劉枘岢 陳毅光 李雯翀 周敏華

東莞市第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科（廣東東莞523326）

2 型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）的發(fā)病與多種因素有關(guān)，其主要特征為胰島素抵抗伴胰島素分泌不足。代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是一組以腹型肥胖、糖脂代謝異常及高血壓等多種疾病或危險(xiǎn)因素在個(gè)體異常聚集為特征的復(fù)雜的代謝紊亂癥候群。因此，臨床上T2DM 患者的發(fā)病往往伴隨著肥胖、血脂代謝紊亂、血壓升高、非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）等多種代謝綜合征的異常組分。腸道菌群是指在人體腸道寄居的微生物群，目前為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。研究表明腸道菌群與宿主的消化、營(yíng)養(yǎng)、代謝、免疫等方面密切相關(guān)［1］。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，腸道菌群不僅能通過從飲食中能量的獲取方面參與肥胖的發(fā)病，還能通過慢性炎癥反應(yīng)、內(nèi)毒素血癥、膽汁酸代謝、短鏈脂肪酸等多種途徑參與肥胖、T2DM 等代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展［2］。因此，基于以上研究背景，本研究擬比較T2DM 患者腸道菌群的變化及其與臨床相關(guān)代謝指標(biāo)之間的關(guān)系，探討腸道細(xì)菌在T2DM 的發(fā)生發(fā)展中可能存在的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象及分組根據(jù)1999年世界衛(wèi)生組織（WHO）的T2DM 診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集2016年6月至2018年6月于東莞市第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的T2DM 患者（n= 50 例），同時(shí)于體檢中心收集健康人群作為對(duì)照組（n=50 例）。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡≥18 歲，彼此之間無血緣關(guān)系；（2）病史小于10年。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）其他類型糖尿?。唬?）合并其余內(nèi)分泌疾病；（3）患有嚴(yán)重臟器損害及腫瘤者；（4）近期（1 個(gè)月內(nèi)）服用抗生素及微生態(tài)制劑；（5）近期（1 個(gè)月內(nèi)）患有胃腸、肝膽疾病者；（6）既往胃腸道手術(shù)病史。（7）有精神病史、酗酒及濫用藥物者。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）無糖尿病等內(nèi)分泌疾病及嚴(yán)重臟器損害；（2）近期（1 個(gè)月內(nèi)）未服用抗生素及微生態(tài)制劑；（3）近期（1 個(gè)月內(nèi)）無胃腸道、肝膽疾病史；（4）既往無胃腸道手術(shù)病史。本研究獲得東莞市第三人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)及行政倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有受試者均知曉實(shí)驗(yàn)的目的及意義，并簽署知情同意書?；颊呷朐汉蟛杉绯啃迈r糞便及血液標(biāo)本后迅速儲(chǔ)存于-80℃低溫冰箱中用于檢測(cè)。

1.2 糞便細(xì)菌總DNA的提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)本研究應(yīng)用菌屬16SrDNA v3 序列特異性引物，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 分析，比較T2DM 患者及對(duì)照組中各目標(biāo)菌屬含量及比例的差異。主要操作步驟如下：（1）糞便細(xì)菌總DNA 的提取及濃度測(cè)定。糞便細(xì)菌總DNA 的提取按照QIAamp DNA Stool Mini Kit 糞便DNA 提取試劑盒（德國(guó)Qiagen 公司）說明書步驟進(jìn)行操作，并使用Dano-Drop1000 核酸蛋白儀鑒定DNA 的濃度。（2）引物的合成。本研究所用引物參考文獻(xiàn)1 并由上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司合成。（3）標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建及實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)。分別以目標(biāo)細(xì)菌的16SrDNA v3 區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳后回收作為DNA 標(biāo)準(zhǔn)品。將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成濃度梯度為101～107copies/μL 的DNA 樣品作為陽性模板，以不加DNA 模板的水作為陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)各菌屬的反應(yīng)條件，反應(yīng)體系在Roche LightCyder480 定量PCR 儀進(jìn)行熒光定量擴(kuò)增。由相關(guān)軟件分析處理數(shù)據(jù)，直接可得到各樣本目標(biāo)菌屬的含量，最后結(jié)果以細(xì)菌拷貝數(shù)的常用對(duì)數(shù)/g 糞便（lg copies/g 糞便）表示。

