劉丹凱 王強(qiáng) 魏賑權(quán) 劉小寶 鄭雪霞 錢凱 曾麗盈 許舒迪 林昌松

摘 要 目的：研究昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。方法：通過(guò)檢索治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（TTD）、藥物銀行（DrugBank）和DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)獲取類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)，并構(gòu)建靶點(diǎn)互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)。以口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18、半衰期（HL）≥4 h為指標(biāo)，借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP）和中藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMID）獲取昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分，并預(yù)測(cè)其靶點(diǎn)，構(gòu)建昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò);借助Systems Dock Web Site在線平臺(tái)、Genomics平臺(tái)篩選昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的共有靶點(diǎn)，然后利用Cytoscape 3.2.1軟件中Cluego插件分析共有靶點(diǎn)的京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）信號(hào)通路。結(jié)果：共檢索到類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)1 956個(gè)，其中關(guān)鍵靶點(diǎn)11個(gè)[包括白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）等];昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)共篩選出30種活性成分（包括木犀草素、芒柄花黃素、β-谷甾醇、雷公藤甲素等）和229個(gè)靶點(diǎn)。昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的共有靶點(diǎn)有37個(gè)[包括基質(zhì)金屬蛋白2（MMP2）、 TNF、VEGFA等];參與的KEGG信號(hào)通路有細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。結(jié)論：昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)可能通過(guò)MMP2、TNF、VEGFA等靶點(diǎn)作用于細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路等多條信號(hào)通路發(fā)揮治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用，本研究結(jié)果可為進(jìn)一步研究昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制提供參考。

關(guān)鍵詞 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;昆明山海棠-雞血藤藥對(duì);網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制;信號(hào)通路

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the mechanism of couplet medicine of Tripterygium hypoglaucum-Spatholobus suberectus in the treatment of rheumatoid arthritis （RA）. METHODS： The RA targets were retrieved and obtained by therapeutic target database （TTD）， DrugBank and DisGeNET databases， and the protein protein interaction （PPI） network was constructed to screen its key targets. Using oral bioavailability（OB）≥30%， drug like（DL）≥0.18 and drug half-life （HL） ≥4 h as index， active components were obtained from couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus by using TCM systematic pharmacological analysis platform （TCMSP） and TCM integrated database （TCMID）， and the targets were predicted. The active component-target network of couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus was constructed. Systems Dock Web Site online platform and Genomics platform were used to screen the active component and common targets of RA of couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus; KEGG signaling pathways of common targets were analyzed by using Cluego plug-in unit of Cytoscape 3.2.1 software. RESULTS： Totally 1 956 RA targets were retrieved， involving 11 key targets [such as IL-6， TNF， VEGFA]. The couplet medicine contained 30 active components （including luteolin， erythroxanthin， β-sitosterol and triptolide） and 229 targets. There were 37 common targets for couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus and RA （including MMP2， TNF， VEGFA）. KEGG signaling way involved cell apoptosis， IL-17 signaling pathway， Th17 cell differentiation pathway and TNF signaling pathway. CONCLUSIONS： The couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus may play a role in the treatment of RA by acting on cell apoptosis， IL-17 signaling pathway and other signaling pathways through MMP2， TNF， and VEGFA target. The results of this study can provide a reference for further study on the mechanism of the effects of couplet medicine of T. hypoglaucum-S. suberectus on RA.

KEYWORDS Rheumatoid arthritis; Couplet medicine of Tripterygium hypoglaucum-Spatholobus suberectus; Network pharmacology; Mechanism; Signaling pathways

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是以侵蝕性、對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的慢性、全身性自身免疫性疾病，基本病理改變是滑膜炎和血管炎，滑膜炎是關(guān)節(jié)表現(xiàn)的基礎(chǔ)，血管炎是關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的基礎(chǔ)，可逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失，其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確;目前RA不能根治，其常用治療藥物可分為非甾體抗炎藥、抗風(fēng)濕藥、糖皮質(zhì)激素、植物藥和生物制劑等五大類[1]。其中，以中藥為主的植物藥不僅來(lái)源廣泛、種類豐富，而且具有多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)以及整體調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，在治療RA方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[2-3]。

昆明山海棠為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、清熱解毒的作用[4]?，F(xiàn)代藥理研究表明，昆明山海棠具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤、抗病毒等作用[5]。雞血藤為豆科植物密花豆的干燥藤莖，具有活血補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)止痛、舒筋活絡(luò)之功效[4]。現(xiàn)代藥理研究表明，雞血藤具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、促進(jìn)造血、抗腫瘤、抗病毒等作用[6]。

