鄒紹宇　宋德鑫　馮彩霞　張瑞玲　楊鑫　李小強　曹蔚

【摘 要】 目的：觀察與評價蠐螬多糖對動物神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)的影響以及其亞急性毒性的作用特點，探討其一般藥理學作用和可能的副作用，為進一步開發(fā)與應(yīng)用蠐螬多糖提供實驗依據(jù)。方法：曠野法觀察小鼠自發(fā)活動;睡眠時間法觀察蠐螬多糖與戊巴比妥鈉合用對小鼠的催眠協(xié)同作用;疲勞轉(zhuǎn)棒實驗觀察機能協(xié)調(diào)活動;使用無創(chuàng)血壓分析儀測定血壓、心電圖;對大鼠腹腔注射蠐螬多糖，14 d后進行臟器系數(shù)測定、血常規(guī)檢查、血液生化指標檢查以及組織病理學檢查。結(jié)果：蠐螬多糖50、225、400 mg/kg腹腔注射，給藥1次對小鼠自發(fā)活動無影響，給藥1周對小鼠的機能協(xié)調(diào)活動無影響，與閾下劑量戊巴比妥鈉無協(xié)同催眠作用;33、150、267 mg/kg腹腔注射1次，對大鼠呼吸頻率無影響，但可略升高血壓;亞急性毒性試驗中，高劑量2周重復給藥可明顯增加血小板數(shù)量，降低清蛋白、高密度脂蛋白膽固醇的量，但以上指標均在正常范圍內(nèi);對其它各項指標和組織結(jié)構(gòu)等沒有影響。結(jié)論：蠐螬多糖對呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)均無明顯影響，對大鼠無明顯毒性，是比較安全的蠐螬活性成分。

【關(guān)鍵詞】 蠐螬;多糖;一般藥理學;亞急性毒性

【中圖分類號】R285 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）12-0023-08

Study on General Pharmacology and Subacute Toxicity of Polysaccharide from Holotrichia diomphalia

ZOU Shaoyu1 SONG Dexin1 FENG Caixia1 ZHANG Ruiling1 YANG Xin1 LI Xiaoqiang2，3 CAO Wei1，3*

1.Department of Pharmacy， School of Chemistry & Pharmacy， Northwest A&F University，Yangling 712100 China

2.Department of Pharmacology， School of Pharmacy， Fourth Military Medical University，Xian 710032， China

3.Key Laboratory of Gastrointestinal Pharmacology of Chinese Materia Medica of the State Administration of Traditional Chinese Medicine，Xian 710032，China

Abstract：Objective To observe and evaluate the effects of polysaccharide from Holotrichia diomphalia （PHD） on nervous system， respiratory system， cardiovascular system and its subacute toxicity in animals， explore its general pharmacological effects and possible side effects， and provide experimental evidence for further development and application of PHD. Methods The spontaneous activity of mice was observed in open filed. Hypnotic synergistic effect of PHD and pentobarbital sodium was observed on sleep time in mice. Coordination of function was observed by fatigue rotating rod test. Blood pressure and electrocardiogram were measured by noninvasive blood pressure analyzer. Organ coefficient measurement， blood biochemical index and histopathological examination were performed 14 days after intraperitoneally injection of PHD in rats. Results PHD （50， 225 and 400 mg/kg） was injected intraperitoneally once， and had no effect on the spontaneous activity of mice. One week after injection， PHD had no effect on the coordinated activity of mice， and had no synergistic hypnotic effect with the subthreshold dose of sodium pentobarbital. Intraperitoneal injection once at 33， 150 and 267 mg/kg had no effect on respiratory rate， but slightly increased blood pressure. In subacute toxicity test， repeated injection of high dose for 2 weeks could significantly increase the number of platelets and decrease the levels of albumin and high density lipoprotein cholesterol， but the above indexes were within the normal range. It had no effect on other indicators and organizational structure. Conclusion PHD has no obvious effect on respiratory system and nervous system， and has no obvious toxicity to rats. It is a safe active ingredient of Holotrichia diomphalia Bates.

