李明珠 薛曉陽(yáng) 李佳佳 王雪敏

蛋種雞育雛階段法氏囊抗體檢測(cè)不同試劑盒數(shù)據(jù)對(duì)比分析

李明珠 薛曉陽(yáng) 李佳佳 王雪敏

（華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 河北省蛋雞產(chǎn)業(yè)研究院 河北 邯鄲 056000）

采集同一育雛場(chǎng)不同日齡段的血清樣品，同樣的血清樣品分別用全病毒包被試劑盒與VP2蛋白包被試劑盒，通過ELISA抗體檢測(cè)進(jìn)行篩選，從而篩選出不同抗體滴度的血清，將篩選出來不同抗體滴度的血清與法氏囊病毒進(jìn)行中和，結(jié)合以上兩種實(shí)驗(yàn)分析，用VP2蛋白包被試劑盒篩選出育雛階段不同日齡的血清樣品抗體滴度與病毒中和試驗(yàn)保護(hù)力相吻合，更能有效的評(píng)判育雛階段雞群免疫效果，為生產(chǎn)提供指導(dǎo)意義。

育雛場(chǎng) 血清 IBD試劑盒 IBD病毒 SPF雞胚 解析

蛋雞傳染性法氏囊病是一種急性、高度接觸性傳染病，是由于感染傳染性法氏囊病毒而導(dǎo)致，傳染性法氏囊病毒屬于雙RNA病毒科，包括兩個(gè)血清型[1]。以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和法氏囊內(nèi)淋巴細(xì)胞嚴(yán)重受損為特征[2]。從而引起雞的免疫機(jī)能障礙，干擾各種疫苗的免疫效果，給養(yǎng)雞業(yè)造成重大危害的一種疾病[3]。該病全年任何季節(jié)都能夠發(fā)生，其中20-40日齡雛雞非常容易感染。該病具有2~3d的潛伏期，通常在易感雞群中突然出現(xiàn)發(fā)病，病雞主要特征是發(fā)生腹瀉，精神萎靡，法氏囊明顯腫大且伴有出血，腎臟腫大，以及肌肉出血等，典型發(fā)病雞群會(huì)出現(xiàn)尖峰式的死亡曲線，通常經(jīng)過1~2d死亡率明顯升高，呈直線上升，在3-4d達(dá)到死亡高峰，之后快速降低[4]。病毒主要隨病雞糞便排出，污染飼料、飲水和環(huán)境，使同群雞經(jīng)消化道、呼吸道和眼結(jié)膜等感染；各種用具、人員及昆蟲也可以攜帶病毒，擴(kuò)散傳播；本病還可經(jīng)蛋傳遞，給養(yǎng)雞業(yè)造成一定危害[5]。應(yīng)加以防控和適時(shí)檢測(cè)，目前市場(chǎng)上法氏囊血清抗體檢測(cè)試劑盒應(yīng)用最為廣泛地有兩種，一種為全病毒包被試劑盒，另一種為VP2蛋白包被試劑盒，同一血清樣品用兩種試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比數(shù)據(jù)相對(duì)較少，因此，本次試驗(yàn)對(duì)育雛階段同一血清分別用兩種試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，看哪種試劑盒檢測(cè)對(duì)育雛階段免疫VP2蛋白疫苗更有指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 IBD試劑盒 某一試劑盒：全病毒包被試劑盒；某二試劑盒： VP2蛋白包被試劑盒

1.1.2 試驗(yàn)雞群 A雞場(chǎng)，89日齡，海蘭褐雞，7日齡免疫法氏囊VP2蛋白油苗(劑量0.35ml/只，疫苗名稱，新法流油苗，廠家，青島易邦)。B場(chǎng)，34日齡，海蘭褐雞，未免疫法氏囊VP2蛋白油苗。C場(chǎng)，28日齡，海蘭褐雞，7日齡免疫法氏囊VP2蛋白油苗(劑量0.35ml/只，疫苗名稱，新法流油苗，廠家，青島易邦)。

1.2 方法

1.2.1 采樣方法 28、34、89d采集血清，進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)。數(shù)量，血清每棟10份樣品，隨即采樣，待血清清洗出后標(biāo)明信息。樣品，11日齡SPF雞胚，數(shù)量，5枚。

1.2.2 血清檢測(cè)方法 參照試劑盒產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作，嚴(yán)格注意操作細(xì)節(jié)。

1.2.3 血清病毒中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法 根據(jù)兩種試劑盒篩選出不同的抗體滴度，將篩選出不同滴度的血清樣品分為3組，分別為A組(1-10號(hào)，89日齡)某一試劑盒和某二試劑盒兩種試劑盒檢測(cè)抗體滴度都在5000以上、B組(1-10號(hào)，34日齡)某一試劑盒和某二試劑盒兩種試劑盒檢測(cè)都為陰性和C組(1-10，28日齡)某一試劑盒檢測(cè)為陰性，某二試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性；并設(shè)立D組為PBS對(duì)照組。將上述各組分別與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，37℃孵育1h，通過CAM途徑接種5枚11日齡SPF雞胚。將上述各組置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)，記錄每天死亡情況。