1.3 臨床代謝指標(biāo)的檢測(cè)臨床代謝指標(biāo)主要包括查體及生化指標(biāo)的檢測(cè)。查體資料包括體質(zhì)量、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、身高、腰圍、血壓等方面，均由我科室醫(yī)護(hù)人員嚴(yán)格測(cè)量取得。生化指標(biāo)的檢測(cè)：抽取空腹靜脈血進(jìn)行血糖、血脂及肝功的檢測(cè)，主要包括空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、糖化血紅蛋白（glycolated hemoglobin-1，HbAlC）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（1ow density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）及谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（glutamyl endopeptidase，GGT）等指標(biāo)。

1.4 飲食結(jié)構(gòu)的問卷調(diào)查本研究對(duì)全部研究對(duì)象以面對(duì)面問答形式進(jìn)行問卷調(diào)查。飲食攝入量表采用食物頻率問卷（FFQ）調(diào)查法。FFQ 依據(jù)2016年中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)制定的《中國(guó)居民平衡膳食寶塔》，將食物分類進(jìn)行調(diào)查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均由SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料用例（%）表示，計(jì)量資料表示為（）。組間比較時(shí)計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用Mann-WhitneyUtest 檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象的一般資料分析所有研究對(duì)象的一般資料如表2所示。本研究共納入了100 例研究對(duì)象，其中T2DM 組50 例，對(duì)照組50 例。結(jié)果顯示T2DM 組及對(duì)照組間性別、年齡無顯著性差異，具有組間可比性（P＞0.05）。T2DM 組與對(duì)照組比較，BMI 及DBP 較高，F(xiàn)BG、HbA1C、TC、TG、LDLC、AST、ALT 亦明顯升高，而HDL-C 卻有所下降（P＜0.05）。在飲食結(jié)構(gòu)上，T2DM 組在每日碳水化合物及脂肪攝入量占總熱量比例較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩組間菌屬量的差異T2DM 組及對(duì)照組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬的拷貝數(shù)結(jié)果如表2所示。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，T2DM 患者柔嫩梭菌類群、腸球菌屬、大腸桿菌屬含量顯著性升高（P＜0.05），而擬桿菌屬、雙歧桿菌屬及乳酸桿菌屬含量顯著性降低（P＜0.05）。兩組在球形梭菌類群、普氏菌屬方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 兩組間各菌屬占總細(xì)菌比例的差異T2DM組及對(duì)照組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬比例如表3所示。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，T2DM 患者柔嫩梭菌類群、腸球菌屬、大腸桿菌屬顯著性升高（P＜0.05），而擬桿菌/球形梭菌、雙歧桿菌屬顯著性降低（P＜0.05）。兩組在普氏菌屬、乳酸桿菌屬方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 T2DM 組及對(duì)照組間一般資料的比較Tab.1 Comparison of general data between T2DM group and control group±s

表1 T2DM 組及對(duì)照組間一般資料的比較Tab.1 Comparison of general data between T2DM group and control group±s