Key words：Holotrichia diomphalia Bates; Polysaccharide; General Pharmacology; Subacute toxicity

中藥蠐螬是朝鮮黑金龜子（Holotrichia diomphalia Bates）及同屬近緣昆蟲的干燥幼蟲，是較為常用的動物藥[1]。蠐螬首次收載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味咸微溫。主惡血、血瘀（《御覽》作血瘴），痹氣，破折、血在脅下堅滿痛，月閉，目中淫膚，青翳白膜。”其后歷代典籍如《名醫(yī)別錄》《金匱要略》《證類本草》《本草綱目》等多有收載[2]，如《名醫(yī)別錄》曰：“生河內(nèi)人家積糞草中。取無時，反行者良?！薄蹲C類本草》云：“味咸，微溫、微寒，有毒。主惡血，血瘀痹氣，破折血在脅下堅滿痛，月閉，目中淫膚，青翳白膜，療吐血在胸腹不去及破骨折，血結(jié)，金瘡內(nèi)塞，產(chǎn)后中寒，下乳汁?！薄侗静菥V目》中記載：“蠐螬，釋名地蠶、乳齊、應(yīng)條，氣味咸，微溫，有毒。”蠐螬有破血逐淤，明目退翳的功效，可用于折損瘀痛、破傷風、喉痹、目翳等病癥[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明該藥具有抗腫瘤、保肝、治療口瘡等多種生物活性[4-7]。近些年隨著研究的深入，蠐螬的化學成分不斷得到闡明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)脂肪酸[8-9]（油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸等）、氨基酸（谷氨酸、甘氨酸等）、糖類（多糖）、礦物元素（鈣、鎂、鉻等）、維生素（維生素A、維生素B）等[10]。同時，越來越多的研究證實蠐螬多糖是一種新活性成分，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、降血脂等多種作用，是蠐螬的藥效活性成分之一。但是，蠐螬多糖的其它作用還有待于進一步發(fā)掘，毒副作用的研究目前也尚未見國內(nèi)外文獻報道。為此，本研究對蠐螬多糖一般藥理作用，包括其對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的影響進行了系統(tǒng)評價，同時對其亞急性毒性也進行了初步探討，旨在為蠐螬物效基礎(chǔ)研究及蠐螬多糖的進一步開發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 BP-2010A型無創(chuàng)血壓分析儀和BPEditU數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（北京軟?。?D3024R型臺式高速冷凍離心機（北京大龍）;Chemray 240全自動生化分析儀（深圳雷杜）;IX73倒置顯微鏡（奧林巴斯）;LT502T型電子秤（常熟市天量儀器有限責任公司），AX224ZH/E分析天平（奧豪斯）;自制曠野箱（無蓋紙箱55cm×40 cm×30 cm，格子數(shù)6 × 10）。

蠐螬多糖由本實驗室制備[1]。地西泮（山東信誼制藥有限公司）;戊巴比妥鈉（美國英杰生命技術(shù)有限公司），鹽酸氯丙嗪注射液（上海禾豐制藥有限公司）;生理鹽水（陜西圣奧動物藥業(yè)有限公司）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、直接膽紅素（D-BIL）、總膽紅素（T-BIL）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）、白蛋白（ALB）、糖化血清蛋白（GSP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（TC）、葡萄糖（GLU）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、血清總膽汁酸（TBA）、堿性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）、血清乳酸脫氫酶同工酶（LDHi）、血清乳酸脫氫酶L（LDH-L）、肌酸激酶（CK）、肌酐（CRE）試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 實驗動物 BALB/c小鼠，雌雄各半，18～22 g;SD大鼠，雌雄各半，180～250 g，購于第四軍醫(yī)大學實驗動物中心，生產(chǎn)合格證號：SCXK（軍）字第2007-007號。

