黃 瑩 姚 遠(yuǎn) 朱曉鳴 王壽昆 許偉華 劉雨龍 陳新華,

(1. 福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院, 福州 350002; 2. 中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所, 淡水生態(tài)與生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢430072; 3. 福建農(nóng)林大學(xué)海洋研究院, 福建省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 福州 350002)

隨著魚(yú)粉資源日趨緊張, 魚(yú)粉價(jià)格不斷上漲。為了降低飼料生產(chǎn)成本, 水產(chǎn)飼料中多使用植物性蛋白, 如大豆、玉米蛋白粉等, 特別是在熱帶和亞熱帶地區(qū), 這些飼料原料和飼料成品在加工、運(yùn)輸、保存過(guò)程中管理不當(dāng)容易造成黃曲霉毒素(AFT)的污染[1]。AFT是霉菌次生代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一類(lèi)具有相似結(jié)構(gòu)的有毒產(chǎn)物, 擁有1個(gè)糖酸呋喃和1個(gè)氧雜萘鄰?fù)?香豆素)結(jié)構(gòu)[2]。黃曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)是主要產(chǎn)生AFT的真菌, 在潮濕或陰雨天氣的情況下, 極易導(dǎo)致上述2種真菌大量繁殖并產(chǎn)生AFT。曲霉菌通過(guò)空氣、土壤或昆蟲(chóng)等途徑傳播到農(nóng)作物和飼料儲(chǔ)藏處, 在適宜的環(huán)境中繁殖并產(chǎn)生多種AFT, 最常見(jiàn)的有黃曲霉毒素B1(AFB1)、黃曲霉毒素B2(AFB2)、黃曲霉毒素G1(AFG1)和黃曲霉毒素G2(AFG2), 其中黃曲霉毒素B1(AFB1)具免疫毒性、肝毒性和基因毒性, 可引起多種疾病的發(fā)生[3]。

國(guó)內(nèi)外有關(guān)AFB1對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物影響的研究, 主要集中于尼羅羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)[4-7]、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[8,9]、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)[10,11]、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictalurus punctatus)[12]、南亞野鯪(Labeo rohita)[13]等種類(lèi)。尼羅羅非魚(yú)攝入含AFB1的飼料10周后, 生長(zhǎng)減緩,死亡率升高[14]。用含不同濃度的AFB1飼料飼喂異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)成魚(yú)24周, 各毒素處理組魚(yú)體生長(zhǎng)和飼料利用較對(duì)照組無(wú)顯著差異,但對(duì)其生殖功能有一定影響[15]。不同水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)AFB1的敏感性差別很大, 此外AFB1毒性的大小還受到毒素濃度、暴露時(shí)間、年齡、性別等因素的影響[1,4,5,8,9]。AFB1污染不僅會(huì)造成水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)性能降低, 免疫抑制, 肝臟能損傷, 而且會(huì)積累在水產(chǎn)動(dòng)物的體組織中, 隨食物鏈在生態(tài)系統(tǒng)中進(jìn)一步傳播, 有可能威脅到人類(lèi)的健康。

