于家長(zhǎng)不能很好配合恢復(fù)期血清采集，臨床應(yīng)用雙份血清確診MP感染仍有一定困難。冷凝集素抗體檢測(cè)(CA)屬于非特異性診斷，因其敏感性和特異性有限，目前已被上述抗體檢測(cè)所替代。

3 分子生物學(xué)方法

聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)診斷技術(shù)可以檢測(cè)出微量DNA(約1～3個(gè)支原體)。20世紀(jì)80年代開(kāi)始出現(xiàn)用PCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)各種臨床標(biāo)本中的MP，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[10]，且最大優(yōu)勢(shì)是檢測(cè)時(shí)間短，不受感染時(shí)間限制。彌補(bǔ)了MP感染早期抗體尚未產(chǎn)生、MP-IgM滴度低或陰性的缺陷，且PCR檢測(cè)不受患兒免疫功能發(fā)育不完善的影響，可早期診斷MP感染[11]。Blackmore TK等[12]研究在成人及兒童住院患者中比較了咽拭子標(biāo)本PCR與血清學(xué)檢測(cè)的敏感性和特異性。PCR的敏感性為92 %、特異性為98 %，且PCR檢測(cè)到的肺炎支原體病例比血清學(xué)要多。劉春林等[13]對(duì)140例感染的標(biāo)本采用PCR技術(shù)檢測(cè)MP，有30例檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行MP-IgM抗體檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)有21例MP-IgM抗體為陰性，由此可見(jiàn)，PCR檢測(cè)技術(shù)具有較高的靈敏度。有研究表明，通過(guò)PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肺泡灌洗液具有較高的準(zhǔn)確性，且與單份血清MP抗體檢測(cè)相比，其陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn)的更早，在危重患兒中有較高的檢出率。然而，PCR或許不能可靠地鑒別肺炎支原體感染和無(wú)癥狀攜帶者，且該技術(shù)因其價(jià)格昂貴、對(duì)實(shí)驗(yàn)要求高，目前仍不能完全取代血清學(xué)檢測(cè)。目前實(shí)驗(yàn)室常用的方法有環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)，RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)(SAT)技術(shù)等，其中SAT技術(shù)最為敏感，能夠?qū)Σ≡w進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

4 血小板衍生生長(zhǎng)因子的檢測(cè)

血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor，PDGF)是一個(gè)同源或異源二聚體分子，有PDGF-AA，AB，BB，CC和DD 5種亞型。PDGF是從人的血小板中分離出來(lái)的促血管生成因子。它們是多種間質(zhì)細(xì)胞如成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等的強(qiáng)促有絲分裂劑、生長(zhǎng)因子和趨化因子，并涉及胚胎發(fā)育、血管生成、創(chuàng)傷修復(fù)，已在臨床上被廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷的修復(fù)治療。人類(lèi)正常肺組織的間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮、平滑肌細(xì)胞、血管周?chē)M織及肺泡巨噬細(xì)胞有PDGF表達(dá)[14]。該因子貫穿在肺炎的損傷和修復(fù)過(guò)程中。PDGF對(duì)多種炎細(xì)胞及成纖維細(xì)胞有趨化作用，可加重炎癥反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞過(guò)度增殖及各種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的釋放，從而促進(jìn)肺纖維化的形成[14]。由于MP直接侵犯肺和支氣管組織以及MP激發(fā)機(jī)體的過(guò)度炎癥反應(yīng)而致肺損傷，故推測(cè)MPP患者的血清PDGF表達(dá)增加。劉健等[15]動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，大鼠的肺組織經(jīng)過(guò)MP反復(fù)感染后血清PDGF濃度升高較為明顯，并且因此導(dǎo)致了肺組織纖維化，且紅霉素治療組較無(wú)紅霉素治療組PDGF-BB水平明顯下降，提示肺炎支原體感染與體內(nèi)PDGF水平升高存在一定的相關(guān)性。Lee HJ等[16]研究發(fā)現(xiàn)在MPP患者血漿PDGF-BB的表達(dá)增加，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)伴特應(yīng)性體質(zhì)的MPP患者較無(wú)特應(yīng)性體質(zhì)者PDGF-BB水平更高。劉萌等[17]通過(guò)檢測(cè)急性社區(qū)獲得性肺炎血清PDGF濃度水平，發(fā)現(xiàn)血清PDGF值為6000 pg/mL時(shí)，肺炎支原體陽(yáng)性檢出率為93.47 %，可作為急性肺炎支原體肺炎和病毒性肺炎、細(xì)菌性肺炎鑒別診斷的基線值，結(jié)果表明PDGF可很好的區(qū)分肺炎支原體肺炎和非支原體肺炎。

5 其他相關(guān)因子檢測(cè)

MPP除MP對(duì)肺組織的直接損傷外，對(duì)MPP致病起重要作用的還有免疫因素，包括固有免疫及適應(yīng)性免疫的多個(gè)環(huán)節(jié)[18]。而細(xì)胞因子是免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要介質(zhì)，因此在感染MP后的不同時(shí)期，會(huì)出現(xiàn)高細(xì)胞因子血癥。袁浩等[19]的研究發(fā)現(xiàn)，在健康兒童機(jī)體內(nèi)白細(xì)胞介素-35(IL-35)表達(dá)處于正常水平，而當(dāng)MP侵入患兒機(jī)體時(shí)，會(huì)引起免疫系統(tǒng)紊亂，出現(xiàn)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，此時(shí)IL-35出現(xiàn)高表達(dá)，可能通過(guò)抑制NK細(xì)胞增殖和中性粒細(xì)胞功能而抑制過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受過(guò)度免疫反應(yīng)傷害。該研究顯示MPP患兒血清IL-35水平與NK細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞功能均呈負(fù)相關(guān)性。卜小芳等[20]的研究發(fā)現(xiàn)，支原體肺炎患兒外周血趨化因子8(CXCL8)及其mRNA表達(dá)水平增高，通過(guò)進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，重癥患兒外周血CXCL8及其mRNA進(jìn)一步升高，說(shuō)明其與病情的嚴(yán)重程度具有一定的相關(guān)性。李梅等[21]的研究中血清IL-5、IL-18和TNF-α參與了MP的發(fā)生與發(fā)展，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清IL-5、IL-18和TNF-α在MP患兒中水平升高，且伴隨著癥狀的加重水平上升。該結(jié)果對(duì)MPP的治療有指導(dǎo)意義。上述細(xì)胞因子雖在MPP患者血清中均有高表達(dá)，但對(duì)明確MP感染的診斷缺乏特異性，可作為監(jiān)控病情轉(zhuǎn)歸的實(shí)驗(yàn)室輔助診斷指標(biāo)，但目前尚缺乏準(zhǔn)確早期識(shí)別重癥MPP的臨界值，有待進(jìn)一步深入臨床研究。

6 小結(jié)

MPP的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段對(duì)疾病的診斷有重要的意義。病原體的分離培養(yǎng)，血清學(xué)抗體檢測(cè)和PCR技術(shù)是目前公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。每一種檢測(cè)方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在MP感染的不同時(shí)期用不同的檢測(cè)手段以實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，減少漏診和誤診，提高診斷的特異度和靈敏度。近年來(lái)在尋求早期即能提示MP感染的新指標(biāo)以及能早期識(shí)別重癥MPP的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)方面，國(guó)內(nèi)外進(jìn)行了一系列的研究，但均未深入探討，仍需要進(jìn)一步的深入研究。