閆超群，張 申，謝 順，曾松情，黃春梅，顧 欣，曹 瑩，黃士新，黃顯會

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510642；2.上海市動物疫病預(yù)防控制中心，上海長寧201103)

泰地羅新(Tildipirosin)是新型十六環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，和其他大環(huán)內(nèi)酯類抗生素一樣，泰地羅新的抗菌機(jī)理主要是因?yàn)樗芘c細(xì)菌核糖體的50S亞基相結(jié)合。因而它能阻礙肽鏈的合成與延長，使細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成受阻，達(dá)到抗菌的效果[1-6]。泰地羅新主要用于由豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌等引起的豬呼吸道疾病(SRD)，以及由牛溶血性曼氏桿菌(Mannheimiahaemolytica), 多殺性巴氏桿菌, 睡眠嗜組織菌(Histophilussomni)等引起的牛呼吸道疾病(BRD)。歐盟藥品管理局(EMA)和美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)已批準(zhǔn)泰地羅新注射液，商品名為Zuprevo。泰地羅新注射液單次給藥即可提供全程治療，在牛和豬的給藥劑量均為4 mg/kg·bw，牛的給藥方式為皮下注射，豬的給藥方式為肌肉注射[1,7-8]。本試驗(yàn)對國產(chǎn)泰地羅新注射液在靶動物豬體內(nèi)進(jìn)行了安全性試驗(yàn), 為其臨床上安全用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。泰地羅新化學(xué)式見圖1。

圖1 泰地羅新化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 泰地羅新注射液，含量4%(100 mL∶4 g)，批號：20150401，由上海同仁藥業(yè)有限公司提供。血清生化指標(biāo)測定試劑,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 儀器設(shè)備 全自動血液學(xué)分析儀：BS-300型，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。血液生化分析儀：BS-5 000型，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。光學(xué)顯微鏡：XSP-2C型，上海光學(xué)儀器五廠。顯微照相設(shè)備：Axioskop2 plus型，德國ZEISS公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 健康二元雜交豬24頭，2月齡左右，體重為15 kg左右。試驗(yàn)前按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為全價(jià)日糧(不含抗菌藥物)，觀察兩周。

1.4 分組與給藥 選取臨床表現(xiàn)健康的豬進(jìn)行試驗(yàn)。 24頭豬隨機(jī)分為4組，各組6頭，設(shè)為空白對照組(生理鹽水)、泰地羅新注射液推薦劑量組(4 mg/kg·bw)、3倍推薦劑量組(12 mg/kg·bw)、5倍推薦劑量組(20 mg/kg·bw)，給藥方式均為單次頸部肌肉注射給藥。

1.5 檢查指標(biāo)

1.5.1 一般臨床觀察 在給藥前及給藥后觀察豬的精神、采食、飲水、排泄等一般臨床行為，并于給藥前、給藥后第7天和第14天對豬進(jìn)行稱重。

1.5.2 血液常規(guī)指標(biāo) 用血液分析儀測定全血中白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞容積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCHC)、血紅蛋白(HGB)等8項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)。

1.5.3 血清生化指標(biāo) 用全自動生化分析儀測定血清中肌酐(CREA)、血糖(GLU)、鈣(Ca)、磷(P)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、血液尿素氮(BUN)、 乳酸脫氫酶(LDH)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、肌酸激酶(CK)、總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、鎂(Mg)等19項(xiàng)指標(biāo)。

1.5.4 病理組織學(xué)檢查 于給藥后第14天時(shí)宰殺所有試驗(yàn)豬，解剖過程中觀察一般肉眼可見變化，并采集多種組織器官(肝、腎、心臟、脾臟、腦組織)制作病理切片，觀察病理切片組織學(xué)變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn) 在試驗(yàn)初期，泰地羅新注射液高劑量組(20 mg/kg·bw)的豬出現(xiàn)劃水，抽搐，喘氣，站立不穩(wěn)等癥狀，但該反應(yīng)恢復(fù)比較快，高劑量組的豬于1 h后死亡2頭。其余各劑量組及空白對照組的豬，進(jìn)食、飲水正常，行為正常，呼吸和排泄未見異常，臨床表現(xiàn)正常。因此，建議該藥臨床使用劑量不宜過高。國外對該藥的靶動物安全性評價(jià)也有類似的報(bào)道[7]。

2.2 體重 泰地羅新注射液各劑量組及空白對照組在給藥前及給藥后7 d和14 d進(jìn)行稱重。結(jié)果表明，給藥前后泰地羅新注射液各劑量組與空白對照組豬的體重在不同時(shí)間點(diǎn)均無顯著性差異。

2.3 血液常規(guī)指標(biāo)檢測結(jié)果 由表1可知，給藥后14 d的采樣點(diǎn)，給藥組白細(xì)胞(WBC)數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。這可能是泰地羅新注射液引起動物體的炎癥損傷。其他指標(biāo)相對于空白對照組都沒有顯著性變化。血常規(guī)結(jié)果見表1。

2.4 血液生理生化指示檢測結(jié)果 由表2可知，生化指標(biāo)γ-GT、ALT、TG、GLB、TP、TC、UA、P和Mg在給藥后7 d，試驗(yàn)組顯著高于空白對照組(P<0.05)，給藥14 d后與空白組無顯著性差異(P>0.05)。其中，γ-GT 、ALT、TP、TC、TG和GLB的增加。可能是泰地羅新注射液對機(jī)體肝臟損傷的表現(xiàn)。ALT是動物最敏感的肝功能指標(biāo)之一。血清中TC、P和Mg水平給藥后隨著給藥劑量的增加而降低，說明泰地羅新對 P、Mg 在血液中的含量有一定影響，這可能是由于腎或甲狀腺功能受損引起的。給藥后AST、ALB、CK和Glu等指標(biāo)呈降低趨勢，臨床無參考意義[9-11]。上述這種差異隨著給藥后時(shí)間的延長，逐漸無顯著性差異(P>0.05)。

2.5 病理組織學(xué)檢查結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)束后，對各試驗(yàn)組每組宰殺1頭豬，經(jīng)剖檢檢查，各組組織器官未見異常。采集豬大腦、心臟、腎臟、脾臟、肝臟等各部位組織，進(jìn)行H.E.染色，并通過顯微鏡鏡檢觀察

有無病理變化。病理組織切片見中插彩版圖2～圖9。由中插彩版圖9可知，在20 mg/kg·bw組中，我們發(fā)現(xiàn)一些心肌細(xì)胞出現(xiàn)變性。其他試驗(yàn)組無明顯的病變發(fā)生。這說明泰地羅新高劑量注射可引起仔豬心臟的損傷。

3 結(jié)論

對豬單次肌肉注射泰地羅新注射液, 并進(jìn)行臨床癥狀、血液生理生化指標(biāo)對比分析, 與給藥前相比，除高劑量組(臨床推薦劑量的5倍)，所有動物給藥后采食和行動正常, 呼吸和排泄也未見異常。在4～12 mg/kg·bw劑量范圍內(nèi), 肌肉注射泰地羅新注射液, 對豬血液常規(guī)指標(biāo)和生理生化指標(biāo)無明顯影響。泰地羅新注射液符合注射劑相關(guān)要求，可用于臨床注射。但在臨床使用時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格控制給藥劑量，保證人畜的健康安全。泰地羅新注射液在臨床使用中按“肌肉注射, 每千克體重, 豬4 mg/kg·bw，單次給藥”的用法和用量使用安全, 無明顯不良反應(yīng)。