陳萍 萬(wàn)霞 劉瓊?cè)?/p>

[摘要]目的 研究α甲?；o酶A消旋酶（P504S）在結(jié)直腸癌（CRC）和正常結(jié)直腸黏膜中的表達(dá)及其臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)江門市中心醫(yī)院2017年1～12月共77例首發(fā)CRC手術(shù)根治切除標(biāo)本和30例癌旁正常黏膜中P504S的表達(dá)水平。結(jié)果 P504S在CRC中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.6%（59/77），顯著高于正常大腸黏膜組織的3.3%（1/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。P504S在高-中分化腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為93.1%（54/58），顯著高于低-未分化腺癌中的26.3%（5/19），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;P504S在浸潤(rùn)深度為T1+T2中的陽(yáng)性表達(dá)率為73.1%（19/26），在浸潤(rùn)深度為T3+T4中的陽(yáng)性表達(dá)率為78.4（40/51），兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC中P504S的陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%（40/48），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC中的陽(yáng)性表達(dá)率為65.5%（19/29），兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 P504S參與介導(dǎo)CRC的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，對(duì)CRC進(jìn)展、預(yù)后及指導(dǎo)腫瘤的術(shù)后輔助治療有重要的臨床意義。

[關(guān)鍵詞]結(jié)直腸腫瘤;P504S;免疫組織化學(xué);臨床意義

[中圖分類號(hào)] R735.3+? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）7（c）-0012-03

[Abstract] Objective To study the expression and clinical significance of α-methylacyl-CoA racemase （P504S） in colorectal cancer （CRC） and normal colorectal mucosa. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression level of P504S in 77 specimens with primary CRC resection and 30 cases of adjacent normal mucosa from January to December 2017 in Jiangmen Central Hospital. Results The positive expression rate of P504S in CRC was 76.6% （59/77）， which was significantly higher than 3.3% （1/30） in normal colorectal mucosa， and the difference was statistically significant （P<0.01）. The positive expression rate of P504S in high-medium differentiated adenocarcinoma was 93.1% （54/58）， which was significantly higher than that in low-undifferentiated adenocarcinoma accounting for 26.3% （5/19）， and the difference was statistically significant （P<0.01）. The positive expression rate of P504S in infiltration depth of T1+T2 was 73.1% （19/26）， and the positive expression rate in infiltration depth of T3+T4 was 78.4 （40/51）， and the difference was not statistically significant （P>0.05）. The positive expression rate of P504S in CRC with lymph node metastasis was 83.3% （40/48）， the positive expression rate in CRC without lymph node metastasis was 65.5% （19/29）， and the difference was not statistically significant （P>0.05）. Conclusion P504S is involved in mediating the development of CRC， and it has important clinical significance for the progression， prognosis and postoperative adjuvant therapy of CRC.

[Key words] Colorectal neoplasms; P504S; Immunohistochemistry; Clinical significance

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是我國(guó)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來(lái)世界范圍內(nèi)的發(fā)病率逐年上升，位于惡性腫瘤的第3位[1-2]。隨著人們飲食習(xí)慣、生活結(jié)構(gòu)的變化以及環(huán)境的影響，其發(fā)病率和死亡率仍在繼續(xù)增加[3-4]。多項(xiàng)研究證實(shí)CRC的發(fā)生和發(fā)展是多種因素及一系列基因共同作用的結(jié)果[5-7]，但其內(nèi)在的發(fā)病機(jī)制和具體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路仍未徹底闡明，還需要進(jìn)一步探索。

α甲酰基輔酶A消旋酶（α-methylacyl-CoA racemase）也被稱為P504S，其是胞質(zhì)內(nèi)一種參與脂肪酸的β氧化和衍生過(guò)程的蛋白質(zhì)，是目前公認(rèn)的用于前列腺癌診斷高度敏感和特異性的標(biāo)志物[8-9]。多項(xiàng)研究表明，PS04S在其他許多正常組織和腫瘤組織中也呈陽(yáng)性表達(dá)，但PS04s在正常結(jié)直腸黏膜及其腫瘤中的表達(dá)研究較少且研究結(jié)果不甚一致[10-12]。本研究應(yīng)用免疫組化檢測(cè)CRC中PS04s的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