草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)為我國(guó)傳統(tǒng)的四大家魚(yú)之一, 隸屬于鯉形目(Cypriniformes)、鯉科(Cyprinidae), 雅羅魚(yú)亞科(Leuciscinae)、草魚(yú)屬(Ctenopharyngodon), 為我國(guó)養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi), 其配合飼料生產(chǎn)上多選用植物原料作其蛋白源。同時(shí)在我國(guó)南方漁民多習(xí)慣在塘頭儲(chǔ)存飼料, 而在高溫、高濕的環(huán)境下, 原料及飼料感染黃曲霉的可能性極大, 這進(jìn)一步提高了草魚(yú)發(fā)生AFT中毒的概率。以往有關(guān)AFB1對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的報(bào)道多集中于對(duì)水生動(dòng)物急性毒性的研究, 研究方法多采用腹腔注射、灌喂等方式, 關(guān)于攝食途徑導(dǎo)致亞慢性致毒的研究相對(duì)較少[4,13]。但在實(shí)際生產(chǎn)中水產(chǎn)動(dòng)物暴露于A(yíng)FB1的方式主要是通過(guò)攝食被毒素污染的谷物和飼料, 因此, 相對(duì)于急性暴露, 研究動(dòng)物長(zhǎng)期攝入含AFB1的飼料, 更接近天然狀態(tài)的AFB1攝入途徑。迄今為止, 有關(guān)AFT在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中的代謝機(jī)理和毒理學(xué)研究尚不完整, 也僅涉及少數(shù)品種[5,8,12]。關(guān)于草魚(yú)AFB1的亞慢性中毒的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。AFB1的毒性大小與受試動(dòng)物的生長(zhǎng)階段相關(guān), 有報(bào)道表明魚(yú)苗階段比成魚(yú)更易發(fā)生AFT中毒[16]。本論文采用草魚(yú)幼魚(yú)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象, 研究不同濃度AFB1對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)、飼料利用、肝胰臟和腎臟組織學(xué)以及肌肉毒素殘留的影響, 評(píng)估飼料中的AFB1對(duì)草魚(yú)養(yǎng)殖和食品安全的潛在隱患。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖系統(tǒng)

微流水養(yǎng)殖系統(tǒng)由18個(gè)圓形塑料(pp)養(yǎng)殖桶(直徑80 cm, 高70 cm, 水體體積為180 L/缸)組成, 每缸水流速度0.6 L/min。每天測(cè)2次氣溫和水溫, 每2周檢測(cè)水體溶氧和氨氮。實(shí)驗(yàn)期間, 水溫為22—28℃; 飼養(yǎng)用水為經(jīng)曝氣的自來(lái)水, 保持水體中的溶解氧含量在6 mg/L以上, 氨氮范圍為0.2—0.4 mg/L, pH為6.8—7.0。光照周期12L∶12D, 光照周期為8:30到20:30。

1.2 實(shí)驗(yàn)飼料及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置了不同濃度梯度AFB1(0、10、20、100、1000和5000 μg/kg)的6種等氮等能(32.96%蛋白質(zhì),14.55 kJ/g能量)飼料(表 1)。其中, 蛋白源為白魚(yú)粉和酪蛋白。

在各實(shí)驗(yàn)組中, 通過(guò)酶聯(lián)免疫法測(cè)得飼料中AFB1含量分別為0.8、11.6、20.3、94.9、955.7和4979.2 μg/kg, AFB1濃度的設(shè)計(jì)參考關(guān)于A(yíng)FB1在水產(chǎn)動(dòng)物的研究報(bào)道[4,5,15]。AFB1純品購(gòu)于美國(guó)Sigma公司, 將其溶于大豆油制成1000 μg/mL的母液, 按照設(shè)計(jì)濃度添加相應(yīng)量到各組飼料中。飼料制成直徑3 mm顆粒, 于60℃恒溫干燥箱中烘干后置于-20℃冰箱備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)草魚(yú)幼魚(yú)來(lái)自福州市閩侯縣南嶼湯湖生態(tài)養(yǎng)殖場(chǎng)。實(shí)驗(yàn)魚(yú)在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)2周后轉(zhuǎn)入實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)馴養(yǎng)2周, 暫養(yǎng)和馴化階段均投喂對(duì)照組飼料(表 1)。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí), 實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h, 選擇健康、規(guī)格較為一致的草魚(yú)幼魚(yú)(平均體重2.90 g)360尾, 隨機(jī)放入18個(gè)魚(yú)缸中, 分為6個(gè)實(shí)驗(yàn)組, 每組3個(gè)平行, 每缸20尾, 進(jìn)行為期84d的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。暫養(yǎng)期間和實(shí)驗(yàn)期間均于每日9:30與16:00分別連續(xù)投喂飼料, 達(dá)到表觀(guān)飽食為止。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 將實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h, 稱(chēng)量和記錄每缸魚(yú)的終末體重。

表 1 實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)飼料配方及化學(xué)組成(%干物質(zhì))Tab. 1 Diet formulation and chemical composition of experiment diets (% in dry matter)

