鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 河南省兒童醫(yī)院 鄭州兒童醫(yī)院（450000）謝博

1 材料和方法

1.1 材料 恒溫水浴鍋為DZKW-S-8型、德國(guó)IKA的MS3型旋渦混合器、TAL-40D型試管恒溫儀、Eppendorf移液器、Thermo Fisher Scientific公司的OMH180SS型高溫烘箱等。實(shí)驗(yàn)使用的所有玻璃器皿在250℃下烘烤2小時(shí)以除去外源細(xì)菌內(nèi)毒素。

TAL：TALⅠ是廈門(mén)迅試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司的產(chǎn)品，批號(hào)：1505804，靈敏度為0.25EU/mL；TALⅡ是湛江安得生物有限公司的產(chǎn)品，批號(hào)：1607062，靈敏度為0.25EU/mL。

內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）買(mǎi)自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，規(guī)格：每支80EU，批號(hào)：150601-201478。

BET水購(gòu)自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，規(guī)格：10mL每支，產(chǎn)品編號(hào)：160006。

注射用VRC：來(lái)自四川美大康華康藥業(yè)，批號(hào)為：16061319、15121119，規(guī)格：每瓶0.1g。

1.2 方法 根據(jù)臨床使用情況對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的限值進(jìn)行測(cè)定，使用劑量：本產(chǎn)品靜脈滴注速度最快不得＞3mg/（千克/時(shí)），將其稀釋后需要進(jìn)行1～2小時(shí)的滴注，極限值為1.67EU/mg。嚴(yán)格限制在計(jì)算值的1/3～1/2之間，以確保安全使用藥物，并結(jié)合現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)要求，暫且認(rèn)為VRC的細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)不得高于0.75EU/mg。

本研究根據(jù)2015版中華人民共和國(guó)藥典中的藥劑敏感度審查規(guī)則對(duì)TAL進(jìn)行試劑敏感性審查。

筆者通過(guò)預(yù)干擾實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)選用0.25EU/mL的TAL時(shí)，將注射用VRC稀釋到0.67mg/mL時(shí)不存在BET干擾。因此，我們將樣品稀釋到測(cè)試溶液A的0.67mg/mL，并采用該稀釋液和BET水分別將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)瑵舛葹楹瑑?nèi)毒素2、1、0.5、0.25λ的溶液B、C。BET可直接作為陰性對(duì)照D。準(zhǔn)備工作完成后進(jìn)行干擾試驗(yàn)檢查，溶液B各個(gè)濃度設(shè)置4個(gè)平行管，溶液A、C、D的各個(gè)濃度設(shè)置2個(gè)平行管。

供試品BET：根據(jù)建議的BET標(biāo)準(zhǔn)檢查所有樣品。溶液A：將樣品稀釋至0.67mg/mL，并選擇λ=0.5EU/mLTAL進(jìn)行BET。陽(yáng)性對(duì)照B：將內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)稀釋成2λ，陽(yáng)性對(duì)照C和陰性對(duì)照D均由BET水建立，依法進(jìn)行限度測(cè)試。

2 結(jié)果

2.1 通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TAL的λ都在0.5～2λ之間，說(shuō)明TAL符合規(guī)定，因此筆者認(rèn)為0.25EU/mL即為該批次TAL的靈敏度。見(jiàn)附表1。

2.2 A和D所有平行試管均為陰性，溶液C的測(cè)試結(jié)果滿足試劑敏感性復(fù)查試驗(yàn)的要求，因此實(shí)驗(yàn)是有效的。溶液B的結(jié)果也符合試劑敏感性審查測(cè)試的要求，表明注射劑用VRC稀釋到0.67mg/mL選用0.25EU/mL的TAL進(jìn)行BET無(wú)干擾。見(jiàn)附表2。

2.3 根據(jù)干擾結(jié)果確定制定含有內(nèi)毒素的VRC細(xì)菌的BET檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)小于0.75EU/mg。

3 討論

相關(guān)研究證明注射用VRC對(duì)于念珠菌血癥以及足放線菌引起的嚴(yán)重感染等非嗜中性粒細(xì)胞減少等疾病具有良好的效果[1]，因此其安全性受到很多學(xué)者的關(guān)注。

附表1 靈敏度復(fù)核結(jié)果

附表2 干擾確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

本研究選擇使用兩種不同制造商生產(chǎn)的TAL試劑，對(duì)兩種不同批次的VRC注射樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)并進(jìn)行研究。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)TAL的λ都在0.5～2λ之間，說(shuō)明這兩家TAL試劑制造商所生產(chǎn)的TAL均符合規(guī)定，因此筆者認(rèn)為0.25EU/mL即為該批次TAL的靈敏度。又進(jìn)一步通過(guò)干擾確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)樣品稀釋到0.67mg/mL時(shí)選用0.25EU/mL的TAL進(jìn)行BET不存在干擾。因此根據(jù)干擾確認(rèn)的結(jié)果，筆者建議將細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試統(tǒng)一應(yīng)用于注射用VRC標(biāo)準(zhǔn)，并且限值嚴(yán)格為0.75EU/mg。擬定細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法為取本品依法進(jìn)行檢查，且VRC的細(xì)菌內(nèi)毒素含量不得超過(guò)0.75EU/mg。而且采用細(xì)菌內(nèi)毒素法檢查注射用伏立康唑的安全性在合理用藥方面有著及其重要的作用[2]。