楊婉珠 劉育辰 楊虹 劉剛 王迪

摘 要 目的：研究黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心功能的影響，并對(duì)其可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步考察。方法：采用斯氏蛙心插管法制備離體蛙心標(biāo)本，分別用任氏液（空白對(duì)照）和質(zhì)量濃度為1.74、3.48 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位進(jìn)行灌流，用BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄離體心臟的心率和心肌收縮力變化，以考察黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心功能的影響。先分別用10 mg/L的阿托品、異丙腎上腺素20 μL或1 μL低鈣（每1 000 mL純水中含CaCl2 0.06 g）、高鈣（每1 000 mL純水中含CaCl2 0.24 g）任氏液進(jìn)行灌流，然后再分別加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位，用BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄離體心臟的心肌收縮力變化;并取用任氏液（空白對(duì)照）和質(zhì)量濃度為1.74、3.48 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位灌流后的心肌組織，測(cè)定其中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和乙酰膽堿酯酶（AChE）活性，以考察黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位影響心臟功能的可能作用機(jī)制。結(jié)果：加入質(zhì)量濃度為1.74、3.48 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位后，蛙心的心肌平均收縮力較空白對(duì)照明顯降低（P<0.001），但心率的變化不明顯（P>0.05）。隨著細(xì)胞外Ca2+濃度的逐漸增大，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心收縮的抑制作用也逐漸增大;加入阿托品、異丙腎上腺素后，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心收縮的抑制作用有所降低;經(jīng)過(guò)1.74、3.48 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位灌流后的蛙心心肌組織中Na+-K+-ATP酶活性較空白對(duì)照改變不明顯（P>0.05），但Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明顯升高（P<0.05）、AChE活性明顯降低（P<0.05）。結(jié)論：黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位可抑制離體蛙心的收縮活動(dòng)，具有一定的負(fù)性肌力作用;其作用機(jī)制可能與提高心肌組織中Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，抑制AChE活性，同時(shí)阻斷細(xì)胞膜上Ca2+通道，興奮M受體和阻斷β受體有關(guān)。

關(guān)鍵詞 苗藥;黑骨藤醇提物;乙酸乙酯部位;離體蛙心;心肌收縮力

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the effects of ethyl acetate part form the ethanol extract of Periploca forrestii on cardiac function of isolated frog heart， and to primarily investigate its potential mechanism. METHODS： The isolated frog heart samples were prepared by using the intube method of steinmann. The Ren’s solution （blank control）， 1.70 mg/mL and 3.48 mg/mL ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii were used to perfuse the sample. The BL-420 biological function experimental system was used to record the changes in heart rate and myocardial contractility. The effects of ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii on cardiac function of isolated frog heart were investigated. After perfused with 10 mg/L atropine， 20 μL isoproterenol， 1 μL low calcium （per 1 000 mL pure water contain 0.06 g CaCl2）， high calcium Ren’s solution （per 1 000 mL pure water contain 0.24 g CaCl2）， adding 1.74 mg/mL ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii， the changes of myocardial contractility in isolated hearts were recorded by BL-420 biological function experimental system. Myocardial tissue was collected after perfused with Ren’s solution （blank control） and ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii with 1.74 and 3.48? ?mg/mL. The activity of Na+-K+-ATPase， Ca2+-Mg2+-ATPase and AChE were detected to investigate the potential mechanism of the effects of ethyl acetate extract from ethanol extract of P. forrestii on cardiac function. RESULTS： Compared with blank control， mean myocardial contractility was significantly decreased （P<0.001） after adding 1.74， 3.48 mg/mL ethyl acetate part form ethanol extract of P. forrestii， but had no significant on heart rate （P>0.05）. With the increase of extracellular Ca2+ concentration， the inhibitory effect of ethyl acetate part from ethanol extract of P. forrestii on isolated frog heart contraction also increased gradually. After adding atropine and isoproterenol， the inhibitory effect of the ethyl acetate part form ethanol extract of P. forrestii on isolated frog heart contraction decreased to some certain. The activity of Na+-K+-ATPase in cardiac tissue was not significantly changed （P>0.05）， the activity of Ca2+-Mg2+-ATPase was significantly increased （P<0.05）， and the activity of AChE was significantly decreased （P<0.05） after perfused with 1.74， 3.48 mg/mL ethyl acetate part form ethanol extract of P. forrestii. CONCLUSIONS： The ethyl acetate part from the ethanol extract of P. forrestii can inhibit the contractile activity of the isolated frog heart and has a certain negative inotropic effect. The mechanism may be related to the increase of Ca2+-Mg2+-ATPase activity， inhibition of AChE activity， blocking of calcium channel in the cell membrane， the activation of M receptor and blocking of β receptor.