1.4 實(shí)驗(yàn)取樣

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 每缸隨機(jī)取3尾草魚(yú)幼魚(yú)解剖取出肝胰臟和腎臟, 用中性甲醛固定, 采用HE染色做組織切片, 用作組織學(xué)觀(guān)察; 每缸隨機(jī)取7尾草魚(yú)幼魚(yú)在冰盤(pán)上解剖取背部白肌, 冷凍干燥后保存于-20℃用于肌肉AFB1含量測(cè)定。

1.5 樣品的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)飼料的干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、灰分的測(cè)定參照文獻(xiàn)[17]的方法測(cè)定: 干物質(zhì)在105℃烘干至恒重, 通過(guò)失重法測(cè)定; 粗蛋白采用FOSS定氮儀(2300 Kjeltec Analyzer Unit)測(cè)定; 粗脂肪采用索氏抽提儀(Soxtec system HT6, Tecator, Hoganas,Sweden)進(jìn)行測(cè)定; 灰分在馬福爐中550℃燃燒3h,失重法測(cè)定。

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性的測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所的測(cè)試盒。魚(yú)體肌肉毒素殘留采用ELISA法[4,15], 使用北京百靈康源生物公司的測(cè)試盒進(jìn)行測(cè)定, 使用酶標(biāo)儀(THERMO FISHER Multiskan FC)讀數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

利用下列公式計(jì)算特定生長(zhǎng)率、攝食率、飼料效率、肝體比和臟體比:

存活率Survival rate (%)=100%×(剩余尾數(shù)/初始尾數(shù))

特定生長(zhǎng)率(SGR, %/d)=100%×(LnW2-LnW1)/t

攝食率(FR, %BW/d)=100%×I/[(W1+W2)/2]/t

飼料利用率(FE, %)=100%×(W2-W1)/I

肝體比(HSI)=l00×肝臟重量(g)/魚(yú)體體重(g)

臟體比(VSI)=l00×內(nèi)臟重量(g)/魚(yú)體體重(g)

式中,W1為平均初始體重(g),W2為平均終末體重(g),t為實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)(d),I為攝食量(g)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS Statistics 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過(guò)一元方差分析(One-way ANOVA)后, 用Duncan’s進(jìn)行多重比較, 當(dāng)P＜0.05時(shí)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中, 各組草魚(yú)幼魚(yú)行為均未表現(xiàn)出異常。各毒素組草魚(yú)幼魚(yú)外部形態(tài)和顏色較對(duì)照無(wú)顯著差別。如表 2所示, 各毒素組草魚(yú)幼魚(yú)的存活率均在80%以上, 與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 各組草魚(yú)幼魚(yú)終末體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)攝食率(FR)、特定生長(zhǎng)率(SGR)、飼料效率(FE)無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

2.2 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)生理指標(biāo)的影響

如表 3所示, 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

2.3 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)內(nèi)臟指數(shù)和組織學(xué)的影響

經(jīng)過(guò)為期84d含不同濃度AFB1的飼料飼養(yǎng)后,解剖發(fā)現(xiàn), 草魚(yú)幼魚(yú)皮膚和各組織完整, 未觀(guān)察到鰭、眼和內(nèi)臟器官等外部形態(tài)的改變。各毒素組幼魚(yú)的肝體比和臟體比與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05, 表 4)。

肝臟組織切片觀(guān)察結(jié)果如圖 1所示, 攝入不同濃度AFB1的草魚(yú)幼魚(yú)肝細(xì)胞均未出現(xiàn)異常, 細(xì)胞膜完整, 細(xì)胞質(zhì)均勻、清晰, 細(xì)胞核形狀較為規(guī)則,細(xì)胞緊密連接。未見(jiàn)各類(lèi)炎癥細(xì)胞, 沒(méi)有嗜酸性粒細(xì)胞聚集現(xiàn)象。圖 2為腎臟組織切片觀(guān)察結(jié)果, 經(jīng)不同AFB1濃度處理的草魚(yú)幼魚(yú)腎臟組織未出現(xiàn)異常, 組織細(xì)胞邊界清晰, 腎小管與周?chē)M織相連, 未出現(xiàn)萎縮、變形等病理變化, 各毒素組草魚(yú)幼魚(yú)腎臟組織結(jié)構(gòu)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