臨床指標(biāo)性別（男/女）年齡（歲）病程（年）BMI（kg/m2）腰圍（cm）SBP（mmHg）DBP（mmHg）FBG（mmol/L）HbA1C（%）TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）AST（IU/L）ALT（IU/L）GGT（IU/L）總熱量（kcal/日）碳水化合物（/總熱量）脂肪（/總熱量）蛋白質(zhì)（/總熱量）每周至少飲用一次酸奶（n，%）T2DM 組（n=50）30/20 58.44±11.40 5.50±2.59 24.93±2.98 87.18±10.21 124.84±12.91 79.48±11.88 9.92±2.79 8.53±2.21 4.85±0.72 2.35±1.06 1.02±0.17 3.07±0.32 41.78±14.84 42.28±16.92 36.02±14.35 1 728.75±352.33 0.62±0.04 0.26±0.04 0.13±0.01 11（22.0）對(duì)照組（n=50）27/23 54.76±10.76-23.02±1.90 83.94±8.54 119.70±10.79 73.78±7.97 4.99±0.56 5.51±0.51 4.24±0.61 1.40±0.20 1.13±0.13 2.92±0.11 26.22±8.33 25.98±11.99 32.76±13.80 1 712.62±326.47 0.59±0.02 0.25±0.03 0.15±0.01 14（28.0）Z 值/χ2值0.367-1.655 P 值0.545 0.098-2.924-1.698-1.928-2.460-8.410-7.103-4.013-5.016-3.286-2.513-5.212-4.704-1.183-0.255-3.007-2.448-1.382 0.480 0.003 0.090 0.054 0.014＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.012＜0.001＜0.001 0.237 0.799 0.003 0.014 0.167 0.488

表2 兩組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬的拷貝數(shù)Tab.2 Copy numbers of each bacterial genus in the two groups of real-time quantitative PCR±s

表2 兩組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬的拷貝數(shù)Tab.2 Copy numbers of each bacterial genus in the two groups of real-time quantitative PCR±s

細(xì)菌屬球形梭菌類群柔嫩梭菌類群擬桿菌屬普氏菌屬雙歧桿菌屬乳酸桿菌屬腸球菌屬大腸桿菌屬lg copies/g 糞便細(xì)菌數(shù)T2DM 組7.09±0.46 5.83±0.40 6.81±0.40 5.12±0.88 4.68±0.92 3.51±0.98 4.71±0.62 1.70±0.42對(duì)照組7.01±0.49 5.54±0.39 7.55±0.77 4.81±1.00 5.21±0.96 3.88±0.82 4.35±0.48 1.34±0.69 Z 值-0.810-3.396-4.764-1.499-2.620-2.058-2.672-2.210 P 值0.418 0.001＜0.001 0.134 0.009 0.040 0.008 0.027

2.4 腸道菌群與臨床代謝指標(biāo)間的關(guān)系本研究進(jìn)一步研究了腸道菌群與臨床代謝指標(biāo)間的關(guān)系。研究結(jié)果如表4顯示，柔嫩梭菌類群與FBG、HbA1C 及AST 均成顯著性正相關(guān)；擬桿菌屬與多種代謝指標(biāo)FBG、HbA1C、TC、TG、LDL-C、AST 及ALT 均呈負(fù)相關(guān)；乳酸桿菌屬與BMI、FBG 呈負(fù)相關(guān)，與HDL-C 呈正相關(guān)；腸球菌屬與HbAIC、AST、ALT 均呈正相關(guān)；大腸桿菌屬與TC、ALT 呈正相關(guān)；擬桿菌/球形梭菌%與FBG、HbA1C、ALT 成顯著性負(fù)相關(guān)，而與HDL-C 呈（P＜0.05）。

表3 兩組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬比Tab.3 Ratio of each bacterial genus in the two groups of realtime quantitative PCR ±s，%

表3 兩組實(shí)時(shí)熒光定量PCR 各菌屬比Tab.3 Ratio of each bacterial genus in the two groups of realtime quantitative PCR ±s，%

細(xì)菌屬擬桿菌/球形梭菌柔嫩梭菌類群普氏菌屬雙歧桿菌屬乳酸桿菌屬腸球菌屬大腸桿菌屬T2DM 組0.93±0.07 0.72±0.08 0.52±0.19 0.53±0.18 0.45±0.19 0.60±0.15 0.25±0.13對(duì)照組1.02±0.07 0.68±0.08 0.56±0.22 0.61±0.17 0.48±0.21 0.52±0.18 0.19±0.10 Z 值-5.329-2.439-0.934-2.134-0.486-2.072-2.383 P 值＜0.001 0.015 0.350 0.033 0.627 0.038 0.017

