□ 吳林陽(yáng) 遂寧市檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司

1 材料和方法

1.1 材料

堿性甲醇溶液（5%）：取950.0 mL甲醇溶液，加入50.0 mL氨水，混合均勻。

50%甲醇水溶液：取250.0 mL甲醇，加入250.0 mL超純水，混合均勻。

1.2 方法

1.2.1 改進(jìn)法

稱取具有代表性的樣品5 g于50 mL離心管中，加入10.00 mL堿性甲醇溶液，超聲波提取15～20 min，6 000 r/min離心5 min收集提取液，重復(fù)提取2～3次，合并提取液，45 ℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入2.00 mL50%甲醇水溶液溶解定容，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。

1.2.2 國(guó)標(biāo)法

聚酰胺吸附法：樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH到6，加熱至60 ℃，將1 g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60 ℃ pH為4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5.0 mL。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析[1]。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相：A乙腈、B乙酸（1.0%）；柱溫：35 ℃；波長(zhǎng)：254 nm；流速：1.0 mL/min； 進(jìn) 樣 量：10 μL； 以1.0 mL/min的流速梯度洗脫；0～8 min，B：60%；8～18 min，B：0%；18～30 min，B：60%。

2 結(jié)果與討論

2.1 兩種方法的比較

對(duì)樣品中6種著色劑（檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃及赤蘚紅）加標(biāo)樣0.50 μg，用兩種提取方法做平行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果平均值見表1。由表1可見，改進(jìn)方法好于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法的測(cè)定結(jié)果，檸檬黃加標(biāo)回收率為94%～98%；胭脂紅加標(biāo)回收率在92%～104%；莧菜紅加標(biāo)回收率為9%4～100%；日落黃加標(biāo)回收率為94%～106%；新紅加標(biāo)回收率為96%～102%；赤蘚紅加標(biāo)回收率為98～102%。

表1 兩種提取方法結(jié)果

2.2 討論

用堿性甲醇溶液將提取的樣品pH調(diào)成堿性有利于色素的提取。氨水加熱氮吹時(shí)容易揮發(fā)分離，甲醇溶液可以使樣品中蛋白質(zhì)變性且絮凝沉淀，通過(guò)高速離心分離，著色劑易溶于甲醇中達(dá)到提取分離的目的，每次甲醇提取色素的量因產(chǎn)品不同而不同，提取次數(shù)還需根據(jù)實(shí)驗(yàn)情部而定。