何明霞，許欣景，楊天偉，劉 靜，高 鋒，方藝偉，王文兵，張春霞，曹 旸，王 云

（云南省熱帶作物科學研究所，云南 景洪 666100）

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌 [Phlebopus portentosus(Berk.&Broome)Boedijn]，俗名黑牛肝菌，隸屬于牛肝菌目（Boletales） 小牛肝菌科（Boletinellaceae），主要分布于我國云南、四川、廣西和海南等地[1-2]。國外分布于泰國和斯里蘭卡等地[3-8]。其子實體品質(zhì)鮮嫩，味道鮮美，肉質(zhì)細膩，營養(yǎng)價值豐富，是云南南部及泰國東北部最受群眾喜愛的名貴食用菌之一[9-12]。

云南省熱帶作物科學研究所對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的生物學特性，及其菇房人工栽培和田間仿生栽培進行了多年的研究，獲得暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菇房人工栽培和適宜季節(jié)的田間仿生栽培的整套技術(shù)[13-16]。暗褐網(wǎng)柄牛肝菌成為了食用牛肝菌家族中唯一可以進行人工栽培的種類。前期研究結(jié)果顯示，菇房人工栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)是覆土，即發(fā)菌完成后，覆土后才可以出菇。覆土出菇的機制目前尚不完全清楚，但已知的是，覆土材料中的微生物對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原基的形成和子實體的成熟起到了重要作用[17]。本研究中，擬研究覆土材料的選擇、覆土材料的制備和覆土方法等對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長、出菇及產(chǎn)量的影響，篩選出能促使菌絲生長快、出菇早、子實體單菇產(chǎn)量高的覆土材料。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株：ph15013菌株，由采自云南西雙版納鳳凰木 [Delonix regia(Boj.)Raf.] 樹下的野生子實體分離得到。

供試覆土材料：堆制發(fā)酵土、鳳凰木林下土壤、菜園土和泥炭。

供試菌袋：高密度聚丙烯塑料菌袋，規(guī)格17.00 cm×35.00 cm×0.07 cm。

栽培基質(zhì)：橡膠木木屑63%、紅土粉11%、谷粒 25%、碳酸鈣 1.0%、MgSO40.1%、KH2PO40.1%。

覆土材料含水量用浙江托普儀器有限公司TZS-Ⅱ水份測定儀測定。

1.2 方法

1.2.1 栽培菌袋的制備

覆土研究使用的菌袋制備參照文獻[18]。滅菌條件為 0.15 MPa，121℃滅菌 120 min。

1.2.2 覆土材料的制備

堆制發(fā)酵土（a）：在紅土中加入一定量的干牛糞，淋水拌勻，堆成下面大、上面小的土堆，蓋塑料布，發(fā)酵6個月，3個月翻堆1次；鳳凰木林下土壤（b）：挖取鳳凰木林下地表20 cm以下的土壤；菜園土（c）：挖取菜園地表20 cm以下的土壤。待菌絲長滿菌袋后，將3種土壤粉碎，過篩后分別與泥炭按1∶1混合。

3種土壤為3個覆土處理，每個處理覆土40袋，共計120袋。

1.2.3 覆土層含水量處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，制成含水量分別為 40.0% （處理 a）、45.0% （處理 b）、50.0%（處理c） 和65.0%（處理 d） 的4種不同含水量的覆土材料，即4個處理，每個處理覆土30袋，共計120袋。

1.2.4 覆土材料 pH 處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，用檸檬酸及石灰將其pH分別調(diào)為4（處理a）、b∶5（處理b）、6（處理c） 和7（處理d），即4個處理，每個處理覆土30袋，共計120袋。

1.2.5 覆土厚度處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，對培養(yǎng)好的菌袋進行覆土，覆土層厚度設(shè)4個處理，分別是2 cm（處理a）、4 cm（處理 b）、6 cm（處理 c）和8 cm（處理d），每個處理覆土30個菌袋，共計120袋。

1.2.6 培養(yǎng)方法

覆土后菌袋放于培菌室內(nèi)（濕度75.0%、光照100 lx）培養(yǎng)，當菌絲長滿覆土層后移入出菇室（濕度85.0%、光照300 lx） 培養(yǎng)出菇。

1.2.7 正交試驗

選用L9（34）正交表，以覆土材料配方（因素A）、覆土材料含水量（因素B）、覆土材料pH（因素C）和覆土層厚度（因素D）為直接因素進行正交試驗。水平因素表見表1。共設(shè)9個處理，篩選出各因素之間的最佳組合。

表1 L9（34）正交試驗因素與水平Tab.1 Factors and levels of L9（34）orthogonal test

1.3 項目測定

覆土第10天，測量覆土層菌絲生長量，記錄出菇天數(shù)，稱量單個菌袋子實體重量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用DPSv 6.05統(tǒng)計軟件Duncan新復(fù)極差法進行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 覆土材料配方對菌絲生長及子實體生長的影響

不同覆土材料配方對菌絲生長及子實體生長的影響見表2。

由表2可知，3種不同覆土材料對菌絲生長量的影響無顯著差異。不同覆土材料對子實體生長和產(chǎn)量的影響差異顯著。采用處理a比處理b和處理c出菇要早，僅需9.00 d，而且子實體平均單菇重也最重，為107.36 g。因此，栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料為處理a（堆制發(fā)酵土）。同時，堆制發(fā)酵土不僅制作省工、簡便，而且發(fā)酵后土壤的孔隙度和持水性增加，飽和含水量加大，一些可利用的營養(yǎng)物質(zhì)和有機質(zhì)含量也有所增多，有利于暗褐網(wǎng)柄牛肝菌和其他有益微生物生長發(fā)育，是一種具有良好覆土特性的覆土材料。

