鄧欣鑫 張瑤瑤 虞麗娜 朱霞琳 趙 瑩

藥學院，山東第一醫(yī)科大學(山東省醫(yī)學科學院)，山東 泰安 271016

1 儀器與試劑

1.1 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(型號：N-1300V型，生產(chǎn)廠家：東京理化器械株式會社)；循環(huán)水式多用真空泵(型號：SHZ-DⅢ，生產(chǎn)廠家：上?？婆d儀器有限公司)；電子分析天平(型號：XS205DU型，生產(chǎn)廠家：上海梅特勒-托利多有限公司)；紫外可見分光光度計(型號：Gold S54，生產(chǎn)廠家：上海棱光技術(shù)有限公司)；數(shù)控超聲波清洗器(型號：KQ5200DE型，生產(chǎn)廠家：昆山市超聲儀器有限公司)；臺式電熱干燥箱(型號：202-2AB型，生產(chǎn)廠家：天津市泰斯特儀器有限公司)；水浴鍋(型號：HH.S11-Ni2型，生產(chǎn)廠家：北京三二八科學儀器有限公司)；臺式低速離心機(型號：TD4型，生產(chǎn)廠家：常州金勝儀器制造有限公司)；純水儀(生產(chǎn)廠家：MILLIPORE)。

1.2 試劑

茄根采自山東省泰安市泰山區(qū)上高街道辦事處上高村，由山東省泰安市食品藥品檢驗檢測中心中藥科的刁興斌老師鑒定為茄科(Solanaceae)茄屬植物(SolanumL.)茄的干燥根莖部位；水：超純水(自制)；石油醚、無水乙醇、濃硫酸、正丁醇、葡萄糖、苯酚、氯仿、丙酮等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1茄根多糖的提取與精制工藝

樣品處理→脫脂→浸提→抽濾除渣→減壓濃縮→離心→乙醇沉淀多糖→靜止離心→粗多糖→復(fù)溶→脫蛋白→醇沉→干燥→精制多糖。

2.1.2工藝要點說明

樣品處理：將茄根除去雜質(zhì)，置于恒溫干燥箱中烘干，粉碎備用。

基于草原絲路文物資源的鄉(xiāng)村旅游產(chǎn)業(yè)開發(fā)缺乏統(tǒng)一部署，具有文物資源地區(qū)各行其是，未用系統(tǒng)眼光看待問題，解決問題，開發(fā)模式分散。無論是從橫向上看還是從縱向上看，鄉(xiāng)村旅游產(chǎn)業(yè)與相關(guān)產(chǎn)業(yè)融合度都比較低，導(dǎo)致相關(guān)產(chǎn)品附加值低，宣傳力度不夠。產(chǎn)品部門間協(xié)作不強，產(chǎn)業(yè)鏈條較短，產(chǎn)業(yè)關(guān)聯(lián)效果不顯著。產(chǎn)業(yè)處于起步階段，發(fā)展機制仍需完善。

脫脂：稱取藥材5.0 g，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL石油醚，密塞后，振搖，超聲(40℃，頻率40 kHz)提取30 min，脫去其表面脂類物質(zhì)，抽濾，晾干，重復(fù)脫脂1次。

浸提：脫脂晾干后試樣，以1∶20的料液比加入蒸餾水，在40℃水浴中超聲浸提30 min，過濾后，在相同條件下重復(fù)提取1次。

抽濾除渣：將2次提取液合并，減壓抽濾。

減壓濃縮：利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液，約至20 mL，冷卻至室溫。

離心和醇沉：將濃縮液離心5 min(5000 r/min),棄去沉淀后，緩慢加入無水乙醇(約3倍量)，不斷用玻璃棒攪拌，使多糖充分析出。

靜置離心：將上述溶液靜置1 d后，在離心機上離心得粗多糖沉淀。

復(fù)溶和脫蛋白：粗多糖復(fù)溶，利用Sevage試劑除蛋白，連續(xù)操作到脫除蛋白質(zhì)完全。

醇沉：在除去蛋白后的溶液中加入無水乙醇(3倍量)沉淀，依次用石油醚、丙酮、乙醇反復(fù)洗滌，離心，干燥，得精制多糖。

2.1.3標準曲線的繪制

葡萄糖標準溶液的配制：取一定量的葡萄糖對照品于105℃干燥至恒重，精密稱取10 mg，置于250 mL容量瓶中，加超純水溶解，稀釋至刻度，搖勻，配制成40 μg/mL的葡萄糖標準溶液備用。