KEYWORDS Miao medicine; Ethanol extract of P. forrestii; Ethyl acetate part; Isolated frog heart; Myocardial contractility

黑骨藤（Periploca forrestii Schltr.）為蘿藦科植物黑龍骨的干燥根或全株[1]，又名黑龍骨、滇杠柳等，性熱，味苦，具有活血、通經(jīng)、祛風(fēng)、強(qiáng)心、解毒等作用，主治肢體麻木疼痛、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)等癥，苗族民間廣泛將其用于治療閉合性軟組織損傷、風(fēng)濕與類風(fēng)濕等疾病[2]。黑骨藤中主要含有強(qiáng)心苷類、C21甾類、多糖類、黃酮類和三萜皂苷類等成分[3-7]。已有研究表明，黑骨藤有抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)心以及抗腫瘤等活性[8-13]。目前，黑骨藤對(duì)心臟活性的研究報(bào)道極少。本研究擬通過(guò)離體蛙心心臟灌流實(shí)驗(yàn)，初步探討黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心率和心肌收縮力的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，以期為苗藥黑骨藤在治療心血管系統(tǒng)疾病中發(fā)揮新作用奠定基礎(chǔ)，也為黑骨藤的進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

蛙類通用實(shí)驗(yàn)器械、肌張力換能器、BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（四川成都泰盟科技有限公司）;FA2204B電子天平（上海天美天平儀器有限公司）;SB-4200DTD超聲波清洗儀（寧波新怡超聲設(shè)備有限公司）;N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛(ài)朗儀器有限公司）;HH-S2恒溫水浴鍋（河南金博儀器制造有限公司）;L600臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）;DNM-9606 酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

黑骨藤藥材于2018年3月購(gòu)自貴州省貴陽(yáng)市南明區(qū)花果園藥材市場(chǎng)，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為蘿藦科杠柳屬植物黑骨藤（P. forrestii Schltr.）的干燥根，藥材樣品保存于貴州中醫(yī)藥大學(xué)植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室;鹽酸異丙腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：41170303，規(guī)格：2 mL ∶ 1 mg）;硫酸阿托品注射液（河南潤(rùn)弘制藥股份有限公司，批號(hào)：161001001，規(guī)格：1? mL ∶ 0.5 mg）;乙酰膽堿酯酶（AChE）測(cè)試盒（批號(hào)：20190228）、腺苷三磷酸（ATP）酶測(cè)試盒（批號(hào)：20190723）、總蛋白定量試劑盒（批號(hào)：20190309）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所;任氏液、低鈣任氏液（1 000 mL純水中含CaCl2 0.06 g，其余成分同任氏液）、高鈣任氏液（1 000 mL純水中含CaCl2 0.24 g，其余成分同任氏液）由貴州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理實(shí)驗(yàn)室按照標(biāo)準(zhǔn)配方自制;實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

牛蛙84只，♀♂兼?zhèn)?，體質(zhì)量300～400 g，精神狀態(tài)良好，購(gòu)自貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物所。

