劉曉丹 烏日罕 畢力格 阿迪亞 王惠英

（內(nèi)蒙古自治區(qū)獸藥監(jiān)察所，內(nèi)蒙古呼和浩特 010000）

安乃近注射液為解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥，用于肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、風(fēng)濕癥等。安乃近注射液現(xiàn)收載在《中國(guó)獸藥典》2015年版一部上，標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制檢測(cè)。安乃近性質(zhì)不穩(wěn)定，光、熱、酸、堿均可使其分解，主要降解產(chǎn)物為4-甲氨基安替比林。國(guó)內(nèi)企業(yè)大多采用4-甲氨基安替比林與羥基次甲基磺酸鈉縮合的方法生產(chǎn)安乃近，由于由多步化學(xué)反應(yīng)過(guò)程組成，每一步幾乎都有副反應(yīng)發(fā)生，最終產(chǎn)品可能積累了多種化學(xué)雜質(zhì)?！吨袊?guó)獸藥典》2015年版一部安乃近原料藥和安乃近片有關(guān)物質(zhì)采用反相高效液相色譜法，色譜柱為C18，以磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鈉 6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0）-甲醇（75：25）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。蔡濤等人采用反相高效液相色譜法，色譜柱為C18，以磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鈉6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0）-甲醇（74：26）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm，檢測(cè)安乃近注射液中有關(guān)物質(zhì)。我們按照《中國(guó)獸藥典》2015年版一部安乃近原料藥和安乃近片有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法開(kāi)展試驗(yàn)，本文可用于安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)控制檢測(cè)，同時(shí)對(duì)樣品中的安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了考察。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀；十萬(wàn)分之一分析天平（Mettler Toledo）；萬(wàn)分之一分析天平（Mettler Toledo）；甲醇（色譜純，Merck）；磷酸二氫鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）；4-甲氨基安替比林（批號(hào)：101115-201101，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。實(shí)驗(yàn)中所用的水均為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜條件：Waters XBridge C18（4.6 mm × 150 mm，5um）色譜柱，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鈉6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，加氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.0）-甲醇（75︰25），流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，進(jìn)樣量10μl，柱溫30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取4-甲氨基安替比林對(duì)照品約10mg，加甲醇溶解并定容至200ml量瓶中，搖勻，即得。

2.2.2 樣品溶液的制備

取安乃近注射液樣品（批號(hào)：C10181001 河北遠(yuǎn)征禾木藥業(yè)有限公司）2.5ml，加甲醇定容至150 ml量瓶中，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性考察

精密稱(chēng)取安乃近和4-N-去甲基安乃近對(duì)照品各12.5mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，精密量取5ml置50ml量瓶中，加甲醇定容至刻度。在2.1項(xiàng)下色譜條件下，進(jìn)樣測(cè)試，記錄液相色譜圖。結(jié)果安乃近峰與4-N-去甲基安乃近峰的分離度為3.9，能夠符合系統(tǒng)適用性要求。

2.4 定量限考察

取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，用甲醇逐級(jí)稀釋成系列濃度的溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以信噪比10：1為定量限。結(jié)果4-甲氨基安替比林定量限為0.4μg/mL。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取4-甲氨基安替比林對(duì)照品約40m g，配制成對(duì)照品系列濃度，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以4-甲氨基安替比林溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果4-甲氨基安替比林質(zhì)量濃度 在 0.0004076 ～ 0.4075 mg/ml（Y=2.43e+007X-3.27e+003，R2=0.9999）與峰面積積分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 專(zhuān)屬性考察

2.6.1 干擾試驗(yàn)

溶劑空白：甲醇作為溶劑空白；對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取4-甲氨基安替比林對(duì)照品約10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度；樣品溶液：同2.2.2項(xiàng)下。分別取上述對(duì)照品溶液、溶劑空白、樣品溶液各10 μl進(jìn)樣測(cè)試，得到4-甲氨基安替比林保留時(shí)間。

結(jié)果對(duì)照品溶液4-甲氨基安替比林的保留時(shí)間為14.547min，樣品溶液4-甲氨基安替比林的保留時(shí)間為14.552min，表明對(duì)照品溶液和樣品溶液中4-甲氨基安替比林的保留時(shí)間基本一致。在溶劑空白圖譜中，安乃近峰及4-甲氨基安替比林峰處無(wú)干擾。

2.6.2 破壞性試驗(yàn)

