文/董 永 仇普斌 郝東升 任 妮

（嘉立荷牧業(yè)集團(tuán)有限公司）

奶牛乳房炎是牧場(chǎng)的三大疾病之一，一直是困擾奶牛養(yǎng)殖業(yè)的世界性難題，每年給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1～3]。引起奶牛乳房炎的致病菌有200 余種，最主要的致病菌包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、環(huán)境性鏈球菌（停乳鏈球菌、乳房鏈球菌、糞腸球菌等）、凝固酶陰性葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌等[4]。受地域、氣候、季節(jié)、墊料方式、養(yǎng)殖規(guī)模、管理模式等多種因素的影響[5]，引起奶牛乳房炎致病微生物的種類各異。根據(jù)多個(gè)國(guó)家對(duì)臨床型乳房炎致病菌流行狀況的調(diào)查和報(bào)道數(shù)據(jù)顯示，不同國(guó)家、地區(qū)間流行的乳房炎致病菌存在很大差異。例如，在挪威和瑞典，臨床型乳房炎最常見的致病菌為金黃色葡萄球菌，停乳鏈球菌和大腸桿菌居于次位；在荷蘭，大腸桿菌性臨床型乳房炎最常見，肺炎克雷伯菌引起的乳房炎較少；而在美國(guó)，引起乳房炎最常見的致病菌是大腸桿菌和肺炎克雷伯菌；在新西蘭，乳房鏈球菌是引起乳房炎（包括臨床型和隱性乳房炎）的最主要致病菌，大腸桿菌性臨床型乳房炎較為少見。

掌握乳房炎致病菌的發(fā)病規(guī)律，牧場(chǎng)可以根據(jù)病原菌特點(diǎn)，判斷屬于傳染性還是環(huán)境性，使其在評(píng)估高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)有的放矢，選擇性淘汰高風(fēng)險(xiǎn)傳染源；亦可對(duì)執(zhí)行的治療方案進(jìn)行評(píng)估，及時(shí)調(diào)整。例如，出現(xiàn)大量某種抗生素的耐藥基因時(shí)，可及時(shí)調(diào)整抗生素的使用類型。本文對(duì)天津地區(qū)乳房炎致病菌的流行情況進(jìn)行調(diào)查，以對(duì)現(xiàn)階段的致病菌特點(diǎn)進(jìn)行宏觀的了解，并對(duì)在不同區(qū)域、不同管理模式下的乳房炎發(fā)生情況進(jìn)行對(duì)比和剖析。

表1 牛奶樣品類型與數(shù)量

表2 檢測(cè)指標(biāo)

表3 2017—2018年檢測(cè)指標(biāo)檢出率

1 材料與方法

1.1 樣品來源與數(shù)量

牛奶樣品來自天津地區(qū)各牧場(chǎng)的臨床型乳房炎奶樣、亞臨床型乳房炎奶樣以及大罐奶型奶樣，類型和采樣數(shù)量見表1。

1.2 樣品采集

1.2.1 樣品采集標(biāo)準(zhǔn)

采集對(duì)象是上市大罐奶、臨床型和亞臨床型乳房炎患病牛，包含乳房腫脹、產(chǎn)量降低、水樣乳、血乳或乳汁成絮狀以及體細(xì)胞數(shù)檢測(cè)＞50×104個(gè)/mL的樣品。

1.2.2 樣品采集方法

樣本采集要求無菌，乳房炎患病牛嚴(yán)格按照擠奶程序，采集棄掉前三把奶后的乳汁3 m L[6]，自然脫杯后再采集3 mL乳汁混合于無菌容器內(nèi)，置-20 ℃保存。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 檢測(cè)設(shè)備

恒溫?cái)U(kuò)增微流控芯片核酸分析儀（晶芯?RTisochip TM-B）、微型分光光度計(jì)（晶芯NanoQ?）、奶牛乳房炎致病微生物快速檢測(cè)試劑盒（晶芯）。

1.3.2 檢測(cè)指標(biāo)

試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)16 項(xiàng)，詳見表2。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 致病菌流行情況

2017—2018年共檢測(cè)樣本516個(gè)，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的樣本共計(jì)415 個(gè)，陽(yáng)性率80.43%，主要致病微生物及β-內(nèi)酰胺類、甲氧西林的耐藥基因檢出率見表3。

表4 2018年與2017年檢測(cè)指標(biāo)檢出率對(duì)比

檢測(cè)結(jié)果顯示，引起天津地區(qū)奶牛乳房炎發(fā)病率最高的微生物為乳房鏈球菌，其次為牛支原體、牛棒狀桿菌、大腸桿菌，發(fā)病比例均＞15.00%，無乳鏈球菌和肺炎克雷伯氏菌的發(fā)病率接近10.00%，而耐β-內(nèi)酰胺類基因和耐甲氧西林葡萄球菌2 個(gè)耐藥基因合計(jì)為11.24%。

2.2 2017—2018 年 流 行 情況對(duì)比

2018年與2017年奶牛乳房炎致病菌流行情況對(duì)比發(fā)現(xiàn)，差異顯著的指標(biāo)為牛支原體發(fā)病率降低13.80 個(gè)百分點(diǎn)，牛棒狀桿菌降低10.93 個(gè)百分點(diǎn)，無乳鏈球菌降低7.37 個(gè)百分點(diǎn)，而耐藥基因增加6.43 個(gè)百分點(diǎn)，其中耐甲氧西林葡萄球菌增加7.05 個(gè)百分點(diǎn)（表4）。

3 分析與討論

乳房炎是困擾奶牛養(yǎng)殖行業(yè)的重大問題，受地域、氣候、季節(jié)、墊料類型、養(yǎng)殖規(guī)模、管理模式等多種因素的影響，因此引起奶牛乳房炎致病微生物的種類各異。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，引起乳房炎的主要致病微生物是金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌，占90%以上[7，8]。本研究發(fā)現(xiàn)，引起天津地區(qū)奶牛乳房炎發(fā)病比例最高的致病微生物是乳房鏈球菌，與其他研究結(jié)果一致。

由于在奶牛乳房炎臨床治療過程中不合理地使用抗生素，導(dǎo)致了乳房炎致病菌出現(xiàn)嚴(yán)重的抗生素耐藥現(xiàn)象。蘇洋等[9]研究結(jié)果顯示，在內(nèi)蒙古地區(qū)，金黃色葡萄球菌乳房炎對(duì)青霉素的耐藥率高達(dá)94.74%。而本研究發(fā)現(xiàn)，在僅檢測(cè)2 個(gè)耐藥基因的情況下，耐藥性比例高達(dá)11.24%，并且2018年相較2017年耐藥性呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)，導(dǎo)致近年來乳房炎的治療效果不佳，治愈率降低，因乳房炎造成的奶牛淘汰率也隨之增加。因此，在臨床治療上，只有結(jié)合致病菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)牧場(chǎng)用藥，加強(qiáng)抗生素使用的管理，注意輪換用藥、交叉用藥，才能快速、準(zhǔn)確地提高治療效果，減少耐藥性的產(chǎn)生。