姜黎 趙森 紀(jì)開(kāi)一 鄒明 孫涌津 徐保利

[摘要]目的 建立延胡索咀嚼片的薄層及高效液相測(cè)定方法。方法 采用1% NaOH制備硅膠G板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5：4：1）為展開(kāi)劑，利用延胡索乙素對(duì)延胡索咀嚼片進(jìn)行鑒別。采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）進(jìn)行測(cè)定，色譜柱為Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）;流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.0）（60：40）;檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。結(jié)果 延胡索咀嚼片薄層鑒別，置紫外燈（365 nm）下檢視，在供試品色譜中，與對(duì)照品相同位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)。利用HPLC法對(duì)延胡索咀嚼片中的延胡索乙素進(jìn)行測(cè)定，延胡索咀嚼片中延胡索乙素的線性范圍為0.0832～0.4160 μg，r=0.9997，平均回收率為99.94%（RSD=0.52%）。結(jié)論 所建立的延胡索咀嚼片定性及定量質(zhì)量控制方法，操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、專屬性高，可作為質(zhì)量控制的方法。

[關(guān)鍵詞]延胡索咀嚼片;延胡索乙素;薄層色譜;高效液相

[中圖分類號(hào)] R282.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）9（c）-0044-04

[Abstract] Objective To establish thin layer and high performance liquid phase determination methods for Corydalis Rhizoma Chewable Tablets. Methods The silica gel G plate was prepared with 1% NaOH， and the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets were identified by tetrahydropalmatine， with n-hexane-chloroform-methanol （7.5：4：1） as the developing agent. It was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC）. The column was Hypersil BDS C18 （5 μm， 4.6 mm×150 mm）， the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid （pH adjusted to 6.0 with triethylamine） （60：40）， and the detection wavelength was 280 nm. Results The thin layer of Corydalis Rhizoma Chewable Tablets was identified and placed under ultraviolet light （365 nm）. In the chromatogram of the test sample， the same color fluorescent spot was displayed at the same position as the reference substance， and the negative control did not have this spot. The content of tetrahydropalmatine in the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets was determined by HPLC. The linear range of tetrahydropalmatine was 0.0832-0.4160 μg， r=0.9997， and the average recovery rate was 99.94% （RSD=0.52%）. Conclusion The qualitative and quantitative quality control methods of the Corydalis Rhizoma Chewable Tablets are easy to operate with good reproducibility and high specificity， and can be used as quality control methods.

[Key words] Corydalis Rhizoma Chewable Tablets; Tetrahydropalmatine; Thin layer chromatography; High performance liquid phase

延胡索咀嚼片（Corydalis Rhizoma Chewable Tablets）是由醋延胡索、枯礬、海螵蛸（去殼）組成的。原方安胃片，為《中國(guó)藥典》2015年版一部收載品種[1]。具有行氣活血、制酸止痛的功效，用于氣滯血瘀所致的胃脘刺痛、吞酸噯氣、脘悶不舒，胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎見(jiàn)上述癥候者[2]。本方原為吞服片劑，每次服用5～7片，服用劑量大，患者依從性較差，因此本研究將其劑型改為咀嚼片，并驗(yàn)證了新劑型療效穩(wěn)定、方便服用。方中君藥為延胡索（Corydalis Rhizoma），為罌粟科植物延胡索的塊莖，性溫、味苦，歸肝、心、脾經(jīng)，功效為活血、行氣、止痛[3]。現(xiàn)代藥理作用研究表明，延胡索具有抗?jié)冏饔?，?duì)胃及十二指腸潰瘍有可靠的療效[4]。延胡索乙素可安定中樞，尤適用于疼痛引起的失眠[5]。因此本研究利用延胡索乙素為對(duì)照品，采用薄層色譜法對(duì)延胡索咀嚼片進(jìn)行定性鑒別[6-7]，并采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[8-9]，結(jié)果表明，上述兩種方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、結(jié)果直觀，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器

日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀;Kromasil-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱;N-2000色譜工作站;ZF-2型三用紫外分光光度儀（上海市安亭儀器廠）;十萬(wàn)分之一分析天平（瑞士）;KQ3200超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)：110726-201819）采購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究所;乙醇、甲醇為色譜純;水為純水;延胡索咀嚼片（自制）;其余均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1延胡素咀嚼片薄層鑒別

2.1.1對(duì)照品溶液制備? 取延胡素乙素對(duì)照品2.08 mg，精密稱定，加甲醇50 ml溶解，即得。

2.1.2供試品溶液制備? 取延胡索咀嚼片3 g，粉碎，藥粉加甲醇50 ml，超聲30 min后，濾過(guò)，蒸干濾液，殘?jiān)盟芙夂?，以濃氨液調(diào)至pH值為堿性，乙醚提取3次，每次10 ml，合并乙醚液，蒸干，用甲醇1 ml溶解，即得。

2.1.3陰性溶液制備? 取處方中除延胡索外的兩味藥材，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.4薄層色譜條件? 分別吸收上述溶液10 μl，點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5：4：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干后，置碘缸中約3 min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外燈下（365 nm）檢視，在供試品色譜中，與對(duì)照品溶液相同的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性液無(wú)斑點(diǎn)，結(jié)果如圖1所示。