2.5 腸道菌群的與飲食結(jié)構(gòu)間的關(guān)系本研究進(jìn)一步研究了腸道菌群與飲食結(jié)構(gòu)間的關(guān)系。研究結(jié)果如表5顯示，乳酸桿菌屬與碳水化合物比例呈負(fù)相關(guān)（r=-0.233，P=0.020），大腸桿菌屬與蛋白質(zhì)比例呈正相關(guān)（r=0.207，P=0.038）。本研究沒有發(fā)現(xiàn)其余菌屬與飲食結(jié)構(gòu)間的相關(guān)性。

表4 腸道菌群與臨床代謝指標(biāo)間的關(guān)系Tab.4 Relationship between intestinal flora and clinical metabolic indicators

表5 腸道菌群與飲食結(jié)構(gòu)間的關(guān)系Tab.5 Relationship between intestinal flora and dietary structure

3 討論

人體腸道菌群是復(fù)雜而又相對(duì)穩(wěn)定的定植微生物群落，由長(zhǎng)期在宿主體內(nèi)進(jìn)化而來，它們對(duì)人體代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、合成微量元素和礦物質(zhì)、分解代謝腸道中的有害物質(zhì)、抵御致病菌侵入等方面起著不可或缺的重要作用［1，3］。不少研究表明，腸道菌群對(duì)肥胖、胰島素抵抗、糖代謝異常、血脂紊亂、高血壓及NAFLD 等多種MS 癥候群組分的發(fā)病具有重要的作用［4］。本研究針對(duì)目標(biāo)細(xì)菌16SrDNA可變區(qū)序列設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)腸道菌群中球形梭菌類群、柔嫩梭菌類群（厚壁菌門）和擬桿菌屬、普氏菌屬（擬桿菌門）兩大主要門類細(xì)菌及常見益生菌（乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬）和條件致病菌（腸球菌屬、大腸桿菌屬）進(jìn)行熒光定量PCR，比較了T2DM 和健康對(duì)照組腸道菌群構(gòu)成的差異，及其與臨床代謝指標(biāo)之間的關(guān)系。

結(jié)果顯示與對(duì)照組比較，T2DM 患者柔嫩梭菌類群含量顯著性升高，而擬桿菌屬含量顯著性降低。兩組在球形梭菌類群、普氏菌屬方面比較無顯著性差異。根據(jù)既往分析發(fā)現(xiàn)，體型消瘦者消化道中的細(xì)菌主要屬于擬桿菌，而肥胖者消化道中厚壁菌更多，若減肥成功后則擬桿菌數(shù)量增加但厚壁菌數(shù)量減少；厚壁菌與擬桿菌屬比較，能夠從食物中獲取更多的能量［5-7］。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)T2DM 患者消化道擬桿菌的數(shù)量明顯減少，此外血糖水平與擬桿菌門和厚壁菌門的比例密切相關(guān)［8］。因此本研究選擇兩大門類中最優(yōu)勢(shì)的菌屬（擬桿菌屬/球形梭菌）比值進(jìn)行比較，結(jié)果與上述類似，雖然普氏菌屬無明顯差異，但T2DM 患者柔嫩梭菌類群%顯著性升高，而擬桿菌/球形梭菌顯著性降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)柔嫩梭菌類群、擬桿菌屬含量及擬桿菌/球形梭菌與臨床代謝指標(biāo)如FBG、HbA1C、TC、TG、HDL-C 及LDL-C 都密切相關(guān)。以上結(jié)果從菌屬水平表明柔嫩梭菌類群“能量富集型”的生理特性，而擬桿菌屬在T2DM中可能發(fā)揮著重要的作用。柔嫩梭菌類群中大多數(shù)細(xì)菌是產(chǎn)丁酸鹽細(xì)菌。目前研究發(fā)現(xiàn)腸道內(nèi)細(xì)菌發(fā)酵多糖后產(chǎn)生的最終代謝產(chǎn)物為丁酸，并且在供應(yīng)宿主能量和腸上皮細(xì)胞發(fā)育中發(fā)揮重要作用［9］。因此，本研究推測(cè)提示T2DM 腸道內(nèi)柔嫩梭菌類群的增多可能提高了宿主從飲食中吸收能量的能力，從而與T2DM 的發(fā)生相關(guān)。擬桿菌對(duì)機(jī)體代謝有重要的作用，具有參與多糖、膽汁酸和類固醇代謝、發(fā)酵碳水化合物以及維持腸道正常生理等多種功能［10］。本研究推斷從長(zhǎng)期的角度來看，擬桿菌屬的減少可能與腸道菌群的結(jié)構(gòu)失衡和機(jī)體代謝紊亂有關(guān)，進(jìn)而引發(fā)胰島素抵抗或T2DM，但是其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