表 2 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)初始體重(IBW)、終末體重(FBW)、存活率、攝食率(FR)、特定生長(zhǎng)率(SGR)和飼料效率(FE)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)Tab. 2 Effects of dietary AFB1 on initial body weight (IBW), final body weight (FBW), survival rate, feeding rate (FR), specific growth rate (SGR), feed efficiency (FE) of juvenile grass carp (Mean±SE)

表 3 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)Tab. 3 Effects of dietary AFB1 on serum activities of glutamic-pyruvic transaminase (ALT), glutamic-oxalacetic transaminase (AST),alkaline phosphatase (ALP), superoxide dismutase (SOD), and glutathione peroxidase (GSH-Px) of juvenile grass carp (Mean± SE)

表 4 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肝體比(HSI)、臟體比(VSI)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)Tab. 4 Effects of dietary AFB1 on hepatosomatic index (HSI) and viscera index (VSI) of juvenile grass carp (Mean ± SE)

2.4 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肌肉的AFB1積累水平的影響

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 草魚(yú)幼魚(yú)肌肉中AFB1的殘留量如表 5所示。攝食AFB1≤1000 μg/kg的草魚(yú)幼魚(yú)肌肉中未檢測(cè)出AFB1殘留, 僅在5000 μg/kg實(shí)驗(yàn)組中檢測(cè)出肌肉中含有(1.21±0.18) μg/kg的AFB1。

3 討論

3.1 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)存活率和生長(zhǎng)的影響

AFB1會(huì)引起水產(chǎn)動(dòng)物行為異常、體表黃化、食欲降低, 長(zhǎng)期食用或暴露在A(yíng)FB1污染中還會(huì)表現(xiàn)出致癌、致畸、致突變等基因毒性, 造成動(dòng)物死亡[4,18-20]。凡納濱對(duì)蝦攝入AFB1含量為 1500 μg/kg的飼料后成活率顯著下降[21]。羅非魚(yú)攝食AFB1含量為10 mg/kg的飼料對(duì)死亡率無(wú)顯著影響[5]。異育銀鯽攝食1000 μg/kg AFB1后存活率與對(duì)照組無(wú)顯著差異[1]。在本實(shí)驗(yàn)中, 草魚(yú)幼魚(yú)攝入AFB1達(dá)5000 μg/kg的飼料對(duì)存活率無(wú)顯著影響, 形態(tài)正常、魚(yú)體健康, 表明草魚(yú)幼魚(yú)對(duì)AFB1的耐受性較強(qiáng)。

尼羅羅非魚(yú)[14]、斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodonFabricius)[22]攝食AFB1后表現(xiàn)為增重率降低; 溝鯰[19]和雜交鱘(Acipenser ruthenus♀×A. baerii♂)[23]攝食AFB1后攝食率下降。羅非魚(yú)攝食AFB1達(dá)245 μg/kg時(shí)飼料效率顯著降低, 飼料效率降低與飼料中AFB1含量存在劑量效應(yīng)[4]。在本實(shí)驗(yàn)中, 各毒素組草魚(yú)幼魚(yú)攝食率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率均未顯著受到顯著影響, 表明不同的魚(yú)類(lèi)在A(yíng)FB1的耐受性上差別很大。

