陳向紅 白敏 張?jiān)煺?王祥豐

海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科（?？?70311）

目前越來(lái)越多的研究表明，淋巴細(xì)胞功能在各種臨床疾病如自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、病毒感染等都有異常改變，在各種疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中淋巴細(xì)胞功能的異常產(chǎn)生著極其重要的影響，血液中淋巴細(xì)胞功能的檢測(cè)是觀察機(jī)體細(xì)胞免疫水平的重要方法。臨床上常見(jiàn)的肺部疾病多存在有免疫功能的異常，而社區(qū)獲得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）、慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）及肺結(jié)核（tuberculosis，TB）等是臨床上最常見(jiàn)的三種呼吸系統(tǒng)疾病，目前仍存在較多病例治療效果欠佳、鑒別診斷困難等情況，因此筆者對(duì)211 例確診為CAP、COPD、TB 患者及78 例健康對(duì)照者進(jìn)行了T 淋巴細(xì)胞亞群、B 淋巴細(xì)胞及NK 細(xì)胞活性等功能的檢測(cè)及對(duì)比分析，以了解其免疫功能的變化及特點(diǎn)，試圖通過(guò)對(duì)其免疫系統(tǒng)功能進(jìn)行檢測(cè)及對(duì)比研究探討其臨床意義，為其臨床診斷、預(yù)防、治療及鑒別診斷提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2016年1月至2018年12月期間海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院根據(jù)臨床癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室和其他檢查確診為CAP 的患者72 例，其中男40 例、女32 例，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的《中國(guó)成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）》標(biāo)準(zhǔn)［1］。排除有先天性疾病、免疫功能異常、哮喘、支氣管擴(kuò)張、COPD、惡性腫瘤、妊娠期女性或哺乳期婦女；COPD 患者68例，其中男37 例、女31 例，均符合《內(nèi)科學(xué)》第8 版慢性阻塞性肺疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，同時(shí)排除了合并患有心、肝、腎等嚴(yán)重疾病和肺結(jié)核；TB 患者71例，其中男38 例、女33 例，均診斷符合《內(nèi)科學(xué)》第8 版肺結(jié)核診斷的標(biāo)準(zhǔn)［3］，排除艾滋病、糖尿病、肺外結(jié)核、腫瘤、既往明確寄生蟲(chóng)感染以及合并其他肺部疾病者；211 例患者年齡29～73 歲、平均48.33歲；健康對(duì)照組共78 例，其中男45 例、女33 例，年齡21～65歲、平均45歲，均來(lái)自海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院體檢中心的健康體檢者，均無(wú)心肺病史。各組間年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 肺部疾病組與對(duì)照組基本情況Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

表1 肺部疾病組與對(duì)照組基本情況Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

組別CAP 組COPD 組TB 組對(duì)照組例數(shù)72 68 71 78性別（例）女32 31 33 31男40 37 38 37年齡（歲）37±13.2 39±14.5 38±12.3 35±11.3

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法受試對(duì)象均于次日空腹采集EDTA 抗凝外周全血2 mL 于普通離心管中充分混勻，室溫（20 ～25℃）存放待用，8 h 內(nèi)作染色裂解處理，根據(jù)T、B、NK 細(xì)胞表面標(biāo)志，適當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記特異性單克隆抗體與淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過(guò)美國(guó)BD 公司FACSCalibur 流式細(xì)胞儀嚴(yán)格按照試劑盒及儀器操作說(shuō)明對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)定，即可了解相應(yīng)細(xì)胞的陽(yáng)性百分比和熒光強(qiáng)度。

1.2.2 儀器與試劑儀器FACSCalibur 流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD 公司生產(chǎn)，試劑包括MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4、MultiTEST CD3/CD16/CD56/CD45/CD19、FACS Lysing Solution（紅細(xì)胞裂解液）等均由美國(guó)BD 公司生產(chǎn)。

