劉建營 ，郭建超

（1.廣東省畜牧技術(shù)推廣總站，廣州 510500；2.廣東省種畜禽質(zhì)量檢測中心，廣州 510520）

乳房炎是指奶牛乳腺受到機(jī)械性刺激、病原微生物入侵等所發(fā)生的一種炎性變化。主要分為臨床型乳房炎（最急性、急性、亞急性、慢性）和隱性乳房炎（亞臨床型乳房炎）[1]。臨床型乳房炎癥狀主要是乳汁發(fā)生理化性質(zhì)變化，特別是白細(xì)胞增加，以及乳腺組織發(fā)生病理學(xué)變化。根據(jù)奶牛乳房的局部變化和乳汁的顏色變化即可對臨床型乳房炎做出診斷，但隱性乳房炎沒有臨床癥狀，乳汁也沒有肉眼可見的變化，必須借助實(shí)驗室的方法才能確診。

奶牛生產(chǎn)性能測定（DHI）技術(shù)經(jīng)過黃金十年（2008～2018）的發(fā)展，在牧場得到廣泛的應(yīng)用，體細(xì)胞計數(shù)技術(shù)在隱性乳房炎的早期診斷上也得到了牧場主的充分認(rèn)可。隨著技術(shù)的發(fā)展，體細(xì)胞分型計數(shù)技術(shù)也日漸成熟。Loken等[2]研究表明，除了SCC的明確意義外，體細(xì)胞的分型更有利于對奶牛乳腺的實(shí)際健康狀況進(jìn)行更詳細(xì)的描述。細(xì)胞分型是指將牛奶中免疫細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和多形核白細(xì)胞（PMN）。這三種細(xì)胞群在乳腺炎癥反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用[3]。就個體功能而言，淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的啟動和抑制。在乳腺炎的初期，PMN細(xì)胞抵御細(xì)菌的入侵。隨著PMN細(xì)胞的大量出現(xiàn)，巨噬細(xì)胞識別入侵的乳腺炎病原體，并啟動免疫系統(tǒng)。此外，巨噬細(xì)胞還吞噬細(xì)菌、細(xì)胞碎片和牛奶成分，以完成組織修復(fù)。健康乳腺的牛奶主要含有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，感染乳腺產(chǎn)出的牛奶中PMN是細(xì)胞群中的主體。在實(shí)際操作中，這三個細(xì)胞群落被分為兩個群落來檢測：一個是巨噬細(xì)胞，另一個是PMN和淋巴細(xì)胞的結(jié)合。體細(xì)胞分型指數(shù)（DSCC）代表了PMN和淋巴細(xì)胞在整體中所占的比例[4]。

本試驗通過研究常規(guī)體細(xì)胞總數(shù)和體細(xì)胞分型指數(shù)之間的關(guān)系，希望將體細(xì)胞總數(shù)和新的體細(xì)胞分型指數(shù)相結(jié)合，為奶牛乳房炎早期診斷提供更多的幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與樣品采集

本試驗的牛奶樣品采自廣東省某規(guī)模化奶牛場，品種為荷斯坦牛。采集時間為2019年2月份和3月份。采集牛奶樣品前，對乳房外部進(jìn)行清洗消毒，棄去前三把奶，正常套杯后，利用利拉伐電子奶量計采樣。每頭奶牛完成擠奶后，充分搖勻采樣瓶中的奶樣，將40mL奶樣倒入提前加入防腐劑的小瓶中，搖勻，放入4℃冰箱中保存，并于當(dāng)日送達(dá)實(shí)驗室。

1.2 試驗材料

1.2.1 主要儀器

奶牛乳成分和體細(xì)胞聯(lián)機(jī)分析儀（福斯CombiFossTM 7 DC,丹麥FOSS公司）、恒溫水浴鍋（±1℃）、和泰超純水機(jī)、電子天平（精度0.01g）、

1.2.2 主要試劑

FOSS染色液、清洗液、調(diào)零液、緩沖液、平衡液、體細(xì)胞校正樣品、超純水、防腐劑、NaCl、利拉伐CMT檢測液。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 測定指標(biāo)

牛奶中體細(xì)胞總數(shù)、體細(xì)胞分型指數(shù)和乳成分（乳蛋白、乳脂、乳糖、尿素氮、總固形物）。

1.3.2 測定方法

使用牛奶乳成分和體細(xì)胞聯(lián)機(jī)分析儀（福斯CombiFossTM 7 DC，丹麥FOSS公司）測定牛奶中體細(xì)胞數(shù)和體細(xì)胞分型計數(shù)參數(shù)，然后計算出分型指數(shù)。將在牧場采集的奶樣放入42℃水浴鍋中水浴15min，瀝干水，搖勻，放到儀器軌道上，按照儀器使用說明書操作儀器進(jìn)行測定。

