趙學勤 王東明 樸紀穎 段旭峰

[摘要]目的：探討在結(jié)直腸癌中白細胞介素-33（IL-33）的表達與臨床意義，旨在為結(jié)直腸癌診斷與治療提供參考依據(jù)。方法：選取本院于2017年12月-2019年2月期間收治的120例患者的結(jié)直腸組織標本作為研究對象，包括35例癌旁組織，44例結(jié)直腸腺瘤，41例結(jié)直腸腺癌，均予以結(jié)直腸癌根治術(shù)予以治療。采用免疫組織化學染色法對上述患者IL-33表達情況進行檢測，并探討其表達狀況與患者臨床特征之間的關(guān)系。結(jié)果：在癌旁組織中IL-33表達量最低，在結(jié)直腸腺瘤中則主要在表面上皮予以分布，與癌旁黏膜組織無顯著差異（P>0.05）。而IL-33在結(jié)直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結(jié)直腸腺瘤組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）：結(jié)直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>O 05）;與浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期具有顯著關(guān)系，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。討論：IL-33表達與結(jié)直腸癌臨床分期、浸潤程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性程度因素具有顯著相關(guān)性，在結(jié)直腸癌早期診斷中IL-33可作為標志物與治療靶點。

[關(guān)鍵詞]結(jié)直腸癌;白細胞介素;IL-33;表達水平

[中圖分類號]R735.24[文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）07-012-02

結(jié)直腸癌作為第三位高發(fā)癌癥，屬于最為常見的消化系統(tǒng)腫瘤，具有較高的發(fā)病率及死亡率?；颊咴谂R床上早期癥狀不明顯，大部分患者在確診時就已經(jīng)發(fā)生肝臟遠處轉(zhuǎn)移，而該類患者平均生存時間不到2年。同時由于大部分結(jié)直腸患者發(fā)病于中老年人群，通常這部分人群會伴有其他基礎疾病，因而在臨床治療中容易產(chǎn)生精神異常、腸道調(diào)節(jié)功能不良等一系列不良反應的發(fā)生，即便近年來臨床治療手段得到提高，但仍未顯著提高患者的總生存率。白細胞介素在免疫反應調(diào)節(jié)與細胞活化增殖等環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，其中白細胞介素-33（IL-33）主要于如炎性細胞、間葉細胞以及上皮細胞等多種類型細胞中表達，因而在自然免疫中具有重要位置。鑒于此，本次以本院收治的120例患者的結(jié)直腸組織標本作為研究對象，采用免疫組織化學染色法對患者IL-33表達情況進行檢測，并探討其表達狀況與患者臨床特征之間的關(guān)系。現(xiàn)將研究結(jié)果分析如下：

1 資料與方法

1.1一般資料：選取本院于2017年12月-20195F2月期間收治的120例患者的結(jié)直腸組織標本作為研究對象，其中包括35例癌旁組織，44例結(jié)直腸腺瘤，41例結(jié)直腸腺癌，患者及其家屬均簽署知情同意書，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。男性患者74例，女性患者46例;年齡36-82歲，平均年齡（65.12±9.22）歲。

1.2儀器與試劑：試劑包括兔抗人IL-33單克隆抗體，EDTA抗原修復液，PBS緩沖液，鼠/兔通用型二抗，酶底物顯色劑（DAB），3%HO溶液，蘇木素染色液，牛血清白蛋白。儀器包括-80℃低溫冰箱，4℃冰箱，振蕩器，通風櫥，載玻片，蓋玻片，孵育盒，電子天平，冷凍離心機，顯微鏡DM-2500，不銹鋼壓力鍋，耐高溫塑料病理切片架，不銹鋼病理切片架。

