賈修歧　楊新宇　金志民

摘要：采用PAGE方法對大林姬鼠（Apodemus peninsulae）和黑線姬鼠（Apodemus agrarius）血清中SOD、POD兩種免疫酶的分布和活性進(jìn)行比較分析并建立SOD、POD電泳圖譜。結(jié)果表明，在大林姬鼠和黑線姬鼠血清中SOD和POD均有表達(dá)，但兩種鼠個體間的酶的分布和活性存在明顯差異。

關(guān)鍵詞：大林姬鼠（Apodemus peninsulae）;黑線姬鼠（Apodemus agrarius）;SOD;POD

中圖分類號：Q592.1;Q956 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）18-0156-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.18.038 ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Comparative analysis of two kinds of immune enzymes in serum of

Apodemus peninsulaeand and Apodemus agrarius

JIA Xiu-qi，YANG Xin-yu，JIN Zhi-min

（School of Life Science and Technology，Mudanjiang Normal University，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China）

Abstract： PAGE method was adopted to compare and analyze the distribution and activity of SOD and POD 2 immune enzymes in the serum of Apodemus peninsulae and Apodemus agrarius， and the electrophoresis patterns of SOD and POD enzymes were established. The results showed that SOD and POD were expressed in the serum of Apodemus peninsulae and Apodemus agrarius， but there were significant differences in the distribution and activity of enzymes between the two species.

Key words： Apodemus peninsulae; Apodemus agrarius; SOD; POD

大林姬鼠和黑線姬鼠都是廣泛分布于中國農(nóng)田和林區(qū)的主要破壞者，且兩種鼠分類地位較近，在生境選擇和食性方面存在較大重疊[1，2]。

超氧化物酶（SOD）和過氧化物酶（POD）是生物體中廣泛存在且起至關(guān)重要作用的免疫類酶，超氧化物歧化酶屬于金屬酶類。SOD能特異地歧化生物體內(nèi)產(chǎn)生的超氧負(fù)離子自由基（O2-），以維持O2-的生理平衡濃度，在抗輻射損傷、抗炎癥、預(yù)防衰老以及防治腫瘤方面起重要作用，作為研究與自由基有關(guān)反應(yīng)的特殊工具酶;過氧化物酶存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)，其主要功能是清除氨基酸分解代謝及糖醛酸合成代謝等過程中形成的過氧化物，在肝細(xì)胞中數(shù)量特別多。過氧化物酶體的標(biāo)志酶是過氧化氫酶，它的作用主要是將過氧化氫水解，對細(xì)胞起保護(hù)作用[3，4]。試驗(yàn)動物作為科技基礎(chǔ)支撐條件之一，對人類生存以及人類科技活動有重要作用，越來越受到世界各國政府和科學(xué)家的重視，甚至作為衡量一個國家和地區(qū)科學(xué)技術(shù)水平高低的重要標(biāo)志之一，了解兩種鼠血清中SOD和POD對其進(jìn)行試驗(yàn)動物化具有深遠(yuǎn)意義[5]。

近年來，有關(guān)大林姬鼠和黑線姬鼠的研究報(bào)道已有許多[6-11]。但關(guān)于這兩種鼠血清中SOD和POD的活性與分布還未見報(bào)道。本試驗(yàn)對大林姬鼠和黑線姬鼠血清中SOD和POD進(jìn)行比較分析，以期為大林姬鼠和黑線姬鼠的試驗(yàn)動物化研究以及對農(nóng)林害鼠的防治提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?試驗(yàn)動物 ?試驗(yàn)鼠于2019年3—5月捕自黑龍江省牡丹江市三道關(guān)林場，健康成年個體各3只。

1.1.2 ?試驗(yàn)儀器 ?DYY-III2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀，北京市六一儀器廠生產(chǎn);高速冷凍離心機(jī)（Beckman coultar）、微量移液槍（Eppendorf）、凝膠成像系統(tǒng)，美國Alpha公司AlphaImager Mini。

1.1.3 ?試驗(yàn)藥品 ?Tris、HCl、TEMED、過硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚藍(lán)、蔗糖、瓊脂糖、丙三醇、冰乙酸、乙酸鈉、氯化鈉、過氧化氫、核黃素、聯(lián)苯胺等均為天津市大茂化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的分析純或生化試劑，氯化硝基四氮唑藍(lán)（NBT）、吩嗪硫酸甲酯（PMS）由Solarbio生產(chǎn)。

1.2 ?方法

1.2.1 ?血清制備 ?從大林姬鼠、黑線姬鼠心臟采血，室內(nèi)靜置20 min后于4 000 r/min、4 ℃離心20 min，上清液為血清。

1.2.2 ?電泳 ?采用PAGE電泳的方法[12]，對大林姬鼠和黑線姬血清中SOD和POD兩種免疫酶進(jìn)行比較分析，SOD、POD染色方法參照文獻(xiàn)[13]。為避免試驗(yàn)偶然誤差，分別在相鄰點(diǎn)樣孔沖刺點(diǎn)樣。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?兩種鼠血清中SOD的電泳圖譜與分析

由圖1、表1可見，大林姬鼠和黑線姬鼠血清中SOD共分出10條譜帶，遷移率范圍為0.17～0.52，其中大林姬鼠分離出6條譜帶，黑線姬鼠分離出6條譜帶，SOD6和SOD9譜帶為大林姬鼠和黑線姬鼠共有帶，SOD6活性表現(xiàn)為黑線姬鼠>大林姬鼠，SOD9活性表現(xiàn)為大林姬鼠>黑線姬鼠;SOD2、SOD4、SOD5、SOD10為大林姬鼠特有譜帶，活性表現(xiàn)為SOD4>SOD5>SOD10>SOD2;SOD1、SOD3、SOD7、SOD8為黑線姬鼠特有譜帶，活性表現(xiàn)為SOD1>SOD3>SOD7>SOD8。

