黃春燕 楊 彤 張元祺 姚 強 韓建東 謝紅艷 宮志遠

（山東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所∕農(nóng)業(yè)部廢棄物基質(zhì)化利用重點實驗室∕山東省農(nóng)業(yè)面源污染防控重點實驗室，山東濟南250100）

金針菇（Flammulina velutipes）是我國主要栽培食用菌之一，也是工廠化栽培數(shù)量最大的菇種。為了選育適宜山東省工廠化栽培的白色金針菇品種，筆者開展了金針菇菌株收集、評價工作，以期篩選出適合工廠化栽培的優(yōu)良菌株，并為今后優(yōu)良菌株選育提供適宜親本。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

供試菌株為自有保存、引進或市場購買子實體組織分離獲得，其編號和來源如表1所示。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1000 mL。

液體培養(yǎng)基:蔗糖 20 g∕L，豆粕 3.3 g∕L，硫酸鎂0.66 g∕L，磷酸二氫鉀0.66 g∕L。

栽培培養(yǎng)基:玉米芯35%，麩皮8%，米糠36%，棉籽殼5%，甜菜渣5%，大豆皮5%，啤酒渣4%，輕鈣1.1%，石灰0.7%。料含水量68%。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌絲拮抗試驗

參照文獻[1]的方法。

1.2.2 不同菌株在PDA平板培養(yǎng)基生長特性測定

取直徑為0.5 cm供試菌株菌圓片轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基平板上，置于22℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3天時在菌落邊緣劃一條起始生長線，繼續(xù)培養(yǎng)至菌落邊緣距培養(yǎng)皿邊緣約0.5～1 cm時，在菌落邊緣再劃一條終止線，量取兩線之間的距離，計算菌絲日均生長速度并觀察菌絲長勢。

1.2.3 液體菌種培養(yǎng)

取250 mL三角瓶裝入100 mL液體培養(yǎng)基，每瓶接種直徑0.5 cm的供試菌株菌圓片3片，透氣封口膜封口，置于往復式搖床，轉(zhuǎn)速180 r∕min，22℃，遮光條件下培養(yǎng)。

1.2.4 不同菌株在栽培培養(yǎng)基上生長速度測定

配制栽培培養(yǎng)基，裝入30 mm×200 mm的試管中，每支試管裝入濕料30 g，硅膠塞封口后高壓滅菌2.5 h。取搖瓶培養(yǎng)的不同金針菇液體菌種1 mL，接種于已滅菌的固體培養(yǎng)基中，22℃恒溫培養(yǎng)。當菌絲封面并長入料內(nèi)1～2 cm時，沿著菌絲前端劃一條起始生長線后，繼續(xù)培養(yǎng)，當菌絲前端距培養(yǎng)料底部約1 cm時，再劃一條終止線。測量起始線與終止線之間的距離，計算菌絲日均生長速度。

1.2.5 出菇試驗

采用工廠化瓶栽方式，接種液體菌種，接種后避光、17℃、空氣相對濕度60%～65%條件培養(yǎng)。菌絲滿瓶后利用搔菌機進行搔菌、注水移入出菇房，出菇管理同常規(guī)工廠化栽培管理方法。當子實體生長至14～15 cm且菌蓋將要開傘時采收、計算供試金針菇菌株生物學效率。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗試驗結(jié)果

對收集到的菌株進行菌絲拮抗反應測定，根據(jù)拮抗反應的有無，可將供試菌株分為17組，見表2。其中第1組包括13個菌株，均為早期收集的菌株，第17組包括16個菌株主要為當前金針菇專業(yè)生產(chǎn)公司使用的菌株，表明目前主流栽培菌株親緣關(guān)系均較近。陸歡等[2]研究表明，我國市場上金針菇工廠栽培化菌株親緣關(guān)系較近，與筆者研究結(jié)果相符。菌株W26、W27、W29、W45、W48、W54、W63相互之間及與其他各組菌株均相互拮抗，具有一定的特異性。

表1 供試金針菇菌株及來源

表2 根據(jù)拮抗試驗對供試菌株的分組結(jié)果

2.2 供試金針菇菌株平板培養(yǎng)性狀

供試金針菇菌株平板培養(yǎng)性狀如表3所示，根據(jù)菌絲形態(tài)可以將供試菌株分為4類:第一類是菌絲極稀疏、生長速度較慢，包括W36、W38兩個菌株；第二類是菌絲生長速度較慢，菌落平鋪，菌絲密集，呈絨氈狀，包括W13、W17、W21、W25、W28共5個菌株；第三類是菌絲短絨狀、菌落中心區(qū)域產(chǎn)生分生孢子較多，包括 W49、W54、W55、W59、W60、W63共6個菌株；第四類是菌絲生長速度較快，菌絲茂盛，呈棉絮狀，大多數(shù)菌株屬于這一類。

