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丹參總酚酸滴丸的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

2019-10-24 02:27何銀舟胡正明程建明
中成藥 2019年10期
關(guān)鍵詞:冷卻劑滴丸酚酸

何銀舟,胡正明,潘 旻,嵇 晶,程建明?

(1.淮安市淮安醫(yī)院,江蘇 淮安 223001;2.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇 南京 210023)

丹參為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖,是臨床上較為常用的中藥,在治療心血管疾病、抗腫瘤、抗氧化等方面的應(yīng)用日益廣泛[1-3]。大量藥理研究表明[4-6],丹參水溶性成分丹酚酸可用于心腦血管疾病的治療,已成功研發(fā)出了注射用丹參多酚酸、多酚酸鹽等相關(guān)制劑,臨床療效良好,目前以注射劑為主,雖然起效迅速,生物利用度較高,但也存在給藥不方便、患者順應(yīng)性差的問題,同時(shí)直接入血,對(duì)生產(chǎn)工藝要求高,一旦出現(xiàn)質(zhì)量問題將引起嚴(yán)重的不良反應(yīng),而且該類成分吸收消除快,無法維持長(zhǎng)時(shí)間較高血藥濃度,也導(dǎo)致相關(guān)注射劑只適合臨床急救。目前,丹參總酚酸常用劑型主要有顆粒劑、片劑、脂質(zhì)體、滴丸、磷脂復(fù)合物等,但由于該類成分大多不耐熱,給相關(guān)生產(chǎn)工藝帶來了難度。

滴丸是指將固體或液體藥物與適當(dāng)基質(zhì)加熱熔化混勻后,滴入不相混溶的冷凝液中,收縮冷凝而成的小丸狀制劑[7-8],具有生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、生物利用度高、起效迅速、穩(wěn)定性好的特點(diǎn),發(fā)展前景廣闊。因此,本實(shí)驗(yàn)以丹酚酸中主要活性物質(zhì)丹酚酸B、迷迭香酸為指標(biāo),對(duì)丹參總酚酸滴丸制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究,以期為該類成分深入研究和相關(guān)制劑開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器 滴丸機(jī)由南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥藥劑教研室提供;Waters E2695 高效液相色譜儀,配置Waters 2489 UV 檢測(cè)器(美國Waters 公司);BT125D 型電子分析天平(德國賽多利斯公司);DW-2 型調(diào)溫電熱器(南通市通州申通電熱器廠);FA2004 型電子分析天平(上海上平儀器有限公司);YP6002 型電子天平(上海光正醫(yī)療儀器有限公司);Unique-s15 型超純水系統(tǒng)(北京佰億新創(chuàng)科技有限公司)。

1.2 試藥 丹參總酚酸中間體(自制,批號(hào)20170304)。液體石蠟、二甲基硅油(上海泰坦科技股份有限公司);聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司,批號(hào)20170301)。丹酚酸 B(含有量98%,批號(hào)Y26O7H23683)、迷迭香酸對(duì)照品(含有量98%,批號(hào)P26A7F13802)(上海源葉生物科技有限公司)。毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠);硅膠G 薄層板(青島海洋化工有限公司)。甲醇(美國賽默飛世爾科技公司,批號(hào)LOT18055159)、乙腈(德國默克公司,AS1122-801),以及磷酸(批號(hào)D629033)、冰醋酸(批號(hào)E1702076)[阿拉丁試劑(上海)有限公司]均為色譜純;乙酸乙酯(批號(hào) 14061411310 )、三氯化鐵(批號(hào)14071210994)、鐵氰化鉀(批號(hào)15100210410)、鹽酸(批號(hào)160912100825)(南京化學(xué)試劑有限公司);甲酸(批號(hào)10014128,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 滴丸制備工藝

2.1.1 冷卻劑種類 固定藥物與基質(zhì)配比1∶5,取丹參總酚酸凍干粉1.5 g,加入混合基質(zhì)7.5 g(PEG4000∶PEG6000=4∶1),65 ℃水浴熔融并攪拌混勻,80 ℃下分別滴入二甲基硅油、液體石蠟中,以滴丸下降速度、成型情況為指標(biāo)考察冷卻劑。結(jié)果,二甲基硅油處理時(shí)滴丸下降速度合適,丸形規(guī)則圓整;液體石蠟處理時(shí)滴丸下降速度過快,部分帶有小尾巴,可能與其密度較小有關(guān),故選擇前者作為冷卻劑。

2.1.2 基質(zhì)配比 PEG4000 具有良好的分散力及較大的內(nèi)聚力,符合滴丸對(duì)基質(zhì)的要求,再加入一定比例黏度較大的PEG6000 以調(diào)整基質(zhì)成型。兩者按1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1 比例混合熔融后滴入二甲基硅油中,制備空白滴丸,以易滴程度、空白滴丸成型情況為指標(biāo)進(jìn)行篩選,結(jié)果見表1。由表可知,隨著PEG4000 比例增大滴速變快,不易控制;當(dāng) PEG4000、PEG6000 比例為3∶1 時(shí),基質(zhì)較易滴出,而且空白滴丸成型性較好,滴丸圓整,硬度適宜,故選擇其作為基質(zhì)。