1.3 一般藥理學評價給藥劑量與方法 按照一般藥理學研究的藥物劑量設(shè)置原則，以藥效學有效劑量為一般藥理研究的低劑量，高劑量設(shè)置為不產(chǎn)生嚴重毒性反應(yīng)的劑量，兩者取平均值設(shè)為中劑量。則小鼠蠐螬多糖低、中、高劑量依次為50、225、400 mg/kg;根據(jù)大鼠、小鼠與人的給藥換算比例，大鼠給藥低、中、高劑量依次為33、150、267 mg/kg。給藥途徑：與臨床用藥途徑一致，采用注射給藥;給藥次數(shù)和容積：一次性按體重計算給藥量，小鼠給藥體積為0.2 mL/（10 g），大鼠給藥體積為0.5 mL/（100 g）[11-12]。

1.4 對神經(jīng)系統(tǒng)的影響

1.4.1 一般行為和自主活動 50只小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機分為5組：空白組（與給藥體積相同的生理鹽水），20 mg/kg戊巴比妥鈉（陽性藥物）組，蠐螬多糖低、中、高劑量組;每組10只。腹腔注射給藥后，觀察小鼠一般行為、姿勢、步態(tài)、有無流涎、肌顫、眼球震顫和分泌物等變化。給藥1 h后，將小鼠放入曠野箱，適應(yīng)1 min后，計數(shù)10 min以內(nèi)，小鼠在箱內(nèi)活動的格數(shù)（小鼠四肢都進入同1格內(nèi)才算走動了1格）。

1.4.2 機體協(xié)調(diào)運動實驗 將一根光滑豎立的金屬棒（直徑為1.27 cm、長80 cm），與地面垂直放置，并固定底部，保持直立。將小鼠放在金屬棒的頂端上，讓其自然向下爬行，篩選能夠一步一步向下爬的小鼠50只，每組10只，雄雌各半，隨機分為5組：空白組（與給藥體積相同的生理鹽水），2.5 mg/kg鹽酸氯丙嗪注射液（陽性藥物）組，蠐螬多糖低、中、高劑量組;每組10只。腹腔注射給藥1周后，30、60、120 min分別進行爬桿試驗。觀察小鼠協(xié)調(diào)運動能力，并進行評分。評分標準[13-14]：0分，一步一步向下爬;1分，向下滑行;2分，不能爬住棒;3分，翻正反射消失。

1.4.3 小鼠鎮(zhèn)靜催眠實驗[15-16]

1.4.3.1 入睡率 50只小鼠隨機分為5組：空白組、10 mg/kg地西泮組（陽性藥物，使用時用去離子水配制，灌胃給藥）組、蠐螬多糖低、中、高劑量組，每組10只。各組給藥1次，1 h后每組小鼠腹腔注射25 mg/kg（催眠閾下劑量）戊巴比妥鈉。觀察30 min，小鼠翻正反射消失達1 min以上者計為睡眠發(fā)生，計數(shù)各組睡眠發(fā)生的數(shù)目，計算入睡率，比較藥物對閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的催眠作用[17]。

1.4.3.2 睡眠時間 50只小鼠隨機分為5組：空白組、5.0 mg/kg地西泮組（陽性藥物），蠐螬多糖低、中、高劑量組。各組給藥1 h后，小鼠腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥鈉。觀察和記錄小鼠睡眠持續(xù)時間（翻正反射消失至恢復的時間）。

1.5 對心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響 將40只大鼠隨機分成4組：空白組、蠐螬多糖低、中、高劑量組，每組10只，雄雌各半。大鼠仰臥位固定于鼠臺上，BP-2010A型無創(chuàng)血壓分析儀記錄動物血壓及心率，呼吸頻率通過觀察大鼠胸腹部的收縮和隆起情況測得。動物各記錄指標穩(wěn)定后開始實驗，分別記錄大鼠給藥前、給藥后1 h，2 h的血壓、心率和呼吸的情況。

1.6 亞急性毒性試驗評價及給藥方法? 將30只大鼠隨機分成3組：設(shè)對照組和給藥組，給藥組按267 mg/kg、33 mg/kg分別腹腔注射給藥，對照組以生理鹽水腹腔注射，每組10只，雄雌各半。連續(xù)給藥14 d，各組均自由飲水進食，末次給藥1 h后，進行臟器系數(shù)測定、血常規(guī)檢查、血液生化指標檢查以及組織病理學檢查。