表2 不同覆土材料配方對菌絲生長及子實體生長的影響Tab.2 Effects of different casing materials on mycelial and fruiting body growth

2.2 覆土材料含水量對菌絲生長及子實體生長影響

不同覆土材料含水量對菌絲生長及子實體生長的影響見表3。

表3 覆土材料不同含水量對菌絲生長及子實體生長的影響Tab.3 Effects of different water content of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表3可知，處理c中菌絲生長最快，覆土后第10天菌絲生長量為4.0 cm，而且出菇也最快，8.67 d開始出菇，與處理a和處理d有顯著差異；其子實體平均單菇重也最重，為124.71 g，與其他3個處理有極顯著差異。因此，菇房栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌，覆土材料含水量為50%，菌絲生長快，出菇早，子實體單菇產(chǎn)量高。

2.3 覆土材料pH對菌絲生長及子實體生長的影響

不同覆土材料不同pH對菌絲生長及子實體生長的影響見表4。

表4 覆土材料不同pH對菌絲生長及子實體生長的影響Tab.4 Effects of different pH of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表4可知，在處理b中菌絲生長最快，覆土10 d后菌絲生長量4.85 cm；產(chǎn)出的子實體單菇重也最重，為120.60 g，與其他3個處理有極顯著差異；出菇早，11 d開始出菇，與處理c和處理d相比差異極顯著。因此，覆土材料pH為5時，栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌效果最好。這一試驗結(jié)果正好與調(diào)查的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的生態(tài)學特性結(jié)果相一致，在自然界中，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌生長于偏酸性的土壤。

2.4 覆土材料厚度對菌絲生長及子實體生長的影響

不同覆土材料厚度對菌絲生長及子實體生長的影響見表5。

表5 不同覆土層厚度對菌絲生長及子實體生長的影響Tab.5 Effects of different soil layer thickness on mycelial and fruiting body growth

注：表中大寫、小寫字母分別表示在1%、5%水平差異顯著。Note:The uppercase and lowercase letters in the table indicate significant differences at the level of 1%and 5%,respectively.

由表5可知，在處理c中菌絲生長最快，覆土10 d，菌絲生長量為4.98 cm，與處理a相比差異顯著；且出菇最早，9.50 d開始出菇；子實體單菇重最重，達126.50 g，與處理d和處理a差異顯著。因此，覆土層太厚或太薄均不利于菌絲及子實體的生長，覆土層的厚度為4 cm～6 cm時，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培效果較好。

2.5 正交試驗

不同覆土材料配方、覆土材料含水量、覆土材料pH及覆土層厚度處理組合對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長、出菇天數(shù)及子單菇重影響結(jié)果見表6。

表6 不同處理的菌絲生長量、出菇天數(shù)、單菇重Tab.6 Mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight under different treatments

子實體單菇重是評價栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最重要指標。由表6可知，覆土材料配方對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長、出菇天數(shù)及子實體單菇重的影響達到極顯著水平，說明覆土材料配方是影響菌絲生長及子實體生長的主要因素。

對各處理的菌絲生長量、出菇天數(shù)和子實體單菇重進行方差分析和多重比較結(jié)果見表7。

表7可知，對子實體單菇重的影響因素順序依次為覆土材料＞覆土材料厚度＞覆土材料含水量＞覆土材料pH。表明覆土材料是影響牛肝菌子實體單菇重的主要因素，覆土材料厚度、覆土層含水量及覆土材料pH為次要因素。綜上，4個因素的最佳組合為A1B2C2D1。

表7 不同因素水平對菌絲生長、出菇天數(shù)、子實體單菇重的影響Tab.7 Effects of different factors on mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight

3 結(jié)論

覆土是暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培的重要環(huán)節(jié)，發(fā)現(xiàn)出菇與覆土存在密切關(guān)系，不覆土則不出菇；通過研究菜園土、果園土和堆制土的理化性質(zhì)及其對暗褐網(wǎng)柄牛肝菌出菇的影響，發(fā)現(xiàn)菜園土的全碳、全磷、有效磷等含量顯著高于果園土和堆制土，用菜園土覆土出菇的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌平均單菇重最高[18]。覆土與微生物的存在是瓶栽條件下暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌株形成原基和成熟子實體的重要條件[19]。覆土層的空隙度也是影響食用菌生長的重要理化因素之一，覆土空隙度與食用菌產(chǎn)量正相關(guān)[20]。泥碳中含有大量微生物，且泥炭因其飽和含水量大，持水性好，孔隙度大、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的特性，十分有利于食用菌菌絲與子實體生長發(fā)育。

在前期的單因子試驗中發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵土是人工栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料，50%發(fā)酵土和50%泥炭作為覆土材料，含水量50%、pH 5、覆土層厚度6 cm，菌絲生長快，出菇早，子實體平均單菇更重。

通過本次正交試驗，結(jié)果表明不同覆土材料對菌絲生長、出菇天數(shù)及子實體單菇重的直接影響最大，覆土材料厚度、覆土層含水量及覆土材料pH為次要因素。50%堆制發(fā)酵土和50%泥炭是栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料，覆土層厚度4 cm～6 cm、覆土材料含水量45%～50%和pH 5為最佳組合。