按照利拉伐CMT檢測液使用說明書操作。

1.4 統(tǒng)計分析

使用WPS Office2019和SPSS Statistics 17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

該場2月份和3月份共采集樣品3478個，其中體細(xì)胞數(shù)50000以下的有1680個。由于檢測設(shè)備對于體細(xì)胞總數(shù)50000個以下的細(xì)胞分型指數(shù)，均顯示為0，此外，臨床上也認(rèn)為體細(xì)胞總數(shù)50000個以下的奶牛是非乳房炎牛只，所以在此對體細(xì)胞數(shù)50000以下的數(shù)據(jù)不做分析。

表1 牛奶樣品中的體細(xì)胞總數(shù)（SCC）和體細(xì)胞分型指數(shù)（DSCC）

圖1 牛奶中體細(xì)胞分型指數(shù)和體細(xì)胞總數(shù)的關(guān)系

為研究體細(xì)胞總數(shù)和體細(xì)胞分型指數(shù)的關(guān)系，剔除體細(xì)胞總數(shù)50000以下的樣品，剩余的1798份樣品按照體細(xì)胞數(shù)量分成5組，其中50000～100000樣品數(shù)量為578個，100000～200000樣品數(shù)量為437個，200000～300000樣品數(shù)量為229個，300000～400000樣品數(shù)量為129個，400000以上樣品數(shù)量為425個。由表1和圖1可知，隨著牛奶中體細(xì)胞總數(shù)的不斷增加，體細(xì)胞分型指數(shù)也不斷增加，兩組數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9252。

表2 CMT法檢測奶牛乳房炎陽性樣品統(tǒng)計

正常的牛奶中體細(xì)胞數(shù)一般在20萬～30萬/mL[4]，因此我們對體細(xì)胞總數(shù)在20萬～30萬/mL的牛奶樣品進(jìn)行體細(xì)胞分型指數(shù)檢測，并進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示體細(xì)胞分型指數(shù)在63.96%±6.72%范圍波動。據(jù)此，我們推斷，當(dāng)奶樣中的體細(xì)胞分型指數(shù)大于57.24%時，該場奶牛發(fā)生乳房炎的概率較大，臨床上需要重點(diǎn)關(guān)注相應(yīng)牛只。

為驗證此推斷的真實(shí)性，本研究采用CMT法對該場2月份和3月份采集的全部奶樣進(jìn)行了檢測和分析，并對檢測陽性樣品的體細(xì)胞分型指數(shù)進(jìn)行了統(tǒng)計分析，從表2中可知，陽性樣品體細(xì)胞分型指數(shù)均在57.24%以上，符合推斷。但試驗中也發(fā)現(xiàn)個別體細(xì)胞分型指數(shù)大于57.24%的樣品，CMT檢測為陰性，這可能是由于CMT檢測人員判定誤差或者采樣時不規(guī)范造成的，具體原因有待進(jìn)一步研究。

3 討論

隱性乳房炎診斷長期依靠CMT檢測、SCC和細(xì)菌學(xué)檢測。目前主流觀點(diǎn)認(rèn)為牛奶中SCC小于25萬個/mL的奶牛是健康的。但近些年有研究認(rèn)為，在這些所謂健康的乳腺中可能已經(jīng)有炎癥發(fā)生[5,6]。最近10年，DHI技術(shù)在我國奶牛場尤其是規(guī)模奶牛場中得到廣泛的應(yīng)用，取得了巨大的成就。應(yīng)用DHI技術(shù)之前由于技術(shù)的原因，只能測定體細(xì)胞總數(shù)，但隨著技術(shù)的發(fā)展，目前檢測設(shè)備已經(jīng)能做到在測定體細(xì)胞總數(shù)的同時也對體細(xì)胞分型指數(shù)進(jìn)行測定。因此，我們可以引入體細(xì)胞分型指數(shù)，同時結(jié)合SCC，能更早地發(fā)現(xiàn)隱性乳房炎，做到更早治療，降低奶損失，提高牛群健康水平，提升牧場經(jīng)濟(jì)效益。

本試驗中的數(shù)據(jù)僅來源于我國南方地區(qū)一個牧場，有一定的局限性，數(shù)據(jù)量也不是很大，可能不具有全面的代表性，但筆者希望通過此文拋磚頭引玉，能引起行業(yè)人士的注意，加大體細(xì)胞分型指數(shù)的研究和推廣應(yīng)用，做好牧場的健康管理。

4 小結(jié)

充分運(yùn)用體細(xì)胞分型指數(shù)，當(dāng)體細(xì)胞分型指數(shù)大于57.24%時，要結(jié)合體細(xì)胞總數(shù)和臨床癥狀，更早地發(fā)現(xiàn)隱性乳房炎。