我院風(fēng)濕病科常用院內(nèi)制劑昆藤通痹合劑（批準(zhǔn)文號(hào)：粵藥制字Z20071157，舊名為二藤通痹合劑，主要成分為昆明山海棠和雞血藤）治療RA，臨床療效明顯。本課題組前期在觀察162例RA患者服用二藤通痹合劑后，發(fā)現(xiàn)其能有效改善患者的的晨僵時(shí)間、休息痛和壓痛關(guān)節(jié)數(shù)等臨床癥狀[7]。其聯(lián)合正清風(fēng)痛寧緩釋片能有效改善活動(dòng)期RA患者關(guān)節(jié)疼痛腫脹的癥狀，增強(qiáng)抗炎鎮(zhèn)痛的作用[8]。由于中藥及其復(fù)方具有“多成分、多途徑、多靶點(diǎn)”的特點(diǎn)，療效通常取決于其中有效成分群的綜合作用。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于“疾病-基因-靶點(diǎn)-藥物”相互作用網(wǎng)絡(luò)，系統(tǒng)綜合評(píng)價(jià)藥物對(duì)疾病網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)，這與中藥及其方劑的多成分、多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的原理相一致[9]，故利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)有助于進(jìn)一步探討昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA的作用機(jī)制。

因此，本研究擬通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA的活性成分、作用靶點(diǎn)、作用通路等進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用及深入研究提供依據(jù)。

1 方法

1.1 RA靶點(diǎn)獲取及靶點(diǎn)蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

1.1.1 RA靶點(diǎn)獲取 以“Rheumatoid arthritis”為關(guān)鍵詞，通過(guò)檢索治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（TTD）數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為https：//db.idrblab.org/ttd/）、藥物銀行（DrugBank）數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為https：//www.drugbank.ca/）、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為http：//www.disgenet.org/）查詢RA相關(guān)靶點(diǎn)。由于靶點(diǎn)命名存在不規(guī)范及信息來(lái)源不同等現(xiàn)象，本研究使用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為https：//www.uniprot.org/）對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行校正，并篩除重復(fù)項(xiàng)。

1.1.2 RA靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將RA靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 平臺(tái)（網(wǎng)址為https：//string-db.org/）構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，將物種設(shè)置為“Homo sapiens”，其他參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置，并使用Cytoscape 3.2.1軟件（網(wǎng)址為http：//cytoscapeweb.cytoscape.org/）對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，利用Network Analyzer分析節(jié)點(diǎn)度值和介度中心性。其中，度值反映與節(jié)點(diǎn)直接相連的節(jié)點(diǎn)數(shù)目，度值高的節(jié)點(diǎn)可能在網(wǎng)絡(luò)中起到橋梁的作用;介度中心性是網(wǎng)絡(luò)中經(jīng)過(guò)某一節(jié)點(diǎn)的最短路徑數(shù)，介度中心性越大，該節(jié)點(diǎn)影響力越大[10]。本研究選取度值、介度中心性同時(shí)滿足排名前15的節(jié)點(diǎn)作為其關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.2 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

1.2.1 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分和靶點(diǎn)獲取 以“昆明山海棠”為關(guān)鍵詞，通過(guò)檢索中藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMID，網(wǎng)址為http：//183.129.215.33/tcmid/）獲取昆明山海棠的活性成分（由于TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到的成分較少，故本研究將所有成分都納入分析）;以“雞血藤”為關(guān)鍵詞，通過(guò)檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為http：//lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmsp.php） 獲取雞血藤的活性成分。根據(jù)藥動(dòng)學(xué)特性（ADME）參數(shù)，利用口服生物利用度（OB）與類藥性（DL）及半衰期（HL）進(jìn)行篩選，篩選標(biāo)準(zhǔn)是OB≥30%、DL≥0.18、HL≥4 h[11]。將獲得的活性成分通過(guò)DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)提取靶點(diǎn)，并在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)校正。為方便作圖，本研究將篩選出的成分以中藥名單詞首字母和兩個(gè)數(shù)字進(jìn)行組合編碼。

1.2.2 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò) 將昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分和靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1軟件構(gòu)建昆明山海棠-雞血藤活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，分析節(jié)點(diǎn)的度值和介度中心性，用于評(píng)價(jià)昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)中活性成分的重要程度，本研究選取兩者同時(shí)滿足排名前10的節(jié)點(diǎn)作為昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要成分。

1.3 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要成分-RA關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接

將昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)中的重要成分和RA關(guān)鍵靶點(diǎn)通過(guò)Systems Dock WebSite在線平臺(tái)（網(wǎng)址為http：//systemsdock.unit.oist.jp/iddp/home/index）進(jìn)行分子對(duì)接評(píng)估其結(jié)合活性，使用Docking Score評(píng)價(jià)中藥與靶點(diǎn)之間的結(jié)合活性，當(dāng)Docking Score值>4.25表示分子與靶標(biāo)具有一定的結(jié)合能力，>5.00表示結(jié)合能力較強(qiáng)，>7.00表示結(jié)合能力很強(qiáng)[12]。