3.2 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肝功能指標(biāo)和抗氧化能力的影響

肝臟被認(rèn)為是AFB1的主要作用器官。AFB1在肝臟中首先經(jīng)細(xì)胞色素P450氧化酶代謝轉(zhuǎn)化為黃曲霉毒醇(AFL)等, 而黃曲霉毒醇又轉(zhuǎn)化為AFB1-8,9-環(huán)氧化合物(AFBO), 隨后與鳥(niǎo)嘌呤結(jié)合, 形成一系列的加成物導(dǎo)致可遺傳的惡性腫瘤基因[24]。生物體血清中的AST和ALT是醫(yī)學(xué)臨床上肝功能檢查的最為主要的2種指標(biāo), 當(dāng)肝臟受損, 細(xì)胞膜的通透性增大, 存在于肝細(xì)胞漿ALT和AST進(jìn)入血液內(nèi), 血清中的ALT和AST的活性升高[1,4,11]。凡納濱對(duì)蝦攝入AFB1后ALT和AST活力顯著高于對(duì)照組[25]。堿性磷酸酶是肝臟中重要的解毒酶, 也是肝臟受損的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)之一。斑節(jié)對(duì)蝦攝食AFB1后ALP活性顯著升高[22]。在本實(shí)驗(yàn)中, 草魚(yú)幼魚(yú)攝入不同濃度AFB1后血清ALT, AST和ALP均無(wú)顯著變化, 說(shuō)明攝食AFB1含量≤5000 μg/kg飼料未對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肝功能造成損傷。

AFB1經(jīng)過(guò)生物活化步驟轉(zhuǎn)化成的AFBO具有親電性, 極易攻擊酶蛋白分子上親核的氮、氧和硫等雜原子, 不但使酶蛋白失活, 而且使體內(nèi)產(chǎn)生的大量自由基和活性氧無(wú)法及時(shí)清除[26]。肝細(xì)胞自由基清除系統(tǒng)受損, 機(jī)體的抗氧化能力大大降低,從而引起組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化, 使細(xì)胞內(nèi)活性氧防衛(wèi)系統(tǒng)SOD、GSH-Px等活力下降[11]。在本實(shí)驗(yàn)中, 攝食AFB1未對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)的SOD和GSH-Px造成顯著影響。

3.3 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)內(nèi)臟指數(shù)和組織學(xué)的影響

AFT可引起動(dòng)物肝臟纖維化、肝小葉中心壞死, 膽囊腫大、膽管上皮組織增生等。攝入AFB1會(huì)造成魚(yú)體肝臟腫大, 肝體比顯著升高[20]。在本實(shí)驗(yàn)中, 草魚(yú)攝食AFB1達(dá)5000 μg/kg飼料對(duì)肝體比、臟體比無(wú)顯著影響, 未造成膽囊腫大, 此結(jié)果與Huang等[15]對(duì)異育銀鯽的報(bào)道相似。

虹鱒連續(xù)12個(gè)月攝入80 μg/kg的AFB1后, 肝臟表現(xiàn)為出現(xiàn)大量空泡并伴有炎癥反應(yīng)[27]。在肝臟受損的情況下, 虹鱒的原纖維細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)化為成肌纖維細(xì)胞, 以應(yīng)對(duì)肝臟的損傷。羅非魚(yú)攝入超過(guò)245 μg/kg超過(guò)20W后會(huì)引起肝臟疾病, 表現(xiàn)為肝形態(tài)異常,肝臟空泡化嚴(yán)重, 伴有大量的嗜酸性粒細(xì)胞和炎癥細(xì)胞[4]。凡納濱對(duì)蝦攝入AFB1后肝胰腺出現(xiàn)空泡的數(shù)量要遠(yuǎn)多于對(duì)照組, 隨著AFB1濃度的升高, 肝細(xì)胞壞死程度越深, 空泡數(shù)量越多[11]。虹鱒攝食0.5 μg AFB1/kg飼料6個(gè)月后發(fā)現(xiàn)肝癌[8]。在本實(shí)驗(yàn)中, 草魚(yú)幼魚(yú)的肝胰臟組織未呈現(xiàn)纖維化病變, 肝臟細(xì)胞排列正常、緊密, 未見(jiàn)各類(lèi)炎癥細(xì)胞, 表明食用5000 μg/kg以下的AFB1不會(huì)對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肝胰臟造成病理?yè)p傷, 該結(jié)果與Han等[28]異育銀鯽攝入AFB1后肝胰臟組織結(jié)構(gòu)的影響的報(bào)道相似。這些不同的研究結(jié)果表明, AFB1誘導(dǎo)肝癌的易感性方面, 生物種間存在著極大的差異。