由圖2、表2可見，大林姬鼠和黑線姬鼠血清中POD共分出11條譜帶，遷移率范圍為0.08～0.51，其中大林姬鼠分離出8條譜帶，黑線姬鼠分離出9條譜帶。POD2、POD4、POD5、POD7、POD8、POD10 6條譜帶為大林姬鼠和黑線姬鼠所共有，其中POD2、POD4、POD5活性表現(xiàn)為大林姬鼠>黑線姬鼠;POD7、POD8、POD10活性表現(xiàn)為黑線姬鼠>大林姬鼠。POD1和POD11為大林姬鼠特有帶，活性表現(xiàn)為POD1>POD11;POD3和POD9為黑線姬鼠特有帶，活性表現(xiàn)為POD3>POD9。

3 ?小結(jié)與討論

由兩種鼠的電泳圖譜可知，大林姬鼠和黑線姬鼠血清中SOD和POD的分布相似，但兩種鼠之間酶的活性存在明顯差異，大林姬鼠血清中SOD譜帶數(shù)雖然多于黑線姬鼠，但SOD活性大多較黑線姬鼠弱;黑線姬鼠血清中POD的譜帶數(shù)和活性均強(qiáng)于大林姬鼠。表明黑線姬鼠在自然界中的抗逆性強(qiáng)于大林姬鼠。這可能與兩種鼠的生境選擇相關(guān)，黑線姬鼠不僅分布在農(nóng)田和林區(qū)，也有少數(shù)分布在草原和高山地區(qū)[14]。生境范圍廣說明該種動物對不同生境的適應(yīng)能力強(qiáng)，從而反射出該種動物的抗逆性強(qiáng)。

本試驗(yàn)通過PAGE法對大林姬鼠和黑線姬鼠血清中的兩種免疫酶SOD和POD進(jìn)行比較、分析，并建立SOD和POD電泳圖譜。研究結(jié)果表明，兩種鼠血清中SOD和POD均有表達(dá)，但其酶活性存在明顯差異。大林姬鼠和黑線姬鼠作為試驗(yàn)動物具備多種優(yōu)勢，且兩者均為農(nóng)林害鼠，通過對大林姬鼠和黑線姬鼠血清中兩種免疫酶的研究可為其作為試驗(yàn)動物和農(nóng)林業(yè)害鼠的防治提供基礎(chǔ)生化依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 夏武平.大林姬鼠種羣數(shù)量與巢區(qū)的研究[J].動物學(xué)報(bào)，1961， 13（Z1）：171-180.

[2] 楊再學(xué)，郭永旺，王 ?登，等.貴州地區(qū)黑線姬鼠種群繁殖特征[J].動物學(xué)雜志，2016，51（6）：939-948.

[3] 周虞燦，邵鄰相，何新霞.三種鼠組織超氧化物歧化酶和乳酸脫氫酶同工酶的比較研究[J].獸類學(xué)報(bào)，1990，10（4）：299-303.

[4] 陳曉虹，王林嵩，瞿文元.河南省小鯢科兩種動物酯酶、過氧化物酶同工酶的比較研究[J].動物學(xué)雜志，2000，35（5）：19-23.

[5] 徐 ?平.實(shí)驗(yàn)動物資源開發(fā)、保存和共享利用[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（Z1）：48-56.

[6] 黃廣傳，司俊杰，蒙 ?新，等.不同生境和季節(jié)社鼠與大林姬鼠的微生境選擇比較[J].獸類學(xué)報(bào)，2019，39（3）：242-251.

[7] KIM J，KIM W，AN J，et al. Complete genome sequencing and comparative genomic analysis of Helicobacter Apodemus isolated from the wild Korean striped field mouse （Apodemus agrarius） for potential pathogenicity[J].Frontiers in pharmacology，2018，9：838.

[8] JASON L A，MINORU N，KENTA U，et al. Comparison of the intestinal helminth community of the large Japanese field mouse （Apodemus speciosus） between urban，rural，and natural sites in Hokkaido，Japan[J].Parasitology international，2019，70：51-57.

[9] KARAMYSHEVA T V，TORGASHEVA A A，YEFREMOV Y R，et al. Spatial organization of fibroblast and spermatocyte nuclei with different B-chromosome content in Korean field mouse，Apodemus peninsulae（Rodentia，Muridae）[J].Genome，2017，60（10）：815-824.

[10] 殷強(qiáng)玲，謝 ?昀，張全福，等.嚙齒類動物中漢坦病毒感染血清學(xué)和病原學(xué)檢測方法比較研究[J].病毒學(xué)報(bào)，2019，35（2）：196-201.

[11] SKIVKA L，RUDYK M，HURMACH I，et al. Serum level of HMGB1 indicates outcome of the treatment of tumor bearing animals with antineoplastic drug NSC631570[J].Meta gene，2018，17（1）：S17.

[12] 易 ?誠，楊春文，金建麗，等.棕黑錦蛇雌雄個體不同器官/組織同工酶比較分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（11）：218-221.

[13] 陳毓荃.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)[M].北京：科學(xué)出版社，2002.6，30.

[14] 杜增瑞，王澤長，樸相根.黑線姬鼠的形態(tài)、生活習(xí)性及其分布[J].吉林醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1963（3）：489-494.