目前關(guān)于肥胖、T2DM 的動(dòng)物和臨床研究日益增多。這些研究發(fā)現(xiàn)此類患者的病理狀態(tài)如胰島素抵抗、代謝性內(nèi)毒素血癥、系統(tǒng)性炎癥在補(bǔ)充益生菌制劑后往往得到顯著改善［11-12］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥患者中乳酸桿菌及雙歧桿菌與TC、TG 及LDL-C 成負(fù)性相關(guān)，腸道內(nèi)乳桿菌和雙歧桿菌降血脂的作用可能通過影響膽汁酸的腸肝循環(huán)，促使肝臟利用膽固醇合成膽汁酸而實(shí)現(xiàn)［13］，因此推測(cè)雙歧桿菌屬及乳酸桿菌屬數(shù)量減少，可能通過影響脂質(zhì)代謝減弱了對(duì)腸道有害菌的抑制作用，從而增加了腸壁通透性，進(jìn)而引起了代謝性內(nèi)毒素血癥及T2DM的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)T2DM患者雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬含量及雙歧桿菌屬顯著性降低，而且乳酸桿菌含量與BMI、FBG 及HDL-C密切相關(guān)，其中與BMI 及FBG 成負(fù)相關(guān)，而與HDL-C 成正相關(guān)。換言之，隨著腸道乳酸桿菌含量的增加，BMI 及FBG 水平可能下降，而HDL-C 水平可能升高。以上發(fā)現(xiàn)或許可以說明腸道益生菌在T2DM 的發(fā)病機(jī)制中的正向作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)T2DM 患者腸道中條件致病菌腸球菌屬、大腸桿菌屬及腸球菌、大腸桿菌含量顯著性升高。在臨床上T2DM 患者院內(nèi)感染常見且重要的致病菌恰為大腸桿菌和腸球菌，可引起皮膚軟組織感染、尿路感染、腹腔感染以及心內(nèi)膜炎和腦膜炎、敗血癥等疾病，甚至危及生命。這與T2DM 患者本身血糖較高，易于發(fā)生感染的疾病特征相符合。不僅如此，本研究還發(fā)現(xiàn)大腸桿菌屬與TC 成正相關(guān)，這與既往關(guān)于高脂血癥患者腸道菌群的研究類似［13］，說明隨著大腸桿菌含量的增加，TC 水平可能增加，而TC 升高往往是T2DM 患者發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要因素。其實(shí)，國(guó)外早有研究發(fā)現(xiàn)革蘭陰性菌感染與動(dòng)脈粥樣硬化形成有關(guān)，前已述及，菌群失調(diào)可能造成宿主微生態(tài)屏障功能紊亂，腸壁通透性增加，內(nèi)源性內(nèi)毒素釋放入血使得內(nèi)毒素進(jìn)入機(jī)體［14］，進(jìn)而影響血管引起動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。綜上所述，這些條件致病菌可能影響了脂代謝的水平，從而與T2DM 相關(guān)，進(jìn)而引起血管并發(fā)癥。

