王 新，趙小美，張平平，汲 霞，胡國(guó)強(qiáng)

(1齊魯醫(yī)藥學(xué)院 藥學(xué)院，淄博 255213；2河南大學(xué)藥物研究所，開(kāi)封 475001)

甲狀腺乳頭狀癌重要的致病機(jī)制是RET/PTC基因重排，而RET基因重排的現(xiàn)象在炎癥反應(yīng)中也有存在。腫瘤相關(guān)因子NF-κB是免疫和炎癥反應(yīng)重要的調(diào)節(jié)因子，同時(shí)也是腫瘤重要的啟動(dòng)因子[1]。雖然炎癥與致癌基因相互作用的機(jī)制尚不明確，但有研究表明[2]，炎癥有促進(jìn)腫瘤發(fā)展的趨勢(shì)。炎癥是腫瘤的特征反應(yīng)之一，那么炎癥與腫瘤之間的關(guān)系將為新型抗腫瘤藥物的研發(fā)提供新的思路。

具有1,2-苯并噻嗪結(jié)構(gòu)母核的抗炎藥被稱為昔康類藥物，第一個(gè)上市的藥物為吡羅昔康，由吡羅昔康前體酯或吡羅昔康甲基物與2-氨基吡啶反應(yīng)得到。吡羅昔康是很好的COX-2抑制劑，通過(guò)抑制COX-2的活性，從而抑制花生四烯酸的生成，導(dǎo)致前列腺素合成受阻，進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用。

目前，1,3,4-三氮唑類化合物廣泛應(yīng)用于各種疾病的治療中，由于其具有廣泛的生物活性，也常常出現(xiàn)在具有生物活性的農(nóng)藥、醫(yī)藥等化合物中。該類化合物具有抗結(jié)核[3]、抗腫瘤[4-6]、抗真菌[7-8]、殺菌[9]、抗病毒[10]、抗驚厥[11]、抗癲癇[12]等性能，因而受到廣大研究者的廣泛關(guān)注?；诖?，本文以吡羅昔康甲基物為原料，用雜環(huán)、稠雜環(huán)作為1,2-苯并噻嗪環(huán)C-3取代基的生物電子等排體，經(jīng)多步反應(yīng)合成一系列咪唑并[1,2-b][1,3,4]三氮唑的衍生物，合成路線見(jiàn)路線1。

Scheme1 Synthetic route of the target compounds

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

熔點(diǎn)用毛細(xì)管法測(cè)定，溫度未校正；AM2400型核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；HP1100型質(zhì)譜儀(美國(guó)Agilent公司)；PE2400-Ⅱ元素分析儀(美國(guó)PE公司)；試劑均為市售分析純，未經(jīng)處理，直接使用。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 化合物2的合成 將吡羅昔康甲基物1(26.9 g，0.1 mol)，80%水合肼(15.0 g，0.3 mol)和無(wú)水乙醇270 mL依次加入500 mL三口瓶中，加熱回流反應(yīng)6 h，蒸出乙醇使反應(yīng)液溫度達(dá)到100 ℃，再回流6 h。減壓回收溶劑，得黏稠狀物質(zhì)，用乙醇重結(jié)晶，抽濾得黃色粉末狀化合物220.2 g。收率75%，mp：240～242 ℃。

1.2.2 化合物3的合成 取化合物2(13.5 g，0.05 mol)，加入三氯氧磷27 mL，冰浴降溫至0 ℃左右，控制溫度(0～5 ℃)，分批加入5-氨基-1,2,4-三氮唑-3-羧酸(7.7 g，0.06 mol)，加畢，冰浴(0～5 ℃)反應(yīng)1 h后，自然升至室溫反應(yīng)6 h，加熱回流反應(yīng)約12 h，將反應(yīng)液趁熱倒入冰水中，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至2～3，得目標(biāo)化合物。采用乙醇和水的混合溶劑對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥，得黃色化合物34.0 g。收率22%，mp：263～265 ℃。