表1 基質(zhì)配比考察結(jié)果Tab.1 Results of matrix ratio investigation

2.1.3 藥物與基質(zhì)配比 滴丸中藥物與基質(zhì)的配比一般在1∶1~1∶10 范圍內(nèi),但其過高時(shí)易導(dǎo)致滴丸成型困難,而過低時(shí)又會(huì)使載藥量偏低,故在1∶1~1∶6 范圍內(nèi)進(jìn)行考察,結(jié)果見表2。由表可知,1∶5 時(shí)效果最理想,故選擇其作為藥物與基質(zhì)配比。

表2 藥物與基質(zhì)配比考察結(jié)果Tab.2 Results of drug-matrix ratio investigation

2.1.4 滴距、滴速 滴距過小時(shí),液滴到達(dá)二甲基硅油中后來不及收縮,導(dǎo)致滴丸不圓整;滴距過大時(shí),液滴容易呈扁形,或者因重力作用而被跌散生小丸[9],本實(shí)驗(yàn)篩選空白滴丸時(shí)發(fā)現(xiàn),滴距為6 cm時(shí)滴丸圓整度較好。滴速過快時(shí),滴丸連續(xù)下沉到冷卻劑中,容易相互粘連,圓整度不佳;滴速過慢時(shí),雖然滴丸圓整度好,成型性符合要求,但混合基質(zhì)易凝固,導(dǎo)致滴口堵塞,并且容易增加丸重差異,從而影響滴丸質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)在不影響成型效果、圓整度的情況下適度提高滴速,控制在60 滴/min。

2.1.5 料溫 料溫過低時(shí),滴丸易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,圓整度差;料溫過高時(shí),滴丸圓整度降低,若滴制過快則易粘連。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),混合基質(zhì)在58 ℃時(shí)開始熔融,65 ℃時(shí)全部熔融,由于丹酚酸類成分高溫不穩(wěn)定,故選擇65 ℃作為料溫。

2.1.6 其他滴制條件 根據(jù)滴丸成型性和圓整度,確定冷卻劑溫度為上常溫下低溫,滴口內(nèi)、外徑為3、4.5 mm。

2.1.7 工藝驗(yàn)證 根據(jù)上述優(yōu)化工藝參數(shù),制備3 批滴丸(批號(hào)20170410、20170411、20170412),發(fā)現(xiàn)其丸形圓整,色澤均一,硬度較好,無拖尾、粘連現(xiàn)象,表明工藝穩(wěn)定可行。

2.2 滴丸質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.2.1 HPLC 法測(cè)定丹酚酸B、迷迭香酸含有量

2.2.1.1 色譜條件 Waters XBridge C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相乙腈(A)-1%醋酸(B),梯度洗脫,程序見表3;體積流量1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量10 μL。

2.2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取丹酚酸B 對(duì)照品4.85 mg、迷迭香酸對(duì)照品3.80 mg,分別置于25、250 mL 棕色量瓶中,80%甲醇稀釋,即得(190.12、14.90 μg/mL)。

表3 梯度洗脫程序Tab.3 Gradient elution programs

2.2.1.3 供試品溶液制備 取滴丸10 粒,置于100 mL 具塞錐形瓶中,精密稱定質(zhì)量,加入50 mL 80% 甲醇,超聲(功率140 W、頻率42 kHz)20 min,放冷,80% 甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,濾過,即得。

2.2.1.4 專屬性考察 取空白滴丸、含藥滴丸適量,按“2.2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果見圖1。由表可知,PEG4000、PEG6000 對(duì)測(cè)定無干擾,方法專屬性良好。

圖1 各成分HPLC 色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of various constituents

2.2.1.5 線性關(guān)系考察 精密量取190.12 μg/mL丹酚酸B 對(duì)照品溶液、14.90 μg/mL 迷迭香酸對(duì)照品溶液各1、2、4、6、8、10 mL,80% 甲醇定容至10 mL,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸,得到丹酚酸B、迷迭香酸方程分別為Y=6 216.4X-1 019.6(R2=0.999 66)、Y=10 996X-153.46(R2=0.999 8),分別在19.01~190.12、1.49~14.90 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.1.6 精密度試驗(yàn) 取152.10 μg/mL 丹酚酸B對(duì)照品溶液、8.94 μg/mL 迷迭香酸對(duì)照品溶液適量,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下各進(jìn)樣測(cè)定6次,測(cè)得丹酚酸B、迷迭香酸峰面積RSD 分別為0.88%、1.62%,表明儀器精密度良好。

2.2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批滴丸,按“2.2.2.3”項(xiàng)下方法制備6 份供試品溶液,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得丹酚酸B、迷迭香酸含有量RSD 分別為1.72%、1.17%,表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批滴丸,按“2.2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下于0、3、6、9、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得丹酚酸B、迷迭香酸含有量RSD 分別為1.72%、1.17%,表明溶液在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.1.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別取同一批滴丸25、100 粒,置于100 mL 具塞錐形瓶中,加入相當(dāng)于滴丸中成分含有量80%、100%、120%的對(duì)照品后進(jìn)行提取,取續(xù)濾液,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果,丹酚酸B、迷迭香酸平均加樣回收率分別為 97.92%、96.58%,RSD 分別為2.45%、1.64%。