圖 1 飼料中AFB1對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肝臟組織學(xué)的影響(HE, 標(biāo)尺為50 μm)Fig. 1 Hepatopancreas of juvenile grass carp fed with diets containing AFB1 (HE, Bar = 50 μm)

鯉(Cyprinus carpio)攝食不同濃度(0.5、0.7、1.4 mg/kg) AFB121d, 鯉腎臟上皮組織變性脫落、壞死, 腎小管和腎小囊腔擴(kuò)張[29]。AFB1急性或者亞急性攻毒均會(huì)引起南亞野鯪腎臟腎曲小管上皮細(xì)胞變性、壞死, 腎小球萎縮[30]。低濃度(0.05 μg/kg) AFB1飼料飼養(yǎng)白鼠8周, 解剖觀(guān)察其腎臟組織學(xué)變化, 染毒組的小鼠腎臟部分區(qū)域的近曲小管出現(xiàn)壞死和脫落現(xiàn)象; 電鏡結(jié)果表明, 細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)空泡狀態(tài), 缺乏線(xiàn)粒體, 微絨毛間隔稀疏, 遠(yuǎn)曲小管出現(xiàn)細(xì)胞極性的消失和基底外側(cè)內(nèi)折[31]。在本實(shí)驗(yàn)中, 草魚(yú)攝入5000 μg/kg以下的AFB1不會(huì)對(duì)腎臟組織造成損傷, 表明草魚(yú)可能對(duì)AFB1有較強(qiáng)的代謝能力。一些魚(yú)類(lèi)對(duì)AFB1耐受力較強(qiáng)可能是由于A(yíng)FB1在其體內(nèi)較快地轉(zhuǎn)化成AFL而非AFBO, 并且迅速被解毒酶作用而生成水溶性物質(zhì), 最后通過(guò)其膽汁、尿液等排出體外[12]。

3.4 飼料AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肌肉的AFB1積累水平的影響

圖 2 飼料中AFB1對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)腎臟組織學(xué)的影響(HE, 標(biāo)尺為50 μm)Fig. 2 Kidney of juvenile grass carp fed with diets containing AFB1 (H&E, Bar = 50 μm)

表 5 飼料中AFB1水平對(duì)草魚(yú)幼魚(yú)肌肉AFB1積累(μg/kg濕重)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤)Tab. 5 Effects of dietary AFB1 on AFB1 accumulation (μg/kg wet weight) in muscle of juvenile grass carp (Mean± SE)

(Dicentrarchus labraxL.)飼喂含18 μg/kg AFB1飼料42d后, 其肌肉中的AFB1達(dá)到4.25 μg/kg[34]。斑節(jié)對(duì)蝦攝入AFB1第4周肌肉和頭胸甲中有殘留, 且肌肉中含量多余頭胸甲, 而第6周開(kāi)始AFB1的殘留量開(kāi)始下降, 肌肉中AFB1含量極低, 而頭胸甲中的殘留量也顯著減小[22]。在本研究中, 攝入AFB1濃度在1000 μg/kg以下的草魚(yú)肌肉中未檢測(cè)出AFB1殘留,而5000 μg/kg組的殘留量?jī)H為1.21 μg/kg, 低于FDA食品安全標(biāo)準(zhǔn), 此結(jié)果與王靜等[11]對(duì)凡納濱對(duì)蝦的報(bào)道相似, 攝入AFB1含量在2000 μg/kg以下的蝦體肌肉中未檢測(cè)出AFB1。

4 結(jié)論

草魚(yú)幼魚(yú)攝入AFB1含量達(dá)4979.2 μg/kg飼料84d后, 其生長(zhǎng)、肝功能指標(biāo)、內(nèi)臟指數(shù)、肝胰臟和腎臟組織結(jié)構(gòu)均未受到顯著影響。肌肉的AFB1殘留量低于FDA食品安全限定標(biāo)準(zhǔn)。