李鴻飛， 劉 飛 ， 劉兆龍

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院， 烏魯木齊 830000)

遠志是臨床常用藥，為遠志科植物遠志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵葉遠志(PolygalasibiriaL.)的干燥根[1]。有安神益智、交通心腎功能[2]。臨床上常常用于失眠多夢、健忘驚悸等癥狀。傳統(tǒng)認為遠志甘草水制后有減毒增效作用[3]，生遠志可以引起口舌麻木、腹脹、嘔吐等不良反應(yīng)，而用甘草水制遠志可以消除以上不良反應(yīng)。所以臨床上應(yīng)用遠志常需炮制后入藥，而且目前全國各地炮制方法與歷代本草中的記載不盡相同[4]?！吨袊幍洹?015年版中的遠志炮制品有生遠志和制遠志兩種規(guī)格。在《全國中藥炮制規(guī)范》中[5]除了有生遠志和制遠志，還載有蜜遠志、朱遠志等不同炮制品。本實驗中傳統(tǒng)經(jīng)驗法制遠志，來自于明代古籍《景岳全書》[6]，原文為“制以甘草湯，浸一宿曬干，炒用”，此法清代也有論述，現(xiàn)按《中國藥典》的炮制方法和傳統(tǒng)經(jīng)驗炮制方法進行比較，考察不同炮制工藝對遠志化學(xué)成分的影響[7]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Waters e2695型高效液相色譜儀[美國Waters科技(上海)有限公司]，AG135型電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，L400型臺式離心機(湖南湘儀離心機儀器有限公司)，UPW-N30UV型超純水儀(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)，SK-3300LH型超聲波清洗儀(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司) 。

1.3 藥材實驗所用生遠志(批號：180301、180501、180601)及甘草(批號：180501)2018年6月購于新疆玖元堂中藥飲片有限責(zé)任公司，其中遠志5 kg、甘草1 kg均經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院李永和主任中藥師鑒定，實驗用遠志為遠志科植物遠志(PolygalatenuifoliaWilld.)的干燥根，甘草為豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根和根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制方法

2.1.1 《中國藥典》法 取甘草，加適量水煎湯，去渣，加入凈遠志，用文火煮至湯吸盡，取出，干燥。每100千克遠志用甘草6 kg。

2.1.2 傳統(tǒng)經(jīng)驗炮制方法 取甘草，加適量水煎湯，去渣備用，另取凈遠志，加入適量的甘草水拌勻，潤透至湯液吸盡，置炒鍋中，用文火炒干至顏色加深，表面有焦斑時取出，攤晾放涼。每100千克遠志用甘草6 kg。

2.1.3 甘草水的制備[8]取甘草飲片，加入30倍量水浸泡30 min后，煎煮30 min，濾過, 再次加入30倍量水煎煮30 min，濾過,合并濾液，濃縮至凈遠志的3倍量(藥典法制遠志)或濃縮至凈遠志的0.5倍量(傳統(tǒng)經(jīng)驗法制遠志)，備用。

2.2 細葉遠志皂苷含量測定

2.2.1 色譜條件[9-10]Shimadzu VP-ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，流動相：甲醇-0.05%磷酸溶液(70∶30)，檢測波長為210 nm，柱溫為30℃，流速1.0 mL/min，進樣量為10 μL。理論板數(shù)按細葉遠志皂苷峰計算應(yīng)不低于3 000。根據(jù)以上條件，分離效果良好。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取細葉遠志皂苷對照品(批號111849-201303，純度95.3%)適量，然后精密稱定，再加入甲醇，制成每1毫升含有1.037 mg細葉遠志皂苷的溶液，制備即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取實驗用生遠志和制遠志粉末9個樣品(全部過三號篩)各1 g，放入具塞錐形瓶中，然后精密加入70%甲醇溶液50 mL，稱定其重量，超聲處理1 h，放冷以后，稱定其重量，再用70%甲醇溶液補足損失的重量，搖勻后濾過，再精密量取濾液25 mL，置于圓底燒瓶中蒸干，殘渣再加入50 mL濃度為10%氫氧化鈉溶液，加熱回流2 h，冷卻以后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4～5，每次加入水飽和正丁醇50 mL并且不斷振搖，連續(xù)提取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，所得殘渣加甲醇適量溶解，移至25 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，供試品溶液制備完成。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取細葉遠志皂苷對照品溶液，用甲醇稀釋配制成濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/mL的標準溶液。分別進樣3次，各進樣10 μL，進行測定。所得細葉遠志皂苷的峰面積為縱坐標Y，其濃度為橫坐標X，得回歸方程是：Y=2.306×107X-1.297×106(系數(shù)r=0.999 7)。從試驗結(jié)果可以看出，細葉遠志皂苷對照品溶液的峰面積與濃度(0.1～1 mg/mL)有較好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取10 μL已制備的對照品溶液，按照以上色譜條件進樣5次進行測定，計算所得峰面積的RSD值為0.7%。試驗結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取10 μL同一批次制遠志樣品溶液，按照以上色譜條件，在0、4、8、12和24 h時進樣并進行測定，計算所得RSD值為1.2%。試驗結(jié)果顯示，樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗 取同一批次制遠志樣品粉末5份各1 g，按照供試品溶液的制備方法制備，每份溶液精密吸取10 μL進樣，測定細葉遠志皂苷的含量，計算得RSD值為1.3%。結(jié)果表明，本試驗方法重現(xiàn)性很好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量(編號為6)的制遠志樣品粉末6份，精密稱定各1 g，分別加入等量的細葉遠志皂苷對照品溶液，按照供試品溶液的制備方法制得，從制備的每份溶液中精密吸取10 μL進樣并按照以上色譜條件進行測定，計算結(jié)果得：細葉遠志皂苷的平均回收率為98.93%，RSD值為1.7%。見表1。