1.3試驗方法：于85℃烘烤結(jié)直腸癌組織芯片lh后，采用100%二甲苯脫蠟3次，15min/次，梯度酒精水化（100%無水乙醇5min x 2次、95%乙醇溶液5min x 2次、75%乙醇溶液5min x1次），置于清水中進行10min浸泡，再于蒸餾水中浸洗10min。將20ml的EDTA抗原修復液于不銹鋼壓力鍋中采用去離子水稀釋，至1000ml后加熱至沸騰，將組織芯片采用耐高溫塑料病理切片架固定后放置于其中進行5min抗原修復。自然冷卻至室溫，置于清水中進行10min浸泡與10min蒸餾水中浸洗。于室溫下降組織芯片室溫下于3%過氧化氫溶液中浸泡30min，然后在組織芯片表面上滴加0.3%牛血清白蛋白，并在37℃溫度下的孵育盒中進行30min孵育，去除表面液體后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次。組織芯片表面滴加一抗后置于孵育盒內(nèi)，并將其放置于4℃冰箱中進行14h左右的孵育。取出芯片后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次。加入辣根過氧化物酶（HRP）標記后的鼠/兔通用型二抗，置于溫度為37℃的孵育盒中進行30min孵育。去除表面液體后采用PBS液體進行3次浸洗，5min/次，滴加DAB顯色劑約10min后于清水中浸洗10min。將組織芯片浸潤于蘇木素染色液中0.5min后采用清水中浸洗5min，然后組織芯片經(jīng)梯度酒精脫水，風干后采用中性樹脂與蓋玻片封片。

1.3觀察指標：均經(jīng)兩位病理醫(yī)師采用雙盲法進行判定，陽性判定標準為組織中染色為棕黃色或棕褐色部位，且每個芯點中陽性面積>50%，反之為陰性。

1.4統(tǒng)計學分析：本次研究所得數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS20.O軟件予以統(tǒng)計學計算。計量指標以（%）形式展開，x檢驗;計數(shù)指標以（x±s）形式展開，t值檢驗。P<0.05表明數(shù)據(jù)比較具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1IL-33在組織中表達情況分析：在癌旁組織、結(jié)直腸腺癌與結(jié)直腸腺瘤中經(jīng)免疫組織化學檢驗表明其均有表達，且陽性信號主要定位于細胞漿與表面上皮。其中在癌旁組織中IL-33表達量最低，在結(jié)直腸腺瘤中則主要在表面上皮予以分布，與癌旁黏膜組織無顯著差異（P>0.05）。而IL-33在結(jié)直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結(jié)直腸腺瘤組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;且陽性信號主要集中于細胞漿以及表面上皮。見表1：

2.2比較41例結(jié)直腸癌病理指標與IL-33表達相關(guān)性：結(jié)直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>0.05）;與浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期具有顯著關(guān)系，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

結(jié)直腸癌作為臨床上較為常見的胃腸道惡性腫瘤，通常情況下，腺瘤轉(zhuǎn)變?yōu)樯l(fā)性結(jié)直腸癌中不斷地激活強烈的炎癥反應，進而便會引發(fā)一系列基因突變及相關(guān)細胞因子改變，最終促使結(jié)直腸腺瘤轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)直腸腺癌。IL-33屬于炎癥因子白細胞介素細胞因子家族中的促炎癥細胞因子之一，在本次研究中，癌旁組織中IL-33表達量最低，IL-33在結(jié)直腸腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁黏膜與結(jié)直腸腺瘤組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明在構(gòu)建結(jié)直腸癌細胞微環(huán)境中IL-33具有非常重要作用。除此之外，結(jié)直腸癌患者中性別與IL-33表達無顯著差異（P>0.05）;與浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期具有顯著關(guān)系，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這說明IL-33可能會促進疾病等級發(fā)展，對結(jié)直腸癌預后具有密切聯(lián)系。

綜上所述，IL-33表達與結(jié)直腸癌臨床分期、浸潤程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性程度因素具有顯著相關(guān)性，是促進疾病等級發(fā)展的重要因素。因此，在結(jié)直腸癌早期診斷中IL-33可作為標志物與治療靶點。