2 方法

2.1 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位的制備

稱取黑骨藤藥材粗粉6 kg，按料液比1 ∶ 8（kg/L）加入70%乙醇加熱回流提取3次，每次提取時(shí)間為3 h，紗布趁熱過(guò)濾，合并3次過(guò)濾液，在60 ℃、-0.08 MPa下減壓濃縮回收溶劑，得浸膏。將浸膏用溫水適量混懸，將混懸液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，合并相應(yīng)萃取液，減壓濃縮回收溶劑，然后于70 ℃水浴上蒸干，分別得石油醚（56 g）、氯仿（21.136 g）、乙酸乙酯（85.348 g）、正丁醇（249.068 g）和水（113 g）共 5 個(gè)萃取部位浸膏。取乙酸乙酯部位浸膏適量，加入任氏液，在功率為400 W、頻率為40 kHz下超聲15 min溶解，制備成所需質(zhì)量濃度，溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.2 動(dòng)物分組

將84只牛蛙隨機(jī)分為空白對(duì)照組、黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組、黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位高劑量組、阿托品+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組、異丙腎上腺素+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組、低鈣任氏液+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組、高鈣任氏液+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組7個(gè)組，每組12只。其中，阿托品的給藥濃度為10 mg/L，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低、高劑量組的給藥濃度分別為1.74、3.48 mg/mL（以浸膏量計(jì)，折合生藥量分別為0.12、0.24 g）。

2.3 離體蛙心標(biāo)本的制備

采用斯式蛙心插管法[14]。取牛蛙，破壞腦和脊髓，背位固定于蛙板上暴露心臟，在左、右主動(dòng)脈下穿一線，將心臟翻至頭端，在背面結(jié)扎前后腔靜脈，在左主動(dòng)脈下穿一線，距動(dòng)脈圓錐2～3 mm處結(jié)扎，再?gòu)淖笥抑鲃?dòng)脈下方穿一線打活結(jié)留作固定插管用。持眼科剪在動(dòng)脈圓錐前端處向心臟剪一斜口，將盛有任氏液的蛙心插管由此口插入心室腔內(nèi)，連同近旁血管一起結(jié)扎固定，將心臟離體，任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，至插管內(nèi)灌流液完全澄清無(wú)色，然后保持插管內(nèi)的灌流液為1 mL，劃線作標(biāo)記。蛙心經(jīng)蛙心夾和絲線與張力換能器相連，絲線保持垂直。用BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄心肌收縮曲線。

2.4 給藥

向制備好的各組蛙心插管內(nèi)均先加入1 mL任氏液，蛙心自主活動(dòng)，待心肌收縮曲線穩(wěn)定后，描記收縮曲線，作為各組給藥前數(shù)據(jù)。然后，空白對(duì)照組加入100? ?μL任氏液，描記5 min收縮曲線，作為給藥后數(shù)據(jù);黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低、高劑量組分別加入1.74? ? mg/mL或3.48 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位100? ?μL，描記5 min收縮曲線，作為給藥后數(shù)據(jù);阿托品/異丙腎上腺素+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組先加入10 mg/L的阿托品或異丙腎上腺素20 μL，描記5 min收縮曲線，再加入1.74 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位100 μL，描記5 min收縮曲線，然后加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位100 μL，描記5 min收縮曲線，作為給藥后數(shù)據(jù)。每次加藥前取出等量灌流液，以保證心室外容積固定為1 mL。

2.5 指標(biāo)檢測(cè)

2.5.1 心率、心肌平均收縮力 應(yīng)用BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄離體蛙心的心肌收縮曲線，統(tǒng)計(jì)每組離體蛙心給藥前后的心率、心肌平均收縮力變化，并計(jì)算心肌平均收縮力抑制率[心肌平均收縮力抑制率（%）=（給藥前心肌平均收縮力-給藥后心肌平均收縮力）/給藥前心肌平均收縮力×100%]。

2.5.2 心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、AChE活性檢測(cè) 取空白對(duì)照組、黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低、高劑量組蛙的心肌組織，液氮保存。根據(jù)測(cè)試盒說(shuō)明書操作，測(cè)定組織中蛋白濃度，并檢測(cè)Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和AChE活性。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。結(jié)果用x±s表示，組間酶活性差異采用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)，組內(nèi)給藥前后的心率、心肌收縮力差異變化采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心率、心肌平均收縮力的影響