1.2.3 化合物4的合成 取化學(xué)物3(3.61 g，0.01 mol)，溴代苯乙酮(2.4 g，0.012 mol)，無(wú)水乙醇54 mL，依次加入到250 mL三口瓶中，加熱至回流，反應(yīng)8 h，TLC檢測(cè)，原料反應(yīng)完全后，自然冷卻至室溫，析出結(jié)晶，過(guò)濾，得黃色粉末狀化合物43.2 g。收率69%，mp：256～259 ℃。

1.2.4 化合物5的合成 向100 mL三口瓶中，加入DMF4.5 mL，冰鹽浴降溫0 ℃以下，緩慢滴加POCl313 mL，溫度小于10 ℃，滴畢，緩慢加入化合物4(2.25 g，0.004 9 mol)，加畢，升溫至80～90 ℃反應(yīng)3 h后，冷卻至室溫，加入甲苯20 mL，緩慢滴加水至無(wú)HCl氣體生成，升溫至70～80 ℃反應(yīng)1 h，倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，飽和NaHCO3洗滌有機(jī)層，干燥后濃縮，析出結(jié)晶，過(guò)濾，得棕色化合物50.7 g。收率29%，mp：236～238 ℃。

1.2.5 化合物6a的合成 向250 mL三口瓶中，加入化合物5(0.49 g，0.001 mol)，2-氨基嘧啶(1.2 g，0.013 mol)，無(wú)水乙醇50 mL，加熱至回流，反應(yīng)6 h，TLC檢測(cè)，反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻至室溫，過(guò)濾，得黃色化合物6a0.25 g。收率45%，mp：231～233 ℃。

按化合物6a類似的方法分別制備目標(biāo)物6b～6h。理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和表2。

Table1 Physical properties of compounds6a-6h

Compd.FormulaYield/%mp/℃Elementalanalysis/%CHN6aC26H18N10O4S45231-23355.063.0424.626bC24H16N10O4S252226-22850.362.8624.446cC23H18N10O4S255227-22949.143.2527.966dC28H20N10O5S46232-23455.243.2822.966eC24H18N8O4S253220-22252.723.3420.536fC28H19N11O8S41236-23850.182.8522.936gC24H20N10O4S252231-23350.033.5624.346hC29H21N9O4S243241-24355.843.3220.15