1.4 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)與RA共有靶點(diǎn)篩選

將昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)與RA靶點(diǎn)導(dǎo)入Genomics平臺(tái)（網(wǎng)址為http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）進(jìn)行映射構(gòu)建韋恩圖，取三者交集得到昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)和RA的共有靶點(diǎn)。

1.5 共有靶點(diǎn)通路富集分析及昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將共有靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1軟件中的Clugo插件進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集（P<0.05），結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)篩選與RA相關(guān)的通路，并將與RA相關(guān)的通路、活性成分和靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1軟件構(gòu)建昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)- KEGG通路網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化處理，從而更直觀地反映昆明山海棠-雞血藤的活性成分、靶點(diǎn)與通路之間的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 RA靶點(diǎn)獲取與PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果

本研究共篩選到1 956個(gè)RA靶點(diǎn)。通過(guò)STRING 平臺(tái)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，并使用Cytoscape 3.2.1軟件進(jìn)行分析。PPI網(wǎng)絡(luò)包含1 807個(gè)節(jié)點(diǎn)，61 986條邊，平均度值68.61，平均介度中心性0.52（本網(wǎng)絡(luò)介度中心性數(shù)值較小，結(jié)果是取lg對(duì)數(shù)后的值，下同）。選取度值、介度中心性同時(shí)滿足排名前15的節(jié)點(diǎn)作為其關(guān)鍵靶點(diǎn)，包括白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF）、蘇氨酸激酶1（AKT1）、胰島素（INS）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、細(xì)胞腫瘤抗原p53（TP53）、血清白蛋白（ALB）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、絲裂原活化蛋白激酶3 （MAPK3）。RA的關(guān)鍵靶點(diǎn)見(jiàn)表1。

2.2 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)果

2.2.1 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分和靶點(diǎn)的獲取 通過(guò)TCMSP和TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)，昆明山海棠共納入10個(gè)成分;雞血藤共納入20個(gè)活性成分。將成分通過(guò)DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)校正并刪除重復(fù)項(xiàng)后，昆明山海棠納入93個(gè)靶點(diǎn)，雞血藤納入136個(gè)靶點(diǎn)。昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分見(jiàn)表2。

2.2.2 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分和靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1軟件構(gòu)建昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，詳見(jiàn)圖1。結(jié)果，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中共202個(gè)節(jié)點(diǎn)，503條邊，平均度值為4.91，平均介度中心性為0.01。其中，節(jié)點(diǎn)代表成分和靶點(diǎn)，邊代表節(jié)點(diǎn)之間的作用關(guān)系;度值越大，相應(yīng)節(jié)點(diǎn)越大。選取度值、介度中心性同時(shí)滿足排名前10的節(jié)點(diǎn)作為昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要活性成分，其重要活性成分有木犀草素、芒柄花黃素、β-谷甾醇、雷公藤甲素，詳見(jiàn)表3。

2.3 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要活性成分-RA關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接結(jié)果

將昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要活性成分-RA關(guān)鍵靶點(diǎn)通過(guò)Systems Dock WebSite在線平臺(tái)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果：昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)中的雷公藤甲素、木犀草素和β-谷甾醇與RA關(guān)鍵靶點(diǎn)具有較強(qiáng)的結(jié)合能力。昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的重要活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)與RA共有靶點(diǎn)的篩選結(jié)果

昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)與RA共有靶點(diǎn)的韋恩圖見(jiàn)圖2、共有靶點(diǎn)見(jiàn)表5。

2.5 共有靶點(diǎn)通路富集分析及昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)果

2.5.1 共有靶點(diǎn)通路富集結(jié)果 將37個(gè)共有靶點(diǎn)通過(guò)Cytoscape 3.2.1軟件中的Clugo插件進(jìn)行KEGG通路富集，結(jié)果顯示，與RA相關(guān)的信號(hào)通路有細(xì)胞凋亡（Apoptosis）、IL-17信號(hào)通路（IL-17 signaling pathway）、Th17細(xì)胞分化（Th17 cell differentiation）、TNF信號(hào)通路（TNF signaling pathway）、p53信號(hào)通路（p53 signaling pathway）、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)通路（Rheumatoid arthritis related pathway）、核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）信號(hào)通路（NF-kappa B signaling pathway）、T細(xì)胞受體信號(hào)通路（T cell receptor signaling pathway）、Th1和Th2細(xì)胞分化（Th1 and Th2 cell differentiation）、TGF-β信號(hào)通路（TGF-beta signaling pathway）。昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA的KEGG信號(hào)通路見(jiàn)圖3。

