趙科

摘要：目的研究免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)特定蛋白的抗干擾能力。方法將四中不同的干擾素游離膽紅素（FBil）、結(jié)合膽紅素（CBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH）以不同濃度分別與特定蛋白血漿混合，采用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法分別對(duì)所制備的混合標(biāo)本進(jìn)行監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)結(jié)果平均值與空白對(duì)照組相比較，計(jì)算出干擾率，對(duì)比兩種監(jiān)測(cè)方法的抗干擾能力。結(jié)果在特定蛋白的檢測(cè)中四中干擾物對(duì)免疫透射比濁法均未出現(xiàn)任何干擾現(xiàn)象。，而免疫散射比濁法在檢測(cè)高濃度的IgM時(shí)分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時(shí)干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度lgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000FTU干擾率分別為6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率分別為5.11%、5.12%;檢測(cè)低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時(shí)干擾率分別為7.58%、6.10%，則表示以上濃度時(shí)均出現(xiàn)干擾現(xiàn)象結(jié)論在檢測(cè)特定蛋白的檢驗(yàn)過程中，免疫透射比濁法對(duì)游離膽紅素（FBil）、結(jié)合膽紅素（CBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH）四中干擾素的抗干擾能力明顯優(yōu)于免疫散射比濁法。

關(guān)鍵詞：免疫透射比濁法免疫散射比濁法特定蛋白抗干擾能力

免疫比濁法是現(xiàn)如今醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)常用的檢測(cè)方法，其基本原理是抗原抗體動(dòng)態(tài)測(cè)定方法，當(dāng)抗原抗體在某些特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適的作用下，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)一定渾濁度，若抗體濃度固定，形成的復(fù)合物的量隨著樣品中的抗原含量增加而增加，濁度也隨之增加，通過測(cè)反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照即可計(jì)算出抗原含量。免疫比濁法主要包括免疫透射比濁法、免疫散射比濁法、免疫膠乳比濁法，不同的免疫比濁法在檢測(cè)結(jié)果、檢測(cè)方法、抗干擾能力方面具有一定的差異，在選擇是常常需結(jié)合所檢驗(yàn)的樣本性質(zhì)進(jìn)行。本研究通過使用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法對(duì)混入干擾素的人體特定蛋白的檢測(cè)，比較兩種在抗干擾能力方面的差異，進(jìn)一步指導(dǎo)臨床檢驗(yàn)工作中檢驗(yàn)方法的選擇，其具體報(bào)告如下。

1.一般資料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)資料

采用隨機(jī)抽樣法采集我院門診及住院患者血清樣本，血清樣本必須滿足無溶血、渾濁、黃疸、脂血。特定蛋白檢測(cè)主要包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、c反應(yīng)蛋白（cRP），3種特定蛋白各取高、低2個(gè)濃度，分別為IgG：8-12 g/L、>16 g/L;IgM：1.10-1.5 g/L、>2.0 g/L;CRP：4-10 mg/L、>100 mg/L。干擾物包括離膽紅素（FBil）、結(jié)合膽紅素（cBil）、血紅蛋白（Hb）、乳糜（CH），每種干擾物設(shè)置三個(gè)不同濃度，F(xiàn)Bil：1927、2571、3210umol/L;CBil：2 058、2671、3398umol/L;Hb：9.9、19.8、29.6umol/L;CH：8000、12000、14000 FTU。

1.2方法

1.2.1樣本配置

將對(duì)血清與各個(gè)濃度的每一種干擾素分別進(jìn)行混合，配置比例為1：7，配置成對(duì)照組，共12個(gè)小組，按此方法分別配置相同的兩份樣品;空白對(duì)照組選用蒸餾水作為空白干擾素，同樣按照1：7配比與血清樣本進(jìn)行混合，作為空白對(duì)照組，按此方法分別配置相同的兩份樣品。

1.2.2檢測(cè)方法

將配置好的實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組樣品均采用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法分別進(jìn)行檢測(cè)，所有操作均按照相應(yīng)檢驗(yàn)方法嚴(yán)格進(jìn)行。

