李美慧

摘要：高效液相色譜檢測方法具有很強的分辨率、靈敏度，且能夠同時測定幾種性質類似的食品成分。本文在闡述高效液相色譜法的基礎上，具體分析高效液相色譜檢測法在食品維生素C成分檢測中的應用。

關鍵詞：高效液相色譜;維生素C;檢測應用

高效液相色譜檢測法是在上世紀六十年代發(fā)展起來的一種同新型分析、分離技術，是在以往液相色譜法基礎上引入的氣相色譜法理論，之后在高效、高靈敏度檢測器的基礎上發(fā)展而成。在使用的過程中，高效液相色譜法具有很強的靈敏度、分辨率，且色譜柱在使用的過程中能夠被反復利用，因為被人們廣泛應用在生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、無機分析等領域。

一、材料和方法

儀器和試劑的選擇。實驗檢測儀器選擇Agilentll00高效液相色譜儀，輔助配合應用二極管陣列檢測儀器。實驗試劑包含甲醇、辛烷磺酸鈉和應用甲醇辛烷磺酸鈉配置成0. 1%水溶液;三氟乙酸;67抗環(huán)血酸。利用儀器設備準確稱量lOmg的抗壞血酸標準品，并按照每升O.lmol的比例溶解鹽酸，之后用高純度水將純水定容在100毫升左右[1]。

色譜條件的確定。實驗操作色譜柱型號為250mmx4.6mmx5μm;流動相是甲醇和0.1%比例的辛烷磺酸鈉溶液;檢測波長為230mm;樣本的流動速度是每分鐘1ml;樣品的進樣量是1OμL。在確定好色譜條件之后以濃度為基本橫坐標、峰面積數(shù)值為縱坐標繪制工作曲線，之后通過回歸計算得到回歸方程Y=496.5XC - 149.1，回歸系數(shù)是0.9996。

樣品檢測和結果計算。在實驗中，對于液體樣品不需要進行額外的處理，在應用濾膜過濾之后按照相應的色譜條件進行直接進樣處理。固體樣品則需要按照相關規(guī)定稱取一定數(shù)量的樣品，在樣品容器中加入蒸餾水，一直到樣品達到25mL，超聲波提取5分鐘。根據(jù)樣品的峰面積計算出樣品中維生素C的含量。

二、結果和討論

第一，色譜條件的選擇。首先，檢測波長的選擇。將配置完成的維生素C溶液放置在二極管陣列進行波長掃描，發(fā)現(xiàn)維生素C溶液在239nm位置上的時候會被最大限度吸收，為此將239nm作為實驗檢測波長。維生素C的紫外吸收圖譜和峰純度圖譜如圖1所示。其次，流動相選擇?？紤]到抗壞血酸在酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定，因而流動相的酸堿值確定為酸性，具體數(shù)值在3-4.5之間[2]。同時，應用辛烷磺酸鈉作為離子檢測試劑。第二，精密度試驗。通過精密度試驗操作發(fā)現(xiàn)，RSD的數(shù)值在0.56% -1.18%。第三，回收率試驗。應用加標回收的方式對試驗的精確度進行評價，之后選取其中的五份樣本進行色譜測定，測定結果如表1所示。第四，方法的線性范圍和檢出限。在色譜條件下制定標準的工作曲線，具體如圖2所示，根據(jù)工作曲線了解到實驗的線性范圍為0.3μg/ML - 1.6μg/ML。第五，實驗測定結果和熒光法測定結果比較如表2所示。

從以上的實踐操作情況來看，高效液相色譜法不僅能夠測定食品或者保健品中的維生素成分，而且還能夠在檢測分析的過程中采取定量和定性結合的方式同時分離和測定幾種維生素，從而幫助人們更好地了解食品及保健品中的成分，確保食品安全。但是從實際應用情況來看，對于不同食品和保健品，維生素C的樣品預處理和色譜分析條件不同，為此，在具體操作中需要相關人員結合試驗條件的不同來選擇適合的色譜分析方法，從而提升樣品測定成效。

參考文獻

[1]魯杰，楊大進，王竹天.固相萃取一高效液相色譜法測定保健食品中維生素B12的研究[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2004，16（4）：324-328.

[2]王愛月，張向兵，李發(fā)生.高效液相色譜法測定食品及保健品中維生素C含量的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006.16（10）：1175-1176.