2.2.1.10 樣品含有量測(cè)定 取3 批滴丸,按“2.2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,平行3 份,在“2.2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算含有量,結(jié)果見表4。以平均值的-20% 為下限,初步確定丹酚酸B、迷迭香酸含有量分別不得低于5.45%、0.46%。

表4 各成分含有量測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab.4 Results of content determination of various constituents(n=3)

2.2.2 TLC 法定性鑒別

2.2.2.1 供試品溶液制備 取滴丸15 丸,加水1 mL、稀鹽酸2 滴,充分振搖,再加乙酸乙酯3 mL振搖1 min,離心2 min,上清液蒸干至2 mL,即得。

2.2.2.2 對(duì)照藥材溶液制備 取丹參對(duì)照藥材,按“2.2.2.1”項(xiàng)下方法制備,即得。

2.2.2.3 展開條件 硅膠G 薄層板;展開劑乙酸乙酯-水-甲酸(14∶2∶3)上層溶液;顯色劑1%三氯化鐵-1% 鐵氰化鉀(1∶1)溶液,臨用時(shí)配制。

2.2.2.4 鑒別方法 取3 批滴丸,按“2.2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照2015 年版《中國藥典》薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),結(jié)果見圖2。

圖2 各成分TLC 色譜圖Fig.2 TLC chromatogram of various constituents

2.2.3 重量差異限度檢查 精密稱取滴丸20 粒,計(jì)算其總重和每粒丸重,根據(jù)2015 年版《中國藥典》一部附錄判斷重量差異是否符合要求。結(jié)果,20 粒 滴 丸 丸 重 分 別 為25.56、25.51、25.43、25.57、25.48、25.48、25.43、25.49、25.51、25.54、25.39、25.55、25.62、25.58、25.53、25.53、25.61、25.47、25.45、25.51 mg,平 均25.51 mg<0.03 g,RSD 為0.24%。藥典規(guī)定,重量差異限度應(yīng)±15%,每粒滴丸丸重應(yīng)在21.68~29.33 mg 范圍內(nèi),超出標(biāo)準(zhǔn)限度的不得多于2 丸,不得有1 丸超出標(biāo)準(zhǔn)限度的1 倍,由此可知,本實(shí)驗(yàn)所制滴丸符合相關(guān)要求。

2.2.4 溶散時(shí)限檢查 取6 粒滴丸于溶出儀的吊籃中,溫度設(shè)定為37 ℃,發(fā)現(xiàn)所有滴丸在5 min內(nèi)均完全溶解,符合2015 年版《中國藥典》一部滴丸劑項(xiàng)下溶散時(shí)限不得超過30 min 的規(guī)定。

3 討論

目前,丹酚酸類成分的緩控釋制劑仍處于實(shí)驗(yàn)室階段,未見市售產(chǎn)品。張麗紅等[10]以大豆卵磷脂制備丹參總酚酸長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,發(fā)現(xiàn)它可減緩丹酚酸在體內(nèi)的消除,延長(zhǎng)體內(nèi)滯留時(shí)間,提高生物利用度;咸銀庫等[11]以丹參總酚酸為原料制備速釋的口腔崩解片,可提高生物利用度;Jin 等[12]通過制備丹參總酚酸磷脂復(fù)合物,改善了脂溶性差的問題;此外,也有關(guān)于丹參總酚酸滴丸、胃滯留緩釋片的報(bào)道[13-15],為相關(guān)制劑研究提供了參考。

本實(shí)驗(yàn)以滴丸成型性和圓整度為依據(jù),考察了冷卻劑、基質(zhì)配比、藥物與基質(zhì)配比等影響滴丸成型工藝的因素,最終確定最優(yōu)工藝為將丹參總酚酸凍干粉研細(xì)混勻備用,以PEG4000、PEG6000 為成型基質(zhì),按3∶1 比例混合,65 ℃水浴加熱熔融,按藥物與基質(zhì)配比1∶5 分次加入凍干粉,攪拌均勻,在滴距6 cm,滴口內(nèi)、外徑3、4.5 mm,滴速60 滴/min 的條件下滴入二甲基硅油冷凝劑(上常溫下低溫)中,冷卻,固化成丸,取出,濾紙吸干表面冷卻劑,即得,所得滴丸外觀圓整、硬度適宜,制備工藝合理可行。其中,丹酚酸B、迷迭香酸平均含有量分別為6.81%、0.58%,平均丸重為25.51 mg,重量差異限度、溶散時(shí)限均符合藥典要求。由此可知,該工藝操作簡(jiǎn)單,生物利用度高,起效迅速,穩(wěn)定性好,具有廣闊的發(fā)展前景,可為丹參酚酸類成分研究和相關(guān)制劑開發(fā)提供參考。

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