2 結(jié)果

2.1 血清ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果 見表1。

2.2 血清病毒中和試驗(yàn)結(jié)果 見表2。

3 討論

3.1 血清ELISA抗體

（1）A場(chǎng)區(qū)在7日齡免疫法氏囊VP2蛋白油苗，84日齡檢測(cè)全病毒包被試劑盒抗體滴度在5241~8815Log10之間，VP2蛋白包被試劑盒抗體滴度在12800~12715Log10之間。（2）B場(chǎng)區(qū)未免疫法氏囊VP2蛋白油苗，34日齡檢測(cè)全病毒包被試劑盒抗體滴度在0~97Log10之間，VP2蛋白包被試劑盒抗體滴度都為0。（3）C場(chǎng)區(qū)在7日齡免疫法氏囊VP2蛋白油苗，28日齡檢測(cè)全病毒包被試劑盒抗體滴度在136~288Log10之間，VP2蛋白包被試劑盒抗體滴度在3957~12534Log10之間。

表1 血清ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

注：檢測(cè)采用法氏囊試劑盒產(chǎn)品，所出數(shù)據(jù)為軟件自動(dòng)生成，全病毒包被試劑盒陰陽(yáng)性臨界值滴度397。

表2 雞胚死亡記錄表

3.2 血清病毒中和試驗(yàn)

（1）A組89日齡用兩種試劑盒檢測(cè)抗體滴度都在5000以上的血清樣本，與0.01羽份IBDV (103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接種SPF雞胚，沒有出現(xiàn)雞胚死亡現(xiàn)象，證明該血清對(duì)IBD病毒具有中和能力，可以增強(qiáng)保護(hù)力。（2）B組34日齡用兩種試劑盒檢測(cè)都為陰性的血清樣本，與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接種SPF雞胚，雞胚分別在第2、4、5、6天出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，證明該血清對(duì)IBD病毒不具有中和能力，沒有保護(hù)力。（3）C組28日齡用全病毒包被試劑盒檢測(cè)為陰性，VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的血清樣本，與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接種SPF雞胚，雞胚無死亡現(xiàn)象，證明該血清對(duì)IBD病毒具有中和能力，可以增強(qiáng)保護(hù)力。（4）D組為陽(yáng)性對(duì)照組，因PBS本身不具備中和能力，與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，接種SPF雞胚，雞胚分別在第3、4、5天出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，證明對(duì)IBD病毒不具有中和能力，沒有保護(hù)力。

3.3 結(jié)果分析

（1）場(chǎng)區(qū)在育雛期間免疫法氏囊VP2蛋白油苗，雞群89日齡進(jìn)行檢測(cè)，全病毒包被試劑盒與VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)抗體滴度達(dá)到5000以上的血清，與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通過CAM途徑接種5枚11日齡SPF雞胚，37℃恒溫箱中培養(yǎng)，7d之內(nèi)，未出現(xiàn)雞胚死亡現(xiàn)象，證明血清抗體滴度達(dá)到5000以上對(duì)法氏囊病毒都具有保護(hù)力，同樣的血清，通過兩種試劑盒檢測(cè)，用VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)血清抗體滴度明顯高于全病毒包被試劑盒，說明VP2蛋白包被試劑盒針對(duì)法氏囊VP2蛋白油苗檢測(cè)更為靈敏。（2）場(chǎng)區(qū)在育雛期間如果未免疫法氏囊VP2蛋白油苗，雞群34日齡進(jìn)行檢測(cè)，全病毒包被試劑盒與VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)抗體都為陰性的血清，與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通過CAM途徑接種5枚11日齡SPF雞胚，37℃恒溫箱中培養(yǎng)，7d之內(nèi)5枚雞胚全部出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，證明沒有進(jìn)行法氏囊免疫的雞群對(duì)病毒入侵，不具有保護(hù)力，另外同樣的血清，通過兩種試劑盒檢測(cè)，用VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)血清抗體滴度都為0，用全病毒包被試劑盒檢測(cè)的血清抗體滴度陽(yáng)性判定值397以下，雖然為陰性，但仍有抗體滴度檢出，說明VP2蛋白包被試劑盒針對(duì)法氏囊VP2蛋白油苗檢測(cè)更為精確，更為靈敏。（3）場(chǎng)區(qū)在育雛期間免疫法氏囊VP2蛋白油苗，雞群28日齡進(jìn)行檢測(cè)，全病毒包被試劑盒檢測(cè)抗體滴度為陽(yáng)性臨界值397以下，都為陰性雞只，同樣的血清，用VP2蛋白包被試劑盒檢測(cè)血清抗體滴度都在3937~12534之間，全部為陽(yáng)性，用該血清與0.01羽份IBDV(103.68ELD50/羽)按照1:1混合，通過CAM途徑接種5枚11日齡SPF雞胚，37℃恒溫箱中培養(yǎng)，7d之內(nèi)，未出現(xiàn)雞胚死亡現(xiàn)象，說明該檢測(cè)的28日齡血清雞群已對(duì)法氏囊病毒具有保護(hù)力，說明VP2蛋白包被試劑盒針對(duì)法氏囊VP2蛋白油苗檢測(cè)更為精確，更為靈敏。

4 結(jié)論

（1）用VP2蛋白包被試劑盒篩選出育雛階段不同日齡的血清樣品抗體滴度與病毒中和試驗(yàn)保護(hù)力相吻合。（2）用VP2蛋白包被試劑盒更能有效的評(píng)判育雛階段雞群免疫效果，更能夠有效為生產(chǎn)提供指導(dǎo)意義。

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（2019–06–23）

蛋種雞雜交籠養(yǎng)生態(tài)健康養(yǎng)殖關(guān)鍵技術(shù)研究(編號(hào)1812106036)

S818.9

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1007-1733(2019)09-0009-03