Table2 Spectral data of compounds2-5and6a-6h

Compd.1HNMR(DMSO-d6)δ13CNMR(DMSO-d6)δMS(m/z)212.87(1H,s,-NH),12.04(1H,s,-OH),7.36-7.94(4H,m,Ph-H),4.54(2H,s,-NH2),2.96(3H,s,-NCH3)166,157,134,132,129,127,124,111,41230[M+H]+312.92(1H,s,-NH),12.03(1H,s,-OH),7.30-8.04(4H,m,Ph-H),5.64(2H,s,-NH2),2.87(3H,s,-NCH3)167,156,134,132,129,127,124,110,38362[M+H]+412.63(1H,s,-NH),11.84(1H,s,-OH),8.14(1H,s,-C=CH-N),7.14-7.95(9H,m,Ph-H),2.88(3H,s,-NCH3)166,156,140,136,134,132,129,127,124,110,38462[M+H]+512.83(1H,s,-NH),11.78(1H,s,-OH),9.83(1H,s,-CHO),8.04(1H,s,-C=CH-N),7.18-7.93(9H,m,Ph-H),2.98(3H,s,-NCH3)189,157,140,137,134,132,129,126,124,110,39490[M+H]+6a13.12(1H,s,-NH-),12.04(1H,s,-OH),8.08-8.43(3H,m,pyrimidine-H),8.15(1H,s,-N=CH-),7.56-8.04(9H,m,Ph-H),2.94(3H,s,-NCH3)163,160,158,152,149,140,136,134,132,129,127,124,115,110,39567[M+H]+6b13.08(1H,s,-NH-),12.14(1H,s,-OH),8.76(1H,m,-N=CH-S-),8.17(1H,s,-N=CH-),7.56-8.22(9H,m,Ph-H),2.96(3H,s,-NCH3)164,160,158,152,149,146,136,134,132,129,127,124,117,110,38573[M+H]+6c13.13(1H,s,-NH-),12.16(1H,s,-OH),10.28(1H,s,-NH-C=S),8.25(1H,s,-N=CH-),7.52-8.08(9H,m,Ph-H),7.75(2H,s,-NH2),2.85(3H,s,-NCH3)179,163,160,158,152,147,140,136,134,132,129,127,124,115,110,39563[M+H]+6d13.18(1H,s,-NH-),12.25(1H,s,-OH),9.94(1H,s,-O=C-NH-N=),7.68-8.23(4H,m,Pyridine-H),8.15(1H,s,-N=CH-),7.56-8.04(9H,m,Ph-H),2.88(3H,s,-NCH3)164,163,160,158,152,149,140,136,134,132,129,127,124,115,110,38609[M+H]+6e13.02(1H,s,-NH-),12.12(1H,s,-OH),8.09(1H,s,-N=CH-),7.42-8.12(9H,m,Ph-H),2.94(3H,s,-NCH3),1.45(3H,s,-CH3)214,163,160,158,152,149,140,136,134,132,129,127,124,115,110,39,30547[M+H]+6f13.21(1H,s,-NH-),12.02(1H,s,-OH),9.86(1H,s,-NH-N=),8.32(1H,s,-N=CH-),7.42-8.52(12H,m,Ph-H),2.94(3H,s,-NCH3)164,160,157,152,149,140,136,133,132,129,127,124,115,110,38670[M+H]+6g13.13(1H,s,-NH-),12.16(1H,s,-OH),10.28(1H,s,N-NH-C=S),8.25(1H,s,-N=CH-),7.52-8.08(9H,m,Ph-H),7.75(1H,s,-NH-C=S),2.95(3H,s,-NCH3),2.73(3H,s,-CH3)179,163,160,158,152,149,140,137,134,132,129,126,124,115,110,39,31577[M+H]+6h13.58(1H,s,Ph-NH-),13.21(1H,s,-NH-),12.02(1H,s,-OH),8.32(1H,s,-N=CH-),7.42-8.24(14H,m,Ph-H),2.94(3H,s,-NCH3)185,163,160,158,152,149,140,136,134,132,129,127,124,117,115,110,39624[M+H]+

2 抗腫瘤活性

對(duì)合成的目標(biāo)化合物，蒽醌類抗腫瘤藥物阿霉素以及母體吡羅昔康甲基物進(jìn)行抗腫瘤活性評(píng)價(jià)。采用MTT法測(cè)定對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Capan-1(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和細(xì)胞庫(kù))和鼠白血病細(xì)胞L1210(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和細(xì)胞庫(kù))的半數(shù)抑制濃度(IC50)，結(jié)果見(jiàn)表3。

Compd.IC50/(μmol/L)Capan-1L12106a3.7±0.51.8±0.26b3.6±0.52.1±0.36c15.6±1.6?12.4±1.4?6d8.2±0.7?7.4±0.66e23.6±2.218.9±2.16f9.6±1.1?8.7±0.7?6g31.8±3.526.4±2.36h14.2±1.3?12.7±1.2?Doxorubicin3.5±0.61.4±0.2Piroxicammethylester>100>1002>100>100380.6±7.578.4±7.6

*P<0.05vsdoxorubicin group

體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，目標(biāo)化合物對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Capan-1和鼠白血病細(xì)胞L1210呈現(xiàn)出不同程度的抑制作用，其中化合物6a、6b對(duì)Capan-1和L1210的IC50與對(duì)照阿霉素的活性相當(dāng)。結(jié)果表明，咪唑并三氮唑側(cè)鏈的引入，對(duì)提高該類化合物的抗腫瘤活性有一定的作用，具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。