在任氏液灌流下，往制備好的蛙心套管中加入任氏液后，離體蛙心心率和心肌平均收縮力無(wú)明顯變化（P>0.05）。加入1.74 mg/mL或3.48 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位后，離體蛙心心率變化不大或略減慢，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;但心肌收縮曲線呈現(xiàn)典型的下降趨勢(shì)，心肌平均收縮力明顯降低（P<0.001），1.74、3.48 mg/mL黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心的心肌平均收縮力抑制率分別達(dá)到47.89%和54.42%。黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位灌流蛙心的心肌收縮曲線見(jiàn)圖1～圖3，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心率和心肌平均收縮力的影響結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

3.2 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位在阿托品、異丙腎上腺素作用下對(duì)離體蛙心心肌平均收縮力的影響

在任氏液灌流下，加入阿托品后，離體蛙心的心肌平均收縮力無(wú)明顯變化（P>0.05）;之后再加入1.74? ? mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位，離體蛙心的心肌平均收縮力明顯降低（P<0.001），其對(duì)心肌平均收縮力的抑制率為35.60%。在任氏液灌流下，加入異丙腎上腺素后，離體蛙心的心肌平均收縮力顯著升高（P<0.05）;之后再加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位，離體蛙心的心肌平均收縮力又顯著降低（P<0.01），其對(duì)心肌平均收縮力的抑制率為35.72%。而僅加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位，其對(duì)離體蛙心心肌平均收縮力的抑制率為47.89%。通過(guò)以上三組對(duì)比發(fā)現(xiàn)，加入阿托品或異丙腎上腺素后，再加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心肌平均收縮力的抑制率，與僅加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位相比均明顯降低。低劑量黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位在阿托品/異丙腎上腺素作用下灌流蛙心的心肌收縮曲線見(jiàn)圖4、圖5，心肌平均收縮力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

3.3 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位在低鈣、高鈣任氏液狀態(tài)下對(duì)離體蛙心心肌平均收縮力的影響

在正常、低鈣、高鈣任氏液灌流下，分別往制備好的蛙心套管中加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位后，離體蛙心的心肌平均收縮力與給藥前比較均明顯降低（P<0.001），且隨著細(xì)胞外鈣離子濃度的增大，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心肌平均收縮力的抑制率逐漸升高。低劑量黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位在低鈣、高鈣任氏液狀態(tài)下灌流蛙心的心肌收縮曲線見(jiàn)圖6、圖7，心肌收縮力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

3.4 黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心肌組織中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性、AChE活性的影響

加藥后，與空白對(duì)照組比較，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低、高劑量組離體蛙心的心肌組織中Na+-K+-ATP酶活性均沒(méi)有明顯變化（P>0.05），但Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均明顯升高（P<0.05或P<0.01），AChE活性均明顯降低（P<0.05），黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位對(duì)離體蛙心心肌組織中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和AChE活性的影響結(jié)果見(jiàn)表5。

4 討論

在本研究中，蛙心心肌收縮前后的負(fù)荷保持在相對(duì)恒定的水平，排除了人為因素的影響。據(jù)空白對(duì)照組結(jié)果可知，任氏液對(duì)蛙心的心率和心肌收縮力影響不顯著，這排除了溶劑對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)黑骨藤乙酸乙酯部位灌流質(zhì)量濃度達(dá)到1.74 mg/mL時(shí)，開始抑制蛙心心肌收縮力，故本研究以1.74 mg/mL為低劑量，其2倍量3.48 mg/mL為高劑量。

在心肌細(xì)胞膜上，M受體興奮或β受體被阻斷，都可以使心臟心肌收縮力減弱[15]。本研究結(jié)果顯示，阿托品+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組和異丙腎上腺素+黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組與黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位低劑量組相比，離體蛙心心肌平均收縮力的抑制率均明顯下降。而阿托品為M受體阻斷藥，異丙腎上腺素為β受體激動(dòng)藥，提示加入黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位后能拮抗阿托品阻斷心臟M受體以及異丙腎上腺素激動(dòng)心臟β受體，這初步說(shuō)明黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位可以興奮M受體、阻斷β受體，從而起到降低心肌收縮力的作用。