2.3 供試金針菇菌株液體培養(yǎng)特性

由表3可以看出不同供試菌株液體培養(yǎng)性狀有較大不同:一種形成的菌球比較小、大小較均勻，菌球表面毛刺細小，菌液澄清；一種是菌球較大，較少，菌球表面毛刺較少；一種是菌球大小不一，碎片較多，菌球毛刺較多或形成星芒狀小菌球；另外一種比較特殊，菌球較大，表面毛刺粗長，包括W11、W23、W26、W34。供試金針菇菌株液體培養(yǎng)菌絲生物量也有較大差異，菌株W36、W38在液體培養(yǎng)基中基本不生長，W11菌絲生物量最低5.83 g∕100 mL，W46最高達到20.54 g∕100 mL。

2.4 供試金針菇菌株在栽培培養(yǎng)基上的生長速度

由表3可知供試金針菇菌株在栽培培養(yǎng)基上菌絲生長速度有差異，生長速度最快的菌株W42達到3.37 mm∕d，最慢的W53僅為2.03 mm∕d。供試菌株在PDA平板培養(yǎng)基和固體栽培料上的菌絲生長速度表現(xiàn)較為一致，但與液體培養(yǎng)菌絲產(chǎn)量的一致性較差。液體培養(yǎng)菌絲產(chǎn)量高，接種固體培養(yǎng)基后，萌發(fā)點多，封面可能早，但繼續(xù)培養(yǎng)吃料速度不一定快。

表3 供試金針菇菌株培養(yǎng)性狀比較

2.5 供試金針菇菌株栽培結(jié)果

從表3中可以看出，供試金針菇菌株的栽培周期以及生物學效率相差較大。栽培周期不但取決于發(fā)菌速度還與現(xiàn)蕾后子實體發(fā)育速度以及與菌帽開傘早晚有關(guān)。如W37菌株在PDA培養(yǎng)基上極易產(chǎn)生粉孢子，其液體培養(yǎng)菌絲產(chǎn)量較低，其在固體培養(yǎng)基上菌絲長速較快，但子實體生物學效率僅為66.97%。新分離的菌株一般生物學效率較高，隨保存時間的延長，生物學效率明顯降低。W62-1菌株為W62的復壯菌株，經(jīng)復壯后生物學效率由121.65%提高到139.52%，生產(chǎn)性能得到明顯恢復。菌株W27的子實體性狀較為特殊，其菌帽較小、菌柄明顯比其他菌株細、根部基部不粘連，朵形比較松散。

續(xù)表3

3 小結(jié)與討論

供試金針菇菌株在PDA平板上生長速度與固體培養(yǎng)料上生長速度一致性較高，而液體培養(yǎng)菌絲產(chǎn)量一致性較差，固體培養(yǎng)基上長速快的菌株在液體培養(yǎng)中菌絲產(chǎn)量不一定高。菌絲生長速度快的菌株，發(fā)菌周期一般較短，但整個生產(chǎn)周期不一定短，農(nóng)藝性狀不一定佳，產(chǎn)量也不一定高。產(chǎn)量與出芽數(shù)及菌柄的長短有相關(guān)性，產(chǎn)量高的菌株一般出芽密集、朵形緊實、整齊，反之出芽數(shù)少、朵形松散、菌柄長短不齊則產(chǎn)量低。供試W36、W38菌株無論是在PDA培養(yǎng)基上還是在液體培養(yǎng)基中均生長不良，已嚴重退化。

金針菇菌株按生產(chǎn)模式可以分為農(nóng)戶栽培品種和工廠化栽培品種兩類。筆者研究早期引進品種多為適合農(nóng)戶栽培菌株，在試驗中表現(xiàn)為:生產(chǎn)周期長、產(chǎn)量低?？赡苁蔷瓿霈F(xiàn)了退化，也可能這些菌株不適合工廠化生產(chǎn)的一次性出菇管理模式。試驗中后期引進的工廠化栽培菌株產(chǎn)量均未達到公司報道的產(chǎn)量水平，原因可能與目前金針菇工廠化生產(chǎn)菌株退化速度較快有關(guān)。W62-1菌株為W62的子實體進一步組織分離獲得的菌株，其生物學效率明顯提升，接近原產(chǎn)量水平，說明經(jīng)組織分離復壯可以一定程度上恢復菌株生產(chǎn)性能，但隨著繼代保存時間的延長，生產(chǎn)性能隨之下降。因此菌株經(jīng)長期繼代保存后不能直接應用于生產(chǎn)，需經(jīng)過適當?shù)膹蛪巡⑿∫?guī)模試產(chǎn)后才能決定是否大規(guī)模應用于生產(chǎn)。

唐木田郁夫[3]認為金針菇菌株的不穩(wěn)定主要是受粉孢子的影響。筆者研究表明W37菌株在PDA培養(yǎng)基上粉孢子產(chǎn)生早、多，該菌株初引進時生產(chǎn)性能良好，經(jīng)過2年的繼代培養(yǎng)、保存，在本試驗中其子實體生物學效率大幅降低，已不再適合生產(chǎn)應用。菌株 W49、W54、W55、W59、W60、W63在PDA平板培養(yǎng)基上粉孢子產(chǎn)生亦較多，預計也將會快速退化。如何保持金針菇菌株的優(yōu)良種性，防止退化是今后研究的主要問題。