1.6.1 血液細胞分析 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后，由腹主動脈取血，血液細胞分析儀測定血液中白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）、血小板（PLT）數(shù)目、血紅蛋白量和紅細胞積壓。

1.6.2 生化分析心臟、肝臟、腎臟重要指標 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后，由腹主動脈取血，3000 r/min離心15 min，取血清，生化分析儀測定AST、ALT、ALB、GLU、TG、TC、HDL-C、BUN和CRE等水平。

1.6.3 組織病理觀察 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后麻醉處死大鼠，經(jīng)解剖，分別取小鼠心、肝、肺、脾和腎，將各組織修剪固定，制作成石蠟切片，觀察各組織病理學變化。簡要的石蠟切片制作方法如下：4%甲醛組織固定、乙醇梯度脫水、浸蠟、包埋、切片、H.E.染色、二甲苯進行透明處理。

1.7 統(tǒng)計方法 采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數(shù)加減標準差（x±s）表示，先行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析或t檢驗，不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗。P<0.05表示有顯著性差異，P<0.01表示有極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響

2.1.1 對自主活動和機體協(xié)調(diào)運動的影響 蠐螬多糖給藥后，小鼠的一般行為和空白組無統(tǒng)計學差異（P>0.05）;給藥后，在曠野箱內(nèi)10 min內(nèi)活動的格數(shù)空白組為（768.0±140.5）格;陽性藥僅為（357.7±31.6）格，顯著低于空白組（P<0.05）;蠐螬多糖低、中、高劑量組均與空白組無統(tǒng)計學差異（P>0.05），見表1。此外，小鼠機體協(xié)調(diào)運動的爬桿試驗發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，蠐螬多糖給藥后對小鼠機能協(xié)調(diào)功能無顯著影響，而陽性對照氯丙嗪則影響顯著，見表2。

2.1.2 對鎮(zhèn)靜催眠的影響 小鼠給藥30 min后戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠發(fā)生的情況見表3?？瞻捉M無動物入睡，地西泮組入睡率為90%，蠐螬多糖各劑量組也無小鼠入睡。給藥1 h后，各劑量組對戊巴比妥鈉催眠劑量小鼠睡眠時間的影響見表4。地西泮組的睡眠持續(xù)時間為（340.5±70.1）min，明顯高于空白組（111.0±29.7）min;蠐螬多糖低、中、高劑量組的睡眠持續(xù)時間分別為（145.7±52.8） min、（132.8±12.6 ）min和（145.4±10.3 ）min;中劑量和高劑量給藥組與空白組睡眠持續(xù)時間有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。

2.2 對心血管系統(tǒng)的影響 采用小動物無創(chuàng)血壓測定系統(tǒng)，雖然對照組收縮壓指標有波動，但屬大鼠正常波動范圍內(nèi);各劑量蠐螬多糖組和對照組相比收縮壓和舒張壓均有明顯升高作用（P<0.05）;蠐螬多糖對大鼠心率也有一定加快作用，但低、中劑量與對照組相比無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表5。

2.3 對呼吸系統(tǒng)的影響 3個劑量的蠐螬多糖對大鼠呼吸頻率均無明顯影響（P>0.05）。見表5。

2.4 亞急性毒性試驗

2.4.1 一般癥狀 試驗期間，給藥組大鼠未觀察到明顯異常反應(yīng)和中毒癥狀，行為活動、毛發(fā)、攝食、飲水、大小便均正常。給藥組與對照組的體重差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表6。

2.4.2 對小鼠臟器系數(shù)的影響 試驗期間，給藥組與對照組的心、肝、腎、脾、肺、胰腺臟器系數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表6。

