陳濤，杜維

（湖南省常德市第一人民醫(yī)院 1.檢驗科；2.病理科，湖南 常德 415000）

流行病學研究表明，我國部分地區(qū)2010年至2017年非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的發(fā)病率可達284～583/1 萬人左右［1］。臨床上NSCLC 的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊邿o瘤生存時間和中位生存時間的下降，增加了患者短期內(nèi)的病死率［2-3］。

在探討NSCLC 的生物學進展機制的過程中，可以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關調(diào)控蛋白的改變，能夠通過影響到癌細胞的凋亡、分化和增殖過程，進而參與NSCLC 的病情進展過程。熱休克蛋白90α（heat shock protein-90α, HSP90α）的表達上升，能夠通過影響癌細胞的核轉(zhuǎn)錄水平，提高了癌細胞的浸潤和黏附能力［4］；凋亡促進因子Bax（Bcl-2 associated X） 與凋亡抑制因子Bcl-2（B cell lymphoma-2, Bcl-2）相關X 蛋白的表達，能夠通過激活癌細胞內(nèi)鈣離子相關信號通路，進而導致細胞程序性凋亡比例的上升，促進了腫瘤病灶的萎縮和腫瘤細胞的消退［5］；凋亡抑制因子Bcl-2 的B 淋巴細胞瘤-2 基因的表達，能夠通過影響到阻斷癌細胞內(nèi)第二信使的活性，提高癌細胞轉(zhuǎn)錄上游啟動子的活性，進而促進肺泡上皮細胞的持續(xù)性增殖，抑制肺泡上皮細胞的凋亡［6］。部分研究者探討了Bax、Bcl-2 的表達與NSCLC 的關系，認為Bax、Bcl-2 的表達與NSCLC 的病情進展密切相關［7］，但缺乏對于HSP90α 的表達與NSCLC 的臨床病理特征的關系研究。為了揭示HSP90α、Bax、Bcl-2 的表達與NSCLC 的病情關系，從而為臨床上NSCLC 患者的診療分析提供理論方面的參考，本次研究選取2012年1月至2017年12月本院保存的NSCLC 組織110 例，探討了HSP90α、Bax 和Bcl-2 的表達與肺癌的病情關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月至2017年12月本院保存的NSCLC 組織110 例（NSCLC 組），納入標準：①均經(jīng)病理組織學確診；②手術前未行放化療等治療；③臨床病理資料保存完整。排除標準：①臨床資料欠缺；②合并有其他惡性腫瘤者。同時選取手術切除的肺良性病變組織100 例作為對照組（其中肺大泡42 例，炎性假瘤33 例，支氣管擴張25 例）。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會審批，納入研究患者及其家屬都已知情同意。NSCLC 組和對照組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 NSCLC 組和對照組一般資料比較（±s）

表1 NSCLC 組和對照組一般資料比較（±s）

組別NSCLC組對照組t/χ2值P值例數(shù)110 100男/女/例65/45 60/40 0.018 0.893年齡/歲59.42±4.11 60.10±5.20-1.056 0.292體重指數(shù)/(kg/m2)22.43±3.21 22.79±3.05-0.831 0.407

1.2 實驗方法

采用石蠟進行連續(xù)性切片，脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3～5 min，8%的蛋白粉封閉液（商品名：BSA購自南京博奧生物科技公司），封閉2 h，倒去封閉液后加入一抗（兔來源濃度1∶1 000～1 500），4℃冰箱過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3～5 min，加入二抗（鼠來源1∶400～500），室溫孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3～5 min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標記物，室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，每日3～5 min，滴加顯色劑（DAB 購自南京博奧生物科技公司），復染，脫水，封片。

1.3 結(jié)果判斷

HSP90α、Bax、Bcl-2 蛋白定位于胞漿，呈黃色顆粒狀；隨機選取5 個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100 個細胞，總計500 個細胞，采用半定量積分法，對染色強度和陽性細胞比例進行評分。染色強度：無著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞比例：＜10%為1 分，10%～25%為2 分，26%～50%為3 分，≥51%為4 分。最終得分為染色強度和陽性細胞比例得分之積，分數(shù)≥4 分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學方法

統(tǒng)計分析采用SPSS 19.0 軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關性采用Spearman秩相關分析。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 組和對照組HSP90α、Bax 和Bcl-2 表達比較

NSCLC 組HSP90α 和Bcl-2 蛋白陽性表達率明顯高于對照組（P＜0.05），而Bax 蛋白陽性表達率明顯低于對照組（P＜0.05）。見表2 和圖1。

2.2 HSP90α、Bax 和Bcl-2 表達與NSCLC 患者臨床病理關系

III 期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HSP90α 蛋白陽性表達率明顯高于I～II 期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）；腫瘤直徑＞3 cm 患者Bcl-2 蛋白陽性表達率明顯高于腫瘤直徑≤3 cm 患者（P＜0.05）；中低分化患者Bax 蛋白陽性表達率明顯低于高分化患者（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組HSP90α、Bax 和Bcl-2 蛋白陽性表達率比較 例（%）

圖1 免疫組化（×400）

表3 HSP90α、Bax 和Bcl-2 表達與NSCLC 患者臨床病理關系 例（%）

續(xù)表3

2.3 HSP90α、Bax和Bcl-2表達相關性

NSCLC 組織HSP90α 和Bcl-2 蛋白表達呈正相關（rs=0.626,P＜0.05）。見表4。Bax 與HSP90α 和Bcl-2 表達呈負相關（rs=-0.609 和-0.594,P ＜0.05）。見表5。