在臨床中，T2DM 患者NAFLD 發(fā)病率較高。NAFLD 是一種代謝綜合征在肝臟的臨床表現(xiàn)，常伴隨著ALT、AST 輕度升高（通常在正常上限的1.5 ～2 倍），而且肝臟與腸道關(guān)系密切。因此，本研究進(jìn)一步研究了腸道菌群與肝功指標(biāo)的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)柔嫩梭菌類群、擬桿菌屬、腸球菌屬、大腸桿菌屬及擬桿菌/球形梭菌均與ALT 和（或）AST指標(biāo)相關(guān)，其中柔嫩梭菌類群、腸球菌屬、大腸桿菌屬與ALT 和（或）AST 成正相關(guān)，而擬桿菌屬、擬桿菌/球形梭菌與ALT 和（或）AST 成負(fù)相關(guān)，以上結(jié)果或許提示腸道菌群紊亂與T2DM 患者合并NAFLD 關(guān)系密切，二者可能存在共同的發(fā)病途徑。研究表示，胃腸功能的紊亂是觸發(fā)NAFLD 的重要因素之一［15］。腸道菌群通過改變吸收效率、影響膽堿、膽汁酸代謝、加重胰島素抵抗、改變腸道通透性等方面影響NAFLD 的進(jìn)展［16］。

影響腸道菌群組成的其中一個(gè)重要因素為飲食，飲食因素在形成腸道菌群過程中發(fā)揮的作用遠(yuǎn)大于基因因素［17］。研究表明高脂飲食改變了腸道菌群的組成結(jié)構(gòu)以及降低了豐富度與多樣性；而高糖飲食的小鼠也改變了腸道菌群的結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為厚壁菌門和擬桿菌的數(shù)目減少，高果糖攝入還會(huì)引起肝臟脂肪變性和啟動(dòng)炎性反應(yīng)，最終形成NAFLD［18］。國(guó)內(nèi)研究表明，通過服用益生菌制劑可以通過改善NAFLD 患者的腸道微生態(tài)失衡，提升血脂聯(lián)素水平，改善血糖、血脂代謝及NAFLD患者的肝臟損傷［19］。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)T2DM 患者每日攝入碳水化合物（%）及脂肪（%）較對(duì)照組顯著升高，存在高碳水化合物飲食及高脂飲食，并且乳酸桿菌屬與碳水化合物（%）成顯著性負(fù)相關(guān)，大腸桿菌屬與蛋白質(zhì)（%）成顯著性正相關(guān)，但具體機(jī)制尚不明確。本研究推斷過多的碳水化合物飲食可能抑制腸道乳酸桿菌屬的增殖，而長(zhǎng)期高蛋白飲食可能增加腸道內(nèi)具有較強(qiáng)水解及發(fā)酵蛋白能力的細(xì)菌如大腸桿菌的增殖。本研究沒有發(fā)現(xiàn)其余菌屬與飲食結(jié)構(gòu)間的相關(guān)性，考慮本研究樣本量較小，覆蓋菌群種類亦較少，未來需要更多的研究進(jìn)一步證實(shí)。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)T2DM 患者存在腸道菌群失調(diào)，并且與血糖、血脂、肝功等臨床代謝指標(biāo)及飲食結(jié)構(gòu)關(guān)系密切，推測(cè)腸道菌群在T2DM 的發(fā)生發(fā)展中可能存在重要的作用，進(jìn)而影響了T2DM 患者的各項(xiàng)代謝指標(biāo)。由于人體內(nèi)腸道菌群數(shù)量龐大且處于不斷變化的動(dòng)態(tài)平衡中，導(dǎo)致影響腸道菌群變化的因素也較多，如人體的自身因素、環(huán)境因素、飲食結(jié)構(gòu)、細(xì)菌自身因素及相互作用等方面。因此本研究尚存在一些不足之處，如未能排除用藥情況、不同膳食結(jié)構(gòu)及環(huán)境因素等方面對(duì)研究人群腸道菌群的影響，因此未來需進(jìn)一步的研究來加以論證：（1）進(jìn)一步研究初診T2DM 患者（無用藥基礎(chǔ)）中腸道菌群的變化；（2）降糖藥物或降脂藥物對(duì)T2DM 患者腸道菌群的影響；（3）進(jìn)一步研究不同膳食結(jié)構(gòu)對(duì)腸道菌群的影響；（4）補(bǔ)充多種益生菌對(duì)T2DM 患者代謝指標(biāo)及內(nèi)毒素水平的影響；（5）進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及菌群種類進(jìn)行研究。