苯酚溶液的配制[9]：稱取苯酚30 g，常壓蒸餾收集182℃的餾分，取餾出液6.0 g，加入超純水100 mL，配制6%的苯酚溶液，置棕色瓶中備用。

標準曲線的繪制:分別精密吸取0.0、0.8、1.2、1.6、3.2 mL的40 μg/mL的葡萄糖標準溶液，置于10 mL具塞刻度試管中，分別在各試管中加入超純水至體積為2.0 mL，空白試管中加入2.0 mL超純水作對照，各管分別加入6%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，滴加濃硫酸5.0 mL，振搖，放置5 min，置沸水浴中加熱25 min，迅速冷卻，至室溫，在490 nm波長處測量吸光度，繪制標準曲線。

2.1.4樣品中多糖的含量測定[10]

精密稱取茄根粉末5.0 g，利用石油醚于超聲條件下脫脂2次，抽濾，將濾渣風干后加超純水超聲提取2次后，抽濾，合并2次濾液，濃縮后加3倍量無水乙醇，靜置過夜，離心，沉淀復(fù)溶，定容至100 mL，搖勻，作為樣品溶液。吸取1.0 mL，按照上述標準曲線操作步驟，測其吸光度。多糖含量(%)=樣品液中葡萄糖的濃度(mg/mL)×樣品液的稀釋倍數(shù)×測定液總體積(mL)/樣品的重量(mg)。

2.2 實驗結(jié)果

2.2.1標準曲線回歸方程建立

根據(jù)標準曲線的繪制方法，在波長490 nm處測定溶液吸光度，參比為空白試劑，實驗結(jié)果見表1。以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標，得到線性回歸方程：A=0.0572C+0.0030，r2=0.9993，相關(guān)系數(shù)r=0.9986，表明葡萄糖在4.0～16.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表1 葡萄糖標準溶液濃度與吸光度值

2.2.2穩(wěn)定性實驗

取試樣2.0 mL，按標準曲線測定的方法配制，室溫放置120 min，每隔30 min測1次吸光度，考察溶液的穩(wěn)定性，實驗結(jié)果表明，在顯色后90 min內(nèi)的穩(wěn)定性最好，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

2.2.3精密度實驗

吸取標準溶液1.0 mL，按標準曲線測定的方法進行精密度實驗，連續(xù)進行6次測定其吸光度，得RSD(%)=2.35，表明精密度良好。

2.2.4重現(xiàn)性實驗

精確吸取來自于同一批原料的試樣，按標準曲線測定的方法，分別測定其吸光度，檢驗該測定方法的重現(xiàn)性，得RSD(%)=1.50，表明重復(fù)性較好。

2.2.5加標回收率實驗

精密吸取已配制的35 μg/mL 粗多糖溶液1.0 mL，分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL的40 μg/mL標準葡萄糖溶液，稀釋后按標準曲線測定的方法分別測定其吸光度值，并計算加標回收率，見表2，結(jié)果表明樣品加標回收率均在95%～105%之間，說明本法可行。

表2 加標回收率實驗結(jié)果

2.2.6樣品中多糖含量測定結(jié)果

按上述測定方法，同時做3個重復(fù)，經(jīng)測定吸光度值分別為0.237、0.235、0.234，由公式計算的茄根多糖平均含量為4.5%。

3 結(jié) 論

本實驗采用超聲波輔助法對茄根中的多糖進行提取，用苯酚-硫酸法測其含量。在苯酚-硫酸法的條件下，測得茄根多糖含量平均為4.5%。該實驗的標準曲線線性關(guān)系良好，多糖含量測定結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，回收率高，說明苯酚-硫酸法可以用于測定茄根中多糖含量，具有一定的推廣和參考價值，同時也為茄根藥材的質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。