1.2.3 操作步驟取兩支上樣管，分別標(biāo)定樣本編號(hào)及管1、2，在管1 中加入20 μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗 體，管2 中 加 入20 μL CD3/CD16/CD56/CD45/CD19 抗體，充分混勻血液樣本，在每管中分別加入50 μL 全血樣本，充分混勻，避光室溫放置15 min，每管中加入450 μL 稀釋過(guò)的紅細(xì)胞裂解液（紅細(xì)胞裂解液用去離子水10 倍稀釋），充分混勻，避光室溫放置15 min，使用FACSCalibur 流式細(xì)胞儀測(cè)定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD8+/T、CD19+/CD3-細(xì)胞數(shù)目及NK 細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用表示。按照分組進(jìn)行方差齊性分析，方差齊性行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，方差不齊行Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3 組患者各項(xiàng)免疫細(xì)胞功能指標(biāo)變化：社區(qū)獲得性肺炎患者T 淋巴細(xì)胞亞群中CD3+與健康對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；雙陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞（CD4+CD8+/T）及NK 細(xì)胞與對(duì)照組相比均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但B 淋巴細(xì)胞（CD19+/CD3-）功能未見(jiàn)明顯異常。慢性阻塞性肺疾病組T 淋巴細(xì)胞亞群中CD3+與健康對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；雙陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞（CD4+CD8+/T）及NK 細(xì)胞與對(duì)照組相比均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；B 淋巴細(xì)胞（CD19+/CD3-）功能也未見(jiàn)明顯異常。肺結(jié)核病組T 淋巴細(xì)胞亞群中CD3+與健康對(duì)照組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；雙陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞（CD4+CD8+/T）與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異；NK細(xì)胞與健康對(duì)照組相比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；B 淋巴細(xì)胞（CD19+/CD3-）功能與健康對(duì)照組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見(jiàn)表2。

表2 3 組患者各項(xiàng)免疫細(xì)胞功能指標(biāo)變化結(jié)果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

表2 3 組患者各項(xiàng)免疫細(xì)胞功能指標(biāo)變化結(jié)果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

注：與對(duì)照組相比：*P ＜0.05，**P ＜0.01

組別對(duì)照組COPD 組CAP 組TB 組F 值P 值總T 淋巴細(xì)胞CD3+68.38±7.36 60.55±16.23**65.51±12.46*61.33±16.62*7.690＜0.001雙陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞CD4+CD8+/T 0.63±0.69 1.95±6.05*1.01±1.31*0.80±0.96 3.559 0.014 NK 細(xì)胞16.14±6.33 23.02±15.78**18.93±10.27*29.57±15.39**16.751＜0.001 B 淋巴細(xì)胞CD19+/CD3-12.54±4.78 13.35±12.01 12.87±10.05 5.90±5.25**7.587＜0.001

3 討論

淋巴細(xì)胞在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能中發(fā)揮著重要作用，分為主要參與細(xì)胞免疫的T 淋巴細(xì)胞（CD3+）和主要參與體液免疫的B 淋巴細(xì)胞（CD19+）和NK 細(xì)胞（CD16+/CD56+）等。T 淋巴細(xì)胞（CD3+）表達(dá)降低多提示細(xì)胞免疫功能低下，機(jī)體易反復(fù)發(fā)生感染。T 淋巴細(xì)胞又分為輔助性T 淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+）和抑制性/細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+），后兩者之間相互誘導(dǎo)和制約形成了T 細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，對(duì)于調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)和維持免疫平衡具有重要作用［4］。CD19+為B 淋巴細(xì)胞亞群中最具標(biāo)志性的分子，參與B 細(xì)胞的活化、增殖及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)人體的免疫應(yīng)答［5］。CD4+CD8+雙陽(yáng)性（double positive，DP）T 細(xì)胞是一種指同時(shí)表達(dá)CD4和CD8 抗原的未成熟的T 細(xì)胞，廣泛存在于多種動(dòng)物和人的外周血及免疫器官，具有獨(dú)特的免疫活性，能受到有絲分裂原、病原體及毒性物質(zhì)等的刺激而增殖［6-7］。唐甜等［8］研究發(fā)現(xiàn)，急性呼吸系統(tǒng)感染性疾病DP 細(xì)胞明顯增高，提示免疫系統(tǒng)異常參與了CAP 疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，檢測(cè)DP 細(xì)胞對(duì)于急性呼吸系統(tǒng)感染性疾病的診斷具有重要意義；NK 細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，自身具有抗腫瘤、抗感染及免疫調(diào)節(jié)等功能，還能有效的調(diào)節(jié)T 淋巴細(xì)胞活性［9-11］。T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞及NK 細(xì)胞的異?？梢越忉屧S多疾病發(fā)病機(jī)理，對(duì)患者的免疫功能和預(yù)后做出判斷以及臨床指導(dǎo)治療。