取6份安乃近注射液樣品溶液各2.5～150 ml容量瓶中。其中一份不作處理，將其他5份安乃近注射液樣品溶液分別進(jìn)行鹽酸降解、氫氧化鈉降解、100℃水浴降解、過(guò)氧化氫降解和光照降解。取上述溶液，在2.1項(xiàng)下的色譜條件下進(jìn)樣，考察降解情況。結(jié)果樣品溶液在酸、堿、高溫、氧化和光照下降解，破壞量（主峰面積下降%）范圍是6.7～51.4%，主峰純度角均小于主峰純度閾值，均為單一物質(zhì)峰。結(jié)果表明，該方法專(zhuān)屬性良好。

2.7 精密度考察

2.7.1 重復(fù)性考察

取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和2.2.2項(xiàng)下的樣品溶液各10μl，在2.1項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果4-甲氨基安替比林為標(biāo)示量的百分含量平均值為2.7%，RSD為0（n=6），表明該測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.7.2 進(jìn)樣精密度考察

取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果4-甲氨基安替比林峰面積RSD為1.0%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7.3 中間精密度考察

精密量取2.2.2項(xiàng)下的樣品溶液10μl，由不同的檢測(cè)人員在不同日期分別配制樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果甲、乙兩個(gè)檢驗(yàn)人員測(cè)得4-甲氨基安替比林峰面積的RSD（n=6）分別為0.5%和0.6%，表明儀器中間精密度良好。

2.8 耐用性考察

取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和2.2.2項(xiàng)下的樣品溶液10 μl進(jìn)高效液相色譜儀，通過(guò)改變溫度、改變流速、改變酸堿度、更改流動(dòng)相比例、更換色譜柱，分別記錄對(duì)照品溶液和供試品溶液的峰面積，計(jì)算4-甲氨基安替比林為標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果通過(guò)改變溫度、改變流速、改變酸堿度、更改流動(dòng)相比例、更換色譜柱等條件，4-甲氨基安替比林為標(biāo)示量的百分含量均為2.7%，說(shuō)明該方法耐用性良好。

2.9 回收率考察

精密量取2.2.2項(xiàng)下的樣品溶液1 ml，加入4-甲氨基安替比林對(duì)照品，記錄4-甲氨基安替比林的峰面積，計(jì)算4-甲氨基安替比林的回收率。由表1可知，4-甲氨基安替比林的回收率為97.35～101.16%，平均回收率為99.9%，RSD為1.7%，表明符合方法學(xué)要求。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10 穩(wěn)定性考察

取同一批樣品為考察對(duì)象，分別在1、2、4、8、16、24 h考察其穩(wěn)定性，在2.1項(xiàng)下的色譜條件下進(jìn)樣，記錄4-甲氨基安替比林的峰面積。結(jié)果4-甲氨基安替比林的峰面積RSD為1.8%（n=6），表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.11 有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

取市場(chǎng)抽檢的47批次樣品，按2.2.1和2.2.2項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液和樣品溶液，在2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)試。由表2可知，4-甲氨基安替比林小于標(biāo)示量3.0%的有3家企業(yè)的6批次樣品，占比12.7%；4-甲氨基安替比林在標(biāo)示量3.0～4.0%（含3.0%）之間的有6家企業(yè)7批次樣品，占比14.9%；4-甲氨基安替比林在標(biāo)示量的4.0～5.0%之間的有2家企業(yè)2批次樣品，占比4.2%；4-甲氨基安替比林在標(biāo)示量的5.0～6.0%之間的有4家企業(yè)4批次樣品，占比8.5%；4-甲氨基安替比林在標(biāo)示量的6.0～7.0%之間的有7家企業(yè)10批次樣品，占比21.3%；4-甲氨基安替比林在標(biāo)示量的7.0～8.0%（含7.0%）之間的有11家企業(yè)18批次樣品，占比38.3%。 其中46批次產(chǎn)品其他各雜質(zhì)峰面積的和均小于對(duì)照溶液中安乃近峰面積（1.0%），占比97.9%。

3 討論

本文建立了測(cè)定安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)的方法，擬訂的安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證證實(shí)可行，簡(jiǎn)便、快捷、穩(wěn)定性好，重復(fù)性好，回收率高。我們測(cè)定的47批次產(chǎn)品全部來(lái)源于市場(chǎng)抽檢，產(chǎn)品批號(hào)涵蓋2017～2019，隨機(jī)性強(qiáng)，真實(shí)反映安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)狀況。該方法可用于安乃近注射液有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制。

表2 有關(guān)物質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果