1：延胡索乙素對(duì)照品;2：供試品溶液;3：陰性對(duì)照液

2.2延胡素咀嚼片中延胡素乙素的含量測(cè)定

2.2.1色譜條件? 采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸（60：40）（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.0），體積流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，進(jìn)樣量為10 μl。典型色譜圖具體見(jiàn)圖2。

“1”表示延胡索乙素

A：延胡素乙素;B：延胡索咀嚼片;C陰性對(duì)照品

2.2.2對(duì)照品溶液的制備? 精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成41.6 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備? 取延胡索咀嚼片30片，研細(xì)，精密稱定，采用以下三種方法分別進(jìn)行處理，作為供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果進(jìn)行比較。

方法1[10]：取2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚適量，濃氨液2 ml浸泡過(guò)夜，加熱回流提取，取乙醚液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? ml溶解后轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，定容后，以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

方法2[11]：置具塞三角瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇（1：15）混合溶液50 ml，稱定重量，冷浸1 h后，回流提取60 min，放涼，精密稱定，以濃氨試液-甲醇（1：15）補(bǔ)足減少重量，濾過(guò)后，取續(xù)濾液25 ml蒸干，殘?jiān)铀?0 ml溶解，并移至分液漏斗中，加鹽酸調(diào)pH值至2～3，用石油醚（60～90℃）洗滌2次，每次20 ml，棄去石油醚層。水層加濃氨試液調(diào)pH值至9～10，用氯仿提取4次，30 ml/次，合并氯仿層，用水20 ml洗滌，氯仿層置水浴蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，定容后，以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

方法3[12]：精密加水50 ml，水浴加熱溫浸1 h使溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH值至10后，至分液漏斗中，乙醚萃取4次（30、30、20、20 ml），合并乙醚液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?0 ml，搖勻，濾過(guò)，以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

取以上三種不同方法制備的供試品溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀，經(jīng)實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果顯示，方法1中成分分離較好，延胡索乙素含量較高;方法2分離較好，但延胡索乙素含量低;方法3種雜質(zhì)成分多，不能完全分離。比較決定采用方法1的處理方法作為樣品溶液的制備方法。

2.2.4陰性對(duì)照溶液的制備? 取處方中除延胡索外的兩味藥材，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.5線性關(guān)系考察? 精密吸取0.1664 mg/ml延胡索對(duì)照品溶液5、10、12.5、15、20 μl，分別注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)照品鋒面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=13794x+4042.9，r=0.9997（n=5），結(jié)果顯示，在0.0832～0.4160 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6精密度試驗(yàn)考察? 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣（n=6），計(jì)算色譜峰面積，對(duì)照品及供試品RSD分別為1.01%和1.79%，結(jié)果符合規(guī)定。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)考察? 取延胡索咀嚼片，研細(xì)，精密稱定6份，按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備，分別精密吸取10 μl注入高效液相色譜儀。測(cè)得延胡索乙素含量RSD為1.00%，重復(fù)性良好，結(jié)果符合規(guī)定。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)考察? 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，結(jié)果表明，10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.30%，結(jié)果符合規(guī)定。

2.2.9回收率試驗(yàn)考察? 分別取樣品6份，每份1 g，精密稱定，加入一定量的延胡索乙素的對(duì)照品溶液，按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下制備方法制備，進(jìn)樣，測(cè)定含量，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.10樣品測(cè)定? 取3批次延胡索咀嚼片，按上述供試品制備方法，制備延胡索咀嚼片供試品溶液，分別精密吸取10 μl注入HPLC進(jìn)行分析，記錄峰面積，計(jì)算測(cè)得各批次延胡索乙素的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，暫定本品每片含延胡索以延胡索乙素計(jì)算，不得少于1.71 mg。

3討論

3.1指標(biāo)成分選擇

延胡索咀嚼片中君藥為延胡索，且藥理活性強(qiáng)[13]，主要指標(biāo)成分為延胡索乙素，以HPLC測(cè)定延胡索咀嚼片中延胡索乙素含量[14]，方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性良好，可作為延胡索咀嚼片的質(zhì)量控制依據(jù)。

3.2提取條件優(yōu)化

查閱文獻(xiàn)對(duì)延胡索咀嚼片的提取條件進(jìn)行優(yōu)化[15]，對(duì)比回流提取法與索氏提取法的提取效率，結(jié)果提示，索氏提取法提取效率高，提取完全，故采用索氏提取法進(jìn)行提取。同時(shí)對(duì)提取溶媒進(jìn)行考察，對(duì)比氨水及乙醚混合液[16]、氨水及氯仿混合液兩種溶媒[17]，結(jié)果提示，氨水及乙醚混合液提取效率較高，故選用氨水及乙醚混合液作為提取溶媒。

綜上所述，對(duì)延胡索咀嚼片進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用薄層色譜法對(duì)延胡索咀嚼片中對(duì)延胡索進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC對(duì)處方中的延胡索乙素進(jìn)行含量測(cè)定，該方法操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、專屬性高，可作為含量測(cè)定的指標(biāo)。

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（收稿日期：2019-03-28? 本文編輯：任秀蘭）