1.2.3檢測(cè)儀器和試劑

免疫透射比濁法選用ROCHE Modular P全自動(dòng)生化分;免疫散射比濁法選用SIEMENSBN ProSpec特定蛋白測(cè)定儀。三種特定蛋白的檢測(cè)試劑均由多使用儀器提供的配套試劑盒。

1.3觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)組樣本反復(fù)才檢測(cè)3次，空白對(duì)照組反復(fù)測(cè)定3次，檢測(cè)結(jié)果均取多次檢測(cè)的平均值，將實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)平均值與相應(yīng)的空白對(duì)照組檢測(cè)平均值相比較，若差異大于或小于空白對(duì)照組的5%均認(rèn)為存在干擾，按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP7-A文件評(píng)價(jià)2種方法的抗干擾能力。統(tǒng)計(jì)不同濃度出現(xiàn)的干擾例數(shù)，進(jìn)行比較。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究采用SPSS18.0軟件包對(duì)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用表示，組問比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用率表示，x 2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)a=0.05，P

2.結(jié)果

經(jīng)過兩種不同檢測(cè)方法的測(cè)定，免疫透射比濁法在檢測(cè)高低濃度特定蛋白對(duì)四中干擾物均不敏感，未出現(xiàn)任何干擾現(xiàn)象。，而免疫散射比濁法在檢測(cè)高濃度的IgM時(shí)分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時(shí)干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度IgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU干擾率6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率為5.11%、5.12%;檢測(cè)低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時(shí)干擾率為7.58%、6.10%，則表示以上均出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，其余未列出的平均值與空白對(duì)照比較干擾率均<5%兩組將干擾能力差異存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）見表1。

3討論

免疫透射比濁法所采用的檢測(cè)儀器為全自動(dòng)生化分析儀，應(yīng)用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，利用比濁計(jì)測(cè)定光密度值，復(fù)合物的含量與光密度值成正比，同樣當(dāng)抗體量一定時(shí)，光密度值也與抗原含量成正比，與單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和火箭電泳等一般免疫化學(xué)定量方法比較具有敏感、快速簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。而免疫散射法是利用一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)和抗原抗體復(fù)合物顆粒大小和多少密切相關(guān)，其對(duì)某些如乳糜、嚴(yán)重溶血是的血紅蛋白等大顆粒物質(zhì)的干擾較為敏感，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與正常結(jié)果又較大的偏差，該法還可能受到多種物理因子的影響，如加入抗原或抗體的時(shí)間、光源的強(qiáng)弱和波長(zhǎng)、測(cè)量角度等。

本研究結(jié)果顯示，免疫透射比濁法在測(cè)定混入不同種類、不同濃度的干擾物的血清樣本時(shí)，結(jié)果與空白組對(duì)照差異并不大，干擾率均小于5%，而免疫散射比濁法在測(cè)定上述樣本時(shí)在乳糜和血紅蛋白的兩種不同濃度中出現(xiàn)了偏差，檢測(cè)高濃度的IgM時(shí)分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU時(shí)干擾率為6.12%、6.55%、5.23%，在低濃度IgM分別在乳糜（CH）濃度為8000、12000、14000 FTU干擾率6.01%、5.44%、8.97%;高濃度的IgM在Hb濃度為9.9、29.6umol/L干擾率為5.11%、5.12%;檢測(cè)低濃度Hb濃度為9.9、29.6umol/L時(shí)干擾率為7.58%、6.10%。不難看出，干擾素對(duì)免疫散射比濁法的干擾程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)免疫透射比濁法的干擾。

在臨床檢驗(yàn)工作中，樣本的檢測(cè)常常受到多種因子的干擾而導(dǎo)致結(jié)果的誤差，甚至出現(xiàn)醫(yī)療誤診、誤判，科學(xué)而高效的檢驗(yàn)方法是臨床診療工作的得力助手，而作為常用的檢驗(yàn)方法，免疫透射比濁法對(duì)的抗干擾能力明顯優(yōu)于免疫散射比濁法，值得臨床推廣。