Ca2+是心臟活動(dòng)不可或缺的離子，在心肌的興奮-收縮偶聯(lián)過(guò)程中扮演著極其重要的角色。由于心肌細(xì)胞的肌漿網(wǎng)不發(fā)達(dá)，儲(chǔ)Ca2+能力差，易受細(xì)胞外離子濃度的影響，所以，細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流的量對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度影響很大[15]。本研究用正常、低鈣、高鈣3種任氏液進(jìn)行灌流，發(fā)現(xiàn)隨著任氏液中Ca2+濃度的增加，心肌平均收縮力逐漸升高，且心肌平均收縮力的抑制率隨著任氏液中Ca2+濃度的增加而增大;但在加入1.74 mg/mL的黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位后，心肌平均收縮力又開始降低（P<0.001）。通過(guò)3種任氏液灌流結(jié)果的對(duì)比，說(shuō)明黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位有明顯的降低心肌收縮力的作用，其作用機(jī)制可能與阻斷心肌細(xì)胞膜上的Ca2+通道，抑制Ca2+內(nèi)流，從而減少細(xì)胞膜內(nèi)Ca2+濃度有關(guān)。

Ca2+-Mg2+-ATP酶是細(xì)胞膜上的Ca2+泵，其可以水解ATP，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+泵到細(xì)胞外，以維持細(xì)胞內(nèi)相對(duì)較低的Ca2+濃度，這是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制之一，也是細(xì)胞功能得以正常發(fā)揮的基礎(chǔ)[16]。本研究結(jié)果表明，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位作用于離體蛙心后，心肌組織中Ca2+-Mg2+-ATP酶活性升高，且在本研究質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，給藥的質(zhì)量濃度越高，Ca2+-Mg2+-ATP酶活性越高。Ca2+-Mg2+-ATP酶活性升高后會(huì)引起Ca2+泵功能增強(qiáng)，水解ATP能力增強(qiáng)，致使細(xì)胞內(nèi)Ca2+外排增多，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度下降，而使心肌收縮力減弱。

乙酰膽堿是膽堿能神經(jīng)末梢釋放的一種神經(jīng)介質(zhì)，AChE是乙酰膽堿代謝過(guò)程中的分解酶，其活性高低可以反映藥物對(duì)膽堿能神經(jīng)功能的改善作用的強(qiáng)弱[17]。當(dāng)神經(jīng)末梢受刺激引起興奮時(shí)，釋放乙酰膽堿，與膽堿能受體結(jié)合，發(fā)揮神經(jīng)-肌肉的興奮傳遞作用。隨后，乙酰膽堿立即被AChE水解而失去作用。在這個(gè)過(guò)程中，如果AChE的活性受到抑制，就會(huì)發(fā)生乙酰膽堿過(guò)剩而聚集，從而引起膽堿能神經(jīng)過(guò)度興奮而抑制心臟活動(dòng)。本研究結(jié)果顯示，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位作用于離體蛙心后，心肌組織中AChE活性明顯降低（P<0.05），說(shuō)明黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位可抑制AChE活性，致使膽堿能神經(jīng)興奮而抑制心臟活動(dòng)，降低心肌收縮力。

綜上所述，黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位達(dá)到一定濃度后能降低離體蛙心心肌收縮力，具有一定的負(fù)性肌力作用。其作用機(jī)制一方面可能與升高Ca2+-Mg2+- ATP酶活性，同時(shí)抑制Ca2+內(nèi)流，從而減少細(xì)胞膜內(nèi)Ca2+濃度有關(guān);另一方面，可能與黑骨藤醇提物乙酸乙酯部位有抑制AChE活性，初步興奮M受體，阻斷β受體的作用有關(guān)。但由于黑骨藤中化學(xué)成分復(fù)雜多樣，且本研究仍處于離體實(shí)驗(yàn)研究階段，其具體的作用機(jī)制需進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或?qū)诠翘俅继嵛镆宜嵋阴ゲ课贿M(jìn)行純化后進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2019-02-26 修回日期：2019-07-15）

（編輯：林 靜）