有研究［12］表明，老年肺炎患者CD4+CD+25 T 細(xì)胞減少；調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子升高，后者可能有助于肺炎組織修復(fù)，防止致病性炎癥的發(fā)生。反復(fù)發(fā)作的氣道炎癥和破壞性肺氣腫是COPD 的主要病理特征［13］。COPD 氣道炎癥主要由肺部浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞炎性介質(zhì)過(guò)量分泌導(dǎo)致［14］，其中CD8+T 細(xì)胞是關(guān)鍵的致炎淋巴細(xì)胞亞群［15］。有研究表明，COPD 患者外周血CD8+T 細(xì)胞顯著增加，并且患者的肺功能下降與存在于肺內(nèi)的CD8+數(shù)量和CD4+/CD8+比率的下降有關(guān)［16-21］。機(jī)體感染結(jié)核時(shí)，結(jié)核病變部位CD4+可發(fā)生凋亡，由此使結(jié)核分枝桿菌喪失了原有生存環(huán)境，清除炎癥部位的感染細(xì)胞，抑制結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)和復(fù)制，從而控制結(jié)核分枝桿菌感染［22］。有研究發(fā)現(xiàn)，呼吸系統(tǒng)患者受感染后其免疫功能出現(xiàn)紊亂現(xiàn)象可能與以下因素有關(guān)：（1）病原體誘導(dǎo)了CD8+的細(xì)胞增多而抑制了CD4+細(xì)胞的合成；（2）機(jī)體的感染引起了促腎上腺皮質(zhì)激素合成與類固醇糖皮質(zhì)激素分泌增加［23］，通過(guò)抑制了T 淋巴細(xì)胞增殖的活化和增加CD4+細(xì)胞的調(diào)亡等機(jī)制而使CD4+細(xì)胞的合成減少［24］。

呼吸道是一個(gè)開(kāi)放的氣道，因此是病原體感染的主要靶器官，一方面機(jī)體免疫力低下容易導(dǎo)致呼吸道病原體感染，另一方面病原體感染又可降低呼吸道防御功能，同時(shí)機(jī)體對(duì)不同病原體的免疫反應(yīng)亦不相同，因此研究常見(jiàn)呼吸道感染性疾病機(jī)體免疫功能狀況對(duì)其診斷、治療及預(yù)后均有重要意義，本研究通過(guò)觀察機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)不同疾病的反應(yīng)試圖尋找有利于疾病鑒別診斷的依據(jù)，為國(guó)內(nèi)首次報(bào)道。本研究結(jié)果顯示：CAP、COPD 及TB 患者均存在CD3+功能明顯降低，與筆者以往的研究結(jié)論一致，說(shuō)明呼吸道疾病患者T淋巴細(xì)胞（CD3+）表達(dá)降低多提示細(xì)胞免疫功能低下，機(jī)體易反復(fù)發(fā)生感染。同時(shí)三者NK 細(xì)胞功能明顯升高，說(shuō)明NK 細(xì)胞發(fā)揮了其抗感染及免疫調(diào)節(jié)等功能；但雙陽(yáng)性T 淋巴細(xì)胞（CD4+CD8+/T）功能升高僅存在CAP 及COPD 患者中，而B(niǎo) 淋巴細(xì)胞（CD19+/CD3-）功能明顯降低僅存在TB 患者，說(shuō)明結(jié)核啟動(dòng)了與前兩者不同的免疫途徑。由此可見(jiàn)，通過(guò)以上不同肺部疾病的淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果的區(qū)別，可對(duì)肺部感染、肺結(jié)核及慢性阻塞性肺疾病的診斷、治療及預(yù)后判斷，尤其是對(duì)重癥及診斷、治療困難患者提供新的認(rèn)識(shí)。那么，通過(guò)觀察不同疾病不同的免疫反應(yīng)，是否能夠成為鑒別診斷的標(biāo)志物值得探索，進(jìn)一步的觀察研究有可能為鑒別診斷提供新的思路。