2.4.3 對血常規(guī)指標的影響 由血液生理指標可見，蠐螬多糖給藥14 d，血液中紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞積壓差異無統(tǒng)計學意義（P> 0.05），高劑量蠐螬多糖組的白細胞數(shù)高于正常組（P<0.05），血小板數(shù)量也增加明顯（P>0.01）。見表7。

2.4.4 對血液生化指標的影響 蠐螬多糖給藥14 d，對ALT、T-BIL、D-BIL、LDL-C、TBA、LDHi、LDH-L、CRE有一定的下調(diào)趨勢，其中AST、TC顯著低于空白組（P<0.05），ALB、HDL-C極顯著低于空白組（P<0.01）。蠐螬多糖組的GLU、ALP、UA和CK略高于正常組，但差異無統(tǒng)計學意義（P> 0.05）。見表8。

2.4.5 病理學觀察結(jié)果 病理組織切片可以在細胞水平上反映毒物是否對器官造成了損傷。實驗對心、肝、脾、肺、腎、胰腺、腦等器官制成的切片進行顯微鏡鏡檢（如圖1）所示。結(jié)果表明對照組和蠐螬多糖實驗組心肌細胞均無顆粒變性、脂肪變性等，細胞之間均未發(fā)現(xiàn)炎性細胞浸潤，毛細血管均無內(nèi)皮細胞脹、脫落等病理變化;對照組和蠐螬多糖實驗組肝臟中肝小葉結(jié)構(gòu)均完整清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，無明顯病理變化;對照組和蠐螬多糖實驗組脾臟紅髓白髓界限清晰，可以看出明顯的生發(fā)中心;對照組和蠐螬多糖實驗組肺泡結(jié)構(gòu)完整無水腫等現(xiàn)象;對照組和蠐螬多糖實驗組腎小球結(jié)構(gòu)完整均一，均無腫大、出血現(xiàn)象;對照組和蠐螬多糖實驗組的胰腺和腦也無明顯病理變化。

3 討論

一般藥理學研究也稱為安全性藥理學研究，主要觀察受試物在治療范圍或治療范圍以上劑量時，潛在的不期望出現(xiàn)的對生理功能的不良影響，包括對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等方面的影響，為新藥用于臨床提供安全性依據(jù)，是新藥研究的重要內(nèi)容[18-20]。

本實驗嚴格參照中藥一般藥理學實驗推薦方法[11-12]，評價對神經(jīng)系統(tǒng)的影響時采用行為藥理實驗法類別下的鎮(zhèn)靜藥物實驗法和催眠藥物實驗法。鎮(zhèn)靜催眠藥一般都能延長戊巴比妥鈉的睡眠時間，本實驗選用戊巴比妥鈉和氯丙嗪作為陽性藥物構(gòu)建模型;使用BALB/c小鼠分別進行一般行為和自主活動機體協(xié)調(diào)運動實驗、戊巴比妥鈉閾下催眠劑量和睡眠劑量試驗。實驗所用BALB/c小鼠是國際近交系小鼠中常用品系，周曉冰等[21]也曾用BALB/c小鼠評價瑞格列汀對小鼠自主活動及協(xié)同睡眠的影響。評價對呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)影響時選用常用的健康SD大鼠，采用直接測定指標的方法觀察給藥后不同時間大鼠呼吸頻率、收縮壓、舒張壓、心率變化以評價蠐螬多糖對動物呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響。亞急毒實驗主要觀察動物在短期內(nèi)是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)，為長期毒性試驗和臨床研究提供基礎(chǔ)參考資料。目前常用健康SD大鼠，使用急性毒性給藥方案，于給藥后詳細記錄動物的飲食、飲水、死亡和尸體檢驗情況，并記錄臟器與體重的變化，測定血液生化指標及病理檢查。該法廣泛用于毒理學評價，王振宇等[22]也曾用SD大鼠評價新型鉑類化合物的肝毒性。