表1 細葉遠志皂苷加樣回收率結(jié)果

2.2.9 樣品含量測定 根據(jù)以上實驗條件，生遠志經(jīng)過甘草水炮制后，遠志中有效成分細葉遠志皂苷含量明顯升高，傳統(tǒng)經(jīng)驗法炮制遠志中的化學(xué)成分細葉遠志皂苷含量符合《中國藥典》規(guī)定，見表2、圖1、圖2。

表2 細葉遠志皂苷含量/%

圖1 細葉遠志皂苷對照品

圖2 遠志樣品HPLC色譜圖

2.3 遠志酮Ⅲ及3，6′二芥子酰基蔗糖的含量測定

2.3.1 色譜條件[11]Shimadzu VP-ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)，流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)，檢測波長為320 nm，柱溫為30℃，流速1.0 mL/min，進樣量為5 μL。理論板數(shù)按3，6′二芥子?；崽欠逵嬎銘?yīng)不低于3 000。根據(jù)以上條件，分離效果良好。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取實驗用生遠志和制遠志粉末9個樣品(全部過三號篩)各1 g，放入具塞錐形瓶中，然后精密加入濃度為70%的甲醇溶液25 mL，稱定其重量，加熱回流1.5 h，冷卻后，再稱定其重量，然后用濃度為70%的甲醇溶液補足損失的重量，搖勻后濾過，取濾液，供試品溶液制備完成。

表3 遠志酮Ⅲ加樣回收率結(jié)果

表4 3，6′二芥子酰基蔗糖加樣回收率結(jié)果

表5 遠志酮Ⅲ含量/%

表6 3，6′二芥子酰基蔗糖含量/%

圖3 遠志酮Ⅲ及3，6′二芥子酰基蔗糖對照品圖譜

圖4 遠志樣品HPLC色譜圖

3 討論

國內(nèi)外文獻報道[14-15]多以生遠志和制遠志為主，主要研究遠志的藥理和成分分析，遠志加工炮制工藝的報道比較少，而臨床上以蜜炙遠志和甘草制遠志應(yīng)用最多，本試驗通過甘草制遠志的實際生產(chǎn)和傳統(tǒng)經(jīng)驗炮制方法進行研究，總結(jié)出自己的經(jīng)驗，確定傳統(tǒng)方法炮制遠志的工藝流程為：取甘草，加適量水煎湯，去渣備用，另取凈遠志，加入適量的甘草水拌勻，潤透至湯液吸盡，置炒鍋中，用文火炒干至顏色加深，表面有焦斑時取出，攤晾放涼。遠志每100千克，用甘草6 kg，此方法為遠志的臨床用藥奠定了基礎(chǔ)。

課題組從實際出發(fā)并咨詢我院中藥專家和老藥工，改良了藥典法制遠志的不足之處并對甘草制遠志的歷史沿革進行了系統(tǒng)整理，總結(jié)以往的炮制經(jīng)驗和臨床體會，在對比了兩種炮制工藝和質(zhì)量標準的基礎(chǔ)上，對甘草制遠志的炮制工藝機理進行了初步探究并總結(jié)了寶貴經(jīng)驗。本課題經(jīng)驗法制遠志大大縮短了炮制時間，節(jié)省了大量人力物力，課題組下一步繼續(xù)對兩種工藝制遠志的炮制時間、炮制程度等進行對比，為工業(yè)批量生產(chǎn)提供技術(shù)支持，為制遠志合理、安全、有效的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。