2.5.2 昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建結(jié)果 為了直觀地反映昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分、靶點(diǎn)與KEGG通路之間的關(guān)系，本研究將相關(guān)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.2.1軟件構(gòu)建昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分-靶點(diǎn)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)，詳見(jiàn)圖4。

由圖4可知，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)中分別有23、7、12和23種活性成分作用于IL-17信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡通路、Th17細(xì)胞分化通路和TNF信號(hào)通路（即P值最小和靶點(diǎn)數(shù)量最多的前4條通路）。其中作用于IL-17信號(hào)通路和TNF信號(hào)通路的活性成分最多且成分一致。表明，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)的活性成分很可能通過(guò)作用于多條信號(hào)通路尤其是IL-17信號(hào)通路和TNF信號(hào)通路發(fā)揮治療RA的作用。

3 討論

根據(jù)分子對(duì)接結(jié)果可知，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)發(fā)揮作用的主要成分可能為雷公藤甲素、木犀草素和β-谷甾醇。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素對(duì)RA患者體外培養(yǎng)的成纖維滑膜細(xì)胞具有一定的增殖抑制并能誘導(dǎo)其凋亡的作用[13];木犀草素具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤和免疫雙向調(diào)節(jié)等作用[14];β-谷甾醇是植物甾醇的重要組成成分，具有抗炎、調(diào)節(jié)人體甾體激素、抗氧化、抗腫瘤等作用[15]。因此，雷公藤甲素、木犀草素和β-谷甾醇很可能是該藥對(duì)治療RA的有效成分。

根據(jù)RA關(guān)鍵靶點(diǎn)和共有靶點(diǎn)分析，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)可能為TNF、TP53、VEGFA、STAT3。相關(guān)研究表明，TNF-α通過(guò)抑制骨膠原合成、刺激成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素和膠原酶、刺激軟骨細(xì)胞分泌金屬蛋白酶、誘導(dǎo)外周血單核細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞等途徑，促進(jìn)軟骨破壞，加重炎性反應(yīng)[16]。另有研究發(fā)現(xiàn)，RA滑膜襯里層VEGF蛋白表達(dá)與血管形態(tài)、彎曲血管走行方式及血管密度均呈正相關(guān)[17]。STAT3可誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞RANKL表達(dá)的能力，加劇RA骨侵蝕，而沉默STAT3能明顯抑制成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖[18-19]。TP53在腫瘤的發(fā)生、增殖與轉(zhuǎn)移有一定的作用[20]。故昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)很可能通過(guò)調(diào)節(jié)TNF、VEGFA和STAT3靶點(diǎn)治療RA。

KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)可能通過(guò)作用于細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化和TNF信號(hào)通路等通路發(fā)揮治療作用。相關(guān)研究表明，IL-17信號(hào)通路可通過(guò)誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞、軟骨和骨細(xì)胞分泌的促炎癥細(xì)胞因子，促進(jìn)成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等分泌IL-6、IL-8[21-22]。Th17細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)并在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要的作用，IL-17為Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子[23]。RA患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡減少，CD4+T淋巴細(xì)胞作為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的重要成分，可參與免疫應(yīng)答過(guò)程中的各個(gè)階段，是RA浸潤(rùn)的炎細(xì)胞[24]。因此，細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化和TNF信號(hào)通路等通路很可能是昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA的潛在信號(hào)通路。

綜上所述，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)活性成分、作用靶點(diǎn)、作用通路進(jìn)一步探討，發(fā)現(xiàn)昆明山海棠和雞血藤藥對(duì)中的雷公藤甲素、木犀草素和β-谷甾醇等成分很可能通過(guò)TNF、VEGFA和STAT3等靶點(diǎn)作用于細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化和TNF信號(hào)通路等多條信號(hào)通路發(fā)揮作用。因此，昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA的藥理學(xué)機(jī)制很可能是通過(guò)多組分、多靶點(diǎn)、多通路實(shí)現(xiàn)的。但由于數(shù)據(jù)庫(kù)中納入的信息可能來(lái)源于不同的試驗(yàn)條件，偏向于對(duì)熱點(diǎn)領(lǐng)域的研究等局限性，且中藥在煎煮過(guò)程中可能生成或破壞某些成分，故納入分析的成分不一定能反映其實(shí)際作用于人體的成分。因此，本研究可為下一步研究提供參考，但昆明山海棠-雞血藤藥對(duì)治療RA復(fù)雜的機(jī)制還有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

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（收稿日期：2019-04-20 修回日期：2019-07-10）

（編輯：唐曉蓮）