黃愛(ài)招，黃振楊，李亦聰，梁超峰，丘文戈

(1.惠州市中心人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東惠州 516001；2.廣東省惠州市中醫(yī)院耳鼻喉科；3.惠州市中心人民醫(yī)院中醫(yī)科；4.廣東省嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院教研室)

分泌性中耳炎(secretory otitis media,SOM)是一種中耳非化膿性炎性疾病，與咽鼓管功能障礙、中耳感染、變態(tài)反應(yīng)有關(guān)[1]。目前發(fā)現(xiàn)SOM發(fā)病過(guò)程中，一些血液學(xué)指標(biāo)會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，對(duì)于這些指標(biāo)的研究可對(duì)分泌性中耳炎的診斷以及治療起到監(jiān)測(cè)作用[2]。了解SOM的發(fā)病機(jī)制及危險(xiǎn)因素對(duì)于治療SOM和改善患者生活質(zhì)量具有一定價(jià)值。本研究基于VEGF表達(dá)和IL-4的含量探究參苓白術(shù)散加減治療分泌性中耳炎作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 選擇72只雄性成熟SD SPF(specific pathogen free)級(jí)大鼠，體質(zhì)量180～220 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)44002100006305)，所有大鼠經(jīng)電耳鏡檢查證實(shí)外耳道及鼓膜完整無(wú)感染。實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度控制在26 ℃左右，濕度穩(wěn)定在65 %，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食進(jìn)水。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，將所有大鼠隨機(jī)分為正常組(空白對(duì)照)、模型組(陰性對(duì)照)、阿奇霉素組(陽(yáng)性對(duì)照)以及參苓白術(shù)散加減低、中、高劑量組6組，每組12只。

1.2動(dòng)物模型建立 參考Hardy的方法，制備分泌性中耳炎大鼠模型，除正常組外，其余所有大鼠分別于第1 d、第7 d行腹腔注射卵清蛋白0.30 mg與氫氧化鋁1.28 mg+0.15 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)，以達(dá)全身致敏階段；于第14 d以1 %戊巴比妥鈉2 mL/kg體重腹腔注射麻醉，沿下頜角邊緣分離皮下結(jié)締組織和下頜二腹肌，下方可見(jiàn)聽(tīng)泡，雙側(cè)聽(tīng)泡內(nèi)注入含有0.1 mg卵清蛋白的50 μL PBS液，以達(dá)耳內(nèi)激發(fā)階段。48 h后用電耳鏡觀察大鼠鼓膜情況，正常組大鼠鼓膜透亮且無(wú)積液，如果大鼠鼓膜充血、見(jiàn)積液征即造模成功。

1.3方法 造模成功后，阿奇霉素組將阿奇霉素配制成0.01 g/mL的濃度以10 mL/1kg體重灌胃；參苓白術(shù)散加減低、中、高劑量組分別按0.5 g/mL、1 g/mL、1.4 g/mL的濃度以10 mL/kg體重灌胃；正常組和模型組灌胃等量生理鹽水，1次/d，連續(xù)灌胃14 d。

1.5標(biāo)本采集 成功造模2周后，每組隨機(jī)選擇5只大鼠按2 mL/1kg體重劑量腹腔注射1 %戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血3 mL，3 000 r/min離心15 min，吸取上層血清，EP管分裝、標(biāo)號(hào)，-65 ℃冰箱凍存。

1.6血清VEGF表達(dá)與血清IL-4含量檢測(cè) 均采用ELISA法檢測(cè)血清VEGF表達(dá)及血清IL-4含量。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠血清及中耳黏膜VEGF的表達(dá)比較 與正常組比較，模型組大鼠血清VEGF的表達(dá)升高(t=7.104,P=0.000)。與模型組比較，參苓白術(shù)散加減低、中、高劑量組和阿奇霉素組大鼠血清及中耳黏膜中VEGF的表達(dá)降低(t=6.996,7.522,7.001,7.639,均P=0.000)。參苓白術(shù)散加減低、中、高組與阿奇霉素組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.880,P=0.105)。

2.2各組大鼠血清及中耳黏膜IL-4含量比較 與正常組比較，模型組大鼠血清IL-4的表達(dá)升高(t=32.980,P=0.000)。與模型組比較，參苓白術(shù)散加減低、中、高劑量組和阿奇霉素組大鼠血清及中耳黏膜中IL-4的表達(dá)降低(t=25.932,26.004,28.342,26.941,均P=0.000)。參苓白術(shù)散加減低、中、高組與阿奇霉素組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.943,P=0.103)。見(jiàn)表1。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)SOM的治療主要包括病因治療、抗感染治療、類固醇激素治療、抗過(guò)敏治療等，但治療存在有不良反應(yīng)，且某些類固醇及抗過(guò)敏藥物不適用于嬰幼兒患者；因不同的病因和病情，治療方式的差異也存在爭(zhēng)議[3]。而在治療分泌性中耳炎上，中醫(yī)藥治療的不良反應(yīng)少，安全性高，具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究采用臨床常見(jiàn)的參苓白術(shù)散，方源自《太平惠民和劑局方》，主要成分包括蓮子肉、茯苓、人參、白術(shù)、山藥，具補(bǔ)脾益肺、生津安神之療效。通過(guò)參苓白術(shù)散加減以不同濃度進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，與正常組比較，模型組大鼠血清及中耳黏膜中VEGF、IL-4的表達(dá)升高；與模型組比較，參苓白術(shù)散加減低、中、高劑量組和阿奇霉素組大鼠血清及中耳黏膜中VEGF、IL-4的表達(dá)降低；表明參苓白術(shù)散加減可以抑制VEGF的表達(dá)，調(diào)控IL-4變態(tài)反應(yīng)細(xì)胞因子，抑制炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)免疫功能，具有醫(yī)治分泌性中耳炎的較佳療效。