表4 NSCLC 組織HSP90α 和Bcl-2 蛋白表達的相關性

表5 NSCLC 組織Bax 與HSP90α 和Bcl-2 蛋白表達的相關性

3 討論

環(huán)境污染、長期吸煙或者家族性的遺傳易感基因的攜帶，均能夠促進NSCLC 的發(fā)生，特別是在合并有長期吸煙的男性群體中，NSCLC 的發(fā)生風險更高，遠期的臨床轉(zhuǎn)歸更差［8］。長期的隨訪觀察發(fā)現(xiàn)，NSCLC 綜合性治療措施治療后的5年生存率不足40%，遠期的復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率可明顯提高［9-10］。免疫靶向性治療能夠在NSCLC 的輔助治療過程中發(fā)揮重要的作用，而本次研究對于NSCLC 病灶組織中HSP90α、Bax 和Bcl-2 的探討，不僅能夠為NSCLC 患者的病情評估提供參考，同時還能夠為NSCLC 患者的免疫靶向性治療提供可能的作用靶點。

HSP90α 是熱休克家族相關成員，其能夠通過誘導癌細胞的代謝障礙，促進癌細胞核脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）的異常裂變，進而導致惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。HSP90α 能夠通過其對于糖蛋白末端的磷酸化修飾作用，導致癌細胞內(nèi)的G1/S 期比例的異常，提高癌細胞快速跨越G0 期的能力，促進癌細胞的持續(xù)性DNA 分裂［11］?；A方面的研究還認為，HSP90α 的上升能夠?qū)е掳┘毎じ胶娃D(zhuǎn)移能力的上升，增加了腫瘤細胞的擴散風險［12］；Bax 是腫瘤凋亡相關因子，其能夠通過影響到Bcl-2/Bax 比值，進而影響癌細胞的增殖和凋亡平衡，提高癌細胞的凋亡比例，增加癌細胞的壞死吸收的速度［13］；Bcl-2 是癌細胞凋亡負性調(diào)控因子，其能夠通過形成癌細胞內(nèi)的磷酸二聚體，進而提高癌細胞的DNA 擴增速度，降低癌細胞的凋亡速度。部分研究者探討了Bax 和Bcl-2 的表達與肺癌的關系，認為二者的表達上升能夠促進肺癌患者臨床分期的進展，加劇肺癌患者臨床預后的惡化［7］，但缺乏對于HSP90α 與Bax或者Bcl-2 的相關關系的分析研究。

本次研究對于肺癌患者病灶組織中HSP90α、Bax 和Bcl-2 的表達分析研究可見，在病例組病灶組織中，HSP90α 及Bcl-2 蛋白的表達陽性率明顯上升，高于對照組，而Bax 蛋白的表達陽性率明顯下降，低于對照組，差異較為明顯，提示HSP90α、Bax 和Bcl-2 的異常表達均能夠參與NSCLC 的病情進展過程。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要與HSP90α、Bax 和Bcl-2 的下列幾個方面的作用有關［14］：①HSP90α 的表達上升能夠促進癌細胞DNA 錯配修復能力的下降，導致癌細胞持續(xù)性自我增殖速度的提升；②Bax 的表達下降或者Bcl-2 的表達上升，能夠?qū)е掳┘毎蛲鲂盘柾返母淖?，抑制了癌細胞的凋亡導致癌細胞G0/S 期細胞比例的下降，影響到了癌細胞的增殖和凋亡的平衡。張峻青等［15］研究者也認為，在NSCLC 患者中，HSP90 的表達濃度可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的遠處轉(zhuǎn)移或者遠期病死率較高的患者中，HSP90 的表達濃度的上升更為明顯。免疫組化染色分析研究可見，在癌細胞異型性較為明顯的區(qū)域，HSP90α 和Bcl-2的染色強度較深，提示了相關指標可能影響到了肺癌上皮細胞的異型性。在探討HSP90α、Bax 和Bcl-2 的表達與NSCLC 患者臨床病理特征的關系過程中，已發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚或者合并有明顯的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，HSP90α 的表達濃度可明顯上升，提示HSP90α 的表達與肺癌患者臨床病理特征密切相關，這主要由于HSP90α 的表達上升能夠提高肺癌細胞浸潤和黏附能力，促進癌細胞的轉(zhuǎn)移過程；在腫瘤直徑較大的肺癌患者中，Bcl-2的表達濃度明顯地上升，提示Bcl-2 的表達可能影響到了腫瘤病灶組織的增殖或者腫瘤細胞的富集，進而增加了腫瘤直徑；在癌細胞分化程度較差的患者中，Bax 的表達濃度明顯地下降，提示Bcl-2的表達與肺癌患者的臨床病理特征同樣相關，這主要由于Bax 的表達能夠影響到肺癌細胞的分化成熟程度。最后本次研究發(fā)現(xiàn)，HSP90α 和Bcl-2蛋白表達呈正相關，而與Bax 呈負相關，提示了3 種蛋白在影響到肺癌的病情進展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同刺激作用。

綜上所述，在NSCLC 患者中，HSP90α 及Bcl-2 的表達明顯上升，而Bax 的表達明顯下降，同時HSP90α、Bax 和Bcl-2 的表達與肺癌患者的臨床病理特征密切相關。后續(xù)相關臨床研究可以探討HSP90α、Bax 和Bcl-2 的表達與肺癌患者臨床預后的關系。