本研究統(tǒng)計分析組間比較采用單因素方差分析或t檢驗。t檢驗法又稱t值法顯著性檢驗，是最常用的處理定量資料的統(tǒng)計方法，該檢驗法在本研究中被用于兩組均數(shù)的顯著性檢驗;單因素方差分析適用于實驗中只有一個因素改變的試驗，本研究以蠐螬多糖給藥劑量為單因素，采用單因素方差分析進行組間比較用于判斷低、中、高不同給藥劑量對實驗指標的影響是否顯著。

蠐螬多糖是將蠐螬經(jīng)粉碎、堿水提取、醇液沉淀、雙氧水脫色等一系列步驟分離純化得到的，蠐螬多糖因具有抗腫瘤作用一直受到關(guān)注。歸海霞等[23]發(fā)現(xiàn)蠐螬的活性成分多糖還具有降脂作用。但蠐螬多糖對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及肝臟功能等方面的副作用尚未有報道，因此，本實驗針對蠐螬多糖開展了一般藥理學研究，為補充和完善其安全性實驗數(shù)據(jù)奠定基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)蠐螬多糖給藥后，高、中、低3個劑量組對小鼠姿勢、步態(tài)、肌顫、眼球震顫等一般行為無明顯影響，不影響小鼠自主活動，與戊巴比妥鈉閾下劑量無協(xié)同作用。蠐螬多糖3個劑量組經(jīng)腹腔注射后可以升高大鼠血壓和心率，但都屬于血壓和心率正常范圍。

目前國內(nèi)外還未見有關(guān)蠐螬多糖的毒理學研究報道。在課題組前期急性毒性實驗中，無法測出蠐螬多糖半數(shù)致死量，改測腹腔注射最大耐受量為8 g/kg，表明該多糖毒副作用很小或無毒副作用。亞急性毒性試驗中，與對照組相比，蠐螬多糖各劑量組對大鼠正?；顒印Ⅲw重、臟器系數(shù)影響的差異均無統(tǒng)計學意義，各主要臟器也無明顯病理學改變;盡管對血常規(guī)、血液生化指標中的血小板數(shù)、AST、ALB、HDL-C、TC有一定影響，但仍在正常范圍內(nèi)，進一步說明蠐螬多糖安全范圍大，具有較高的臨床用藥安全性。

綜上所述，本研究初步證實蠐螬多糖在藥效學有效劑量范圍內(nèi)有較高的安全性，并為開發(fā)蠐螬多糖相關(guān)新藥提供了一般藥理學數(shù)據(jù)。

參考文獻

[1]李萍. 蠐螬多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)特征與抗腫瘤作用的研究[D]. 西安：第四軍醫(yī)大學， 2016.

[2]劉媛媛， 曹蔚， 張雅，等. 蠐螬化學成分和藥理作用的研究進展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展， 2015， 15（12）：2375-2377.

[3]楊倉良， 齊英杰. 動物本草[M]. 北京：中醫(yī)古籍出版社， 2001： 915-916.

[4]董慶峰， 張崇禧， 張書鋒，等. 蠐螬的化學成分及藥理作用研究進展[J]. 藥學實踐雜志， 2008， 26（1）：14-16.

[5]Xu X， Liu W， Li W， et al. Anticoagulant activity of crude extract of Holotrichia diomphalia larvae[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2016（177）： 28-34.

[6]Dong QF， Wang JL， Zhang SF， et al. Antifungal activity of crude extracts and fat-soluble constituents of Holotrichia diomphalia larvae. [J]. Bioresource Technology，2008， 99（17）： 8521-8523.

[7]Dong Q F， Zhang S F， Wang Y L， et al. Chemical constituents of the petroleum ether extract of Holotrichia diomphalia， larvae[J]. Chemistry of Natural Compounds， 2009， 45（1）：79-80.

[8]李林， 李小年， 魏暑飔，等. 蠐螬化學成分研究[J]. 大理大學學報， 2012， 11（9）：1-4.

[9]Guo W， Yan X， Zhao C， et al. Efficacy of entomopathogenic Steinernema and Heterorhabditis nematodes against white grubs （Coleoptera： Scarabaeidae） in peanut fields[J]. Journal of Economic Entomology， 2013， 106（3）：1112-1117.