收集江門市中心醫(yī)院2017年1～12月首發(fā)CRC手術(shù)根治切除標(biāo)本77例，且病理標(biāo)本經(jīng)HE染色確診為CRC患者的石蠟切片和蠟塊，術(shù)前均未接受化療，其中男41例，女36例，年齡37～84歲，平均（58.0±5.7）歲。參照WHO推薦的分化分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]，其中高-中分化腺癌58例，低-未分化腺癌19例;浸潤(rùn)深度T1+T2 26例，T3+T4 51例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例。同時(shí)選取CRC周圍正常黏膜組織30例。本研究經(jīng)江門市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2方法

所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋。以4 μm厚度切片，1張行HE染色，1張以PBS溶液代替一抗進(jìn)行陰性對(duì)照，1張行P504S免疫組化染色。選用確切陽(yáng)性的前列腺癌組織切片作陽(yáng)性對(duì)照，P504S單克隆抗體和SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司，常規(guī)SP法染色。所有實(shí)驗(yàn)步驟均按說(shuō)明書操作。

1.3染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化陽(yáng)性染色為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)彌漫淡黃、棕黃色顆粒，采用半定量積分法判斷結(jié)果[10]，具體如下。①陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分;②陽(yáng)性強(qiáng)度無(wú)色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將①②兩者積分相乘，0分為陰性（-），1～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 P504S在正常大腸黏膜組織與CRC中的表達(dá)情況

P504S在CRC中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.6%（59/77），顯著高于正常大腸黏膜組織的3.3%（1/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1、圖1，見(jiàn)封三）。

2.2 P504S在各項(xiàng)不同臨床病理特征CRC中的表達(dá)情況

P504S在高-中分化腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為93.1%（54/58），顯著高于低-未分化腺癌中的26.3%（5/19），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;P504S在浸潤(rùn)深度為T1+T2中的陽(yáng)性表達(dá)率為73.1%（19/26），在浸潤(rùn)深度為T3+T4中的陽(yáng)性表達(dá)率為78.4（40/51），兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC中P504S的陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%（40/48），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC中的陽(yáng)性表達(dá)率為65.5%（19/29），兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

P504S是一種存在線粒體和過(guò)氧化物酶體特異性分子標(biāo)志物，在脂肪酸及其衍生物的β氧化過(guò)程中起作用，多項(xiàng)研究表明P504S可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系[14-16]。P504S標(biāo)志物最早應(yīng)用于前列腺癌的免疫組織化學(xué)診斷，是目前公認(rèn)前列腺癌的高度敏感和特異的標(biāo)志物。越來(lái)越多研究顯示，P504S在乳頭狀腎細(xì)胞癌、尿路上皮癌、乳腺癌、肺癌及喉癌等其他許多腫瘤組織中也呈陽(yáng)性表達(dá)，而且其表達(dá)水平與腫瘤的生物學(xué)行為及預(yù)后有關(guān)[17-19]。

Jiang等[20]研究242例結(jié)腸腫瘤中P504s表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)P504S在高、中分化結(jié)腸腺癌和腺瘤中表達(dá)陽(yáng)性率分別是76%、75%和79%，在增生性息肉和正常黏膜中呈低表達(dá)，陽(yáng)性率只有4%。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，P504S在CRC高中分化組和低分化組表達(dá)率分別為85.7%和25.0%[11]。本研究結(jié)果顯示，P504S在CRC和正常結(jié)直腸黏膜中的表達(dá)率分別為76.6%和3.3%，并且P504S在CRC高-中分化組和低-未分化組表達(dá)率分別為93.1%和26.3%，這與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道相一致[11，15]，進(jìn)一步提示P504S與CRC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。P504S在CRC低-未分化組的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于高中分化組可能存在以下兩個(gè)原因：①P504S可能僅在CRC發(fā)生的起始階段起作用，參與CRC早期癌變的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，一旦該信號(hào)因子啟動(dòng)，在腫瘤的發(fā)展進(jìn)程中便不再發(fā)揮作用;②高-中分化CRC與低-未分化CRC的發(fā)生發(fā)展由各自不同的信號(hào)因子參與介導(dǎo)，并且P504S在高-中分化CRC中發(fā)生發(fā)展中作用更明顯。

