□ 翟崇華 玉溪市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心

材料與方法

儀器

①日本島津LC-20AT高效液相色譜儀（帶紫外檢測(cè)器）；②AS-A型系列超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯化器有限公司）；③超純水機(jī)（臺(tái)灣艾柯儀器公司）；④分析天平，感量0.1 mg；⑤恒溫水浴鍋；⑥勻漿機(jī)。

試劑

①安賽蜜：濃度1.00 mg/mL（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；②苯甲酸：濃度1.00 mg/mL（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；③山梨酸：濃度1.00 mg/mL（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；④糖精鈉：濃度1.00 mg/mL（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；⑤甲醇（色譜純）；⑥氨水（分析純）；⑦無水乙醇（分析純）；⑧正己烷（分析純）。

試劑配制

（1）脫氫乙酸（98.0%）儲(chǔ)備液。用10 mL20 g/L的碳酸氫鈉溶液溶解，加水配制成1.00 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

（2）0.02 mol/L乙酸銨溶液。稱取1.54 g優(yōu)級(jí)純乙酸銨用水溶解后定容至1 000 mL，經(jīng) 0 .45μm水系濾膜用真空泵抽濾。

（3）220 g/L乙酸鋅溶液。稱取220 g分析純乙酸鋅溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至1 000 mL。

（4）106 g/L亞鐵氰化鉀溶液。稱取106 g分析純亞鐵氰化鉀用水溶解后定容至1 000 mL。

（5）20 g/L碳酸氫鈉溶液。稱取20 g分析純碳酸氫鈉用水溶解后定容至1 000 mL。

（6）氨水溶液（1+99）。取氨水1 mL，加99 mL水中，混勻。

實(shí)驗(yàn)方案

色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS 5μm,4.6 mm×150 mm（日本島津），流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨=10+90，總流速1.00 mL/min，柱壓20 MPa，柱溫40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，進(jìn)樣體積10μL,采集時(shí)間15 min。

檢測(cè)部分

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 mg/L）各10 mL于50 mL容量瓶中，用水定容成混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（200 mg/L）。分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0.0、0.05、0.25、0.50、1.00、2.50、5.00 mL及 10.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，成質(zhì)量濃度分別為0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100 mg/L及 200 mg/L，經(jīng) 0 .45μm水系濾頭過濾后上機(jī)檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試樣制備

取多個(gè)預(yù)包裝的飲料、液體奶等均勻樣品直接混合；非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿；固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻；奶酪、黃油、巧克力在50～60 ℃下加熱熔融，并趁熱充分?jǐn)嚢杈鶆?。取其中?00 g裝入玻璃容器中，密封，液體試樣及不能常溫存放的于4 ℃下保存。

試樣提取

（1）一般性試樣。精確稱取5～10 g樣品于100 mL比色管中，加入50 mL水，搖勻浸泡30 min。

（2）含膠基的果凍、糖果等試樣。精確稱取5 g試樣于100 mL比色管中，加入50 mL水，超聲混勻，于70 ℃水浴加熱溶解試樣，超聲處理20 min。

（3）脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂試樣。精確稱取5 g試樣于100 mL比色管中，加正己烷10 mL，于60 ℃水浴加熱約5 min，輕搖以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50 mL，無水乙醇2 mL，搖勻，超聲處理20 min，棄去有機(jī)相，水相轉(zhuǎn)移至100 mL比色管中。

樣品測(cè)定

分別在上述處理試樣中各加入5 mL乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液，搖勻定容至100 mL，靜置沉降，取上層清液1 mL經(jīng) 0 .45μm水系濾頭過濾后上機(jī)檢測(cè)，采用外標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。待測(cè)樣液待測(cè)組分濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

結(jié)果計(jì)算

樣中待測(cè)組分含量的計(jì)算公式如式（1）所示。

式（1）中：X試樣中待測(cè)組分含量，單位為g/kg；c-由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的試樣液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為mg/L；V-試樣定容體積，單位為mL；m-試樣質(zhì)量，單位為g；1 000-由mg/kg轉(zhuǎn)換為g/kg的換算因子。

結(jié)果與討論

稱取樣品應(yīng)根據(jù)待測(cè)組分含量計(jì)算取樣量。確保待測(cè)組分濃度保持在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，若檢測(cè)后超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

試樣處理時(shí)注意：醬油、食醋、碳酸飲料、果酒、果汁、蒸餾酒等測(cè)定時(shí)可以不加蛋白沉淀劑。

食品中這5個(gè)項(xiàng)目有3個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)，本人經(jīng)過實(shí)際操作整合為一個(gè)檢測(cè)方法一起檢測(cè)5個(gè)項(xiàng)目。當(dāng)然色譜柱的選擇很關(guān)鍵，色譜柱選擇不當(dāng)，就不能一起檢測(cè)5個(gè)項(xiàng)目。

以上內(nèi)容對(duì)食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸含量測(cè)定，采用國家標(biāo)準(zhǔn)需要分3次檢測(cè)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，成本高，5個(gè)項(xiàng)目同時(shí)測(cè)定的高效液相色譜法非常有實(shí)用價(jià)值，試樣前處理簡(jiǎn)單，定量測(cè)定的靈敏度和準(zhǔn)確度高，完全能滿足三個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)要求（GB5009.28-2016、GB5009.121-2016、GB/T5009.140-2003），非常值得本專業(yè)人士參考。