國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，P504S與CRC浸潤(rùn)深度和Duke′s分期有關(guān)，與淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)[10]，而本研究結(jié)果顯示，P504S與CRC浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)（P>0.05），其結(jié)果不甚一致提示可能與標(biāo)本選擇、檢測(cè)方法以及腫瘤類型不同有關(guān)，其實(shí)際情況如何相信隨著筆者研究的進(jìn)一步深入會(huì)得以闡明。

綜上所述，P504S在CRC發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，可應(yīng)用于腫瘤早期診斷和篩查，判定腫瘤患者的預(yù)后及腫瘤復(fù)發(fā)等方面，并可作為CRC進(jìn)展、預(yù)后及指導(dǎo)腫瘤的術(shù)后輔助治療，并為腫瘤基因靶向治療提供新的方向。

[參考文獻(xiàn)]

[1]陳萬(wàn)青.2012年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國(guó)腫瘤，2016，25（1）：1-8.

[2]李道娟.結(jié)直腸癌流行病學(xué)趨勢(shì)[J].腫瘤防治研究，2015， 42（3）：305-310.

[3]陳功.結(jié)直腸癌防治研究最新進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2016，37（22）：3323-3328.

[4]崔瀚文.結(jié)直腸癌的研究進(jìn)展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（連續(xù)型電子期刊），2015，21（1）：157-158.

[5]歐陽(yáng)方丹.結(jié)直腸癌的分子生物學(xué)診斷進(jìn)展研究[J].中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2016，8（16）：25-26.

[6]史艷春.結(jié)直腸癌信號(hào)通路及相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J].中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2016，22（5）：433-438.

[7]Shi X，Gong E，Wu X.Alpha-methylacyl-CoA racemase/P504S overexpression in colorectal carcinoma is correlated with tumor differentiation[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol，2007，15（2）：175-180.

[8]何乾.前列腺腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展及臨床意義[J].癌癥進(jìn)展，2017，15（1）：7-9.

[9]李龍.P504s在前列腺癌中的表達(dá)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2017，55（29）：6-8.

[10]陳金培.P504S在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其意義[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2009，9（9）：32-34.

[11]徐元成.P504S在結(jié)直腸癌及上皮內(nèi)腫瘤中的表達(dá)及意義[J].腫瘤學(xué)雜志，2008，14（4）：280-282.

[12]Seipel AH，Samaratunga H，Delahunt B，et al.Immunohistochemistry of ductal adenocarcinoma of the prostate and adenocarcinomas of non-prostatic origin：a comparative study[J].APMIS，2016，124（4）：263-270.

[13]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)政醫(yī)管局.中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）[J].中華外科雜志，2018， 56（4）：241-258.

[14]Lin F，Brown RE，Shen T，et al.Immunohistochemical detection of P504S in primary and metastatic renal cell carcinomas[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol，2004，12（2）：153-159.

[15]Ngo NT，Tan E，Tekkis P，et al.Differential expression of p53 and p504s in hyperplastic polyp，sessile serrated adenoma and traditional serrated adenoma[J].Int J Colorectal Dis，2010，25（10）：1193-1200.

[16]Aviel-Ronen S，Zadok O，Vituri A，et al.α-methylacyl-CoA racemase（AMACR）expression in chordomas differentiates them from chondrosarcomas[J].Sci Rep，2016，6：21 277.

[17]Senol S，Ceyran A，K semetin D，et al.Immunohistochemical profile of tumor pathways and prognostic significance in colon adenocarcinomas[J].J Environ Pathol Toxicol Oncol，2017，36（1）：29-41.

[18]Duyar SS，Yilmaz A，Demirag F，et al.The expression and clinical effects of alpha-methylacyl-CoA racemase（AMACR/ P504S） as an immunohistochemical marker in malign pleural mesothelioma[J].Turk J Med Sci，2015，45（3）：607-614.

[19]Chen Z，Shi H，Ying L，et al.Significance of P504s in distinction between solid pseudopapillary tumor of pancreas and pancreatic neuroendocrine tumors[J].Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi，2015，44（5）：320-322.

[20]Jiang Z，F(xiàn)anger GR，Banner BF，et al.A dietary enzyme：alpha-methylacyl-CoA racemase/P504S is overexpressed in colon carcinoma[J].Cancer Detect Prev，2003，27（6）：422-426.

（收稿日期：2019-01-11? 本文編輯：任秀蘭）