王瑞 許曉義 張波 宋高臣

【摘 要】 目的：從細胞生物學角度觀察羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖的抑制作用。方法：1）Hela細胞培養(yǎng)及傳代。2）Hela細胞分組及給藥處理：陰性對照組（不加任何藥物）、BPS低劑量組（25μg/mL）、BPS中劑量組（50μg/mL）、BPS高劑量組（100μg/mL）、陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）。3）MTT法檢測細胞生長增殖情況;流式細胞技術檢測細胞凋亡。結果：陰性對照組、羅勒多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL劑量及陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）作用Hela細胞24h后的細胞抑制率分別為0.3%、18.1%、29.8%、85.2%、90.1%，羅勒多糖對Hela細胞增殖的抑制作用與藥物濃度正相關（P<0.01）;羅勒多糖25μg/mL劑量作用Hela細胞24h、48h、72h后，凋亡率分別為 2.8%、9%、29%，細胞凋亡率與藥物作用時間正相關（P<0.01）。結論：1）羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖生長具有良好的抑制作用。2）羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖作用和其濃度密切相關。

【關鍵詞】 羅勒多糖;Hela細胞;細胞凋亡;流式細胞術

羅勒多糖（Basil polysaccharide，BPS）系從中國傳統(tǒng)化淤名方中的一味具有抗血小板作用的藥物全草植物羅勒中經分離、提取得到的藥物有效成分[1]。雖然有研究表明羅勒多糖能抑制一些人腫瘤細胞增殖[2]、粘附[3]、遷移[4]并誘導其凋亡[5]，但關于其對于宮頸癌的治療作用研究較少，偶有報道。因此，本實驗以宮頸癌Hela細胞為研究對象，通過MTT檢測細胞生長增殖實驗、流式細胞技術來探討B(tài)PS對宮頸癌Hela細胞相關生物學行為的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

紫杉醇購自佳木斯市醫(yī)藥公司;羅勒多糖提取物由佳木斯醫(yī)學院天然藥物實驗室自提;RPMI 1640培養(yǎng)基（批號：8115400）購自美國Gibco公司;新生牛血清購自杭州四季青工程材料有限公司。人宮頸癌Hela細胞由佳木斯醫(yī)學院基礎醫(yī)學院實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 常規(guī)細胞培養(yǎng)人宮頸癌Hela細胞 按照常規(guī)細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)人宮頸癌Hela細胞。

1.2.2 藥物配制 羅勒多糖溶液：取1μL 10mg/mL羅勒多糖儲備液于EP管中，加入9μL DMSO 溶液稀釋至10μL，使之濃度為1mg/mL，再將稀釋后的藥物用2%的FBS-DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋，使藥物終濃度分別為25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。另取紫杉醇母液，DMSO溶解稀釋成50μg/mL濃度。

1.2.3 MTT法檢測羅勒多糖對宮頸癌Hela細胞的抑制作用 取生長狀態(tài)為對數(shù)生長期的Hela細胞，胰蛋白酶消化，1000rpm離心5min，混勻制成懸液，調整濃度為5×104mL

3 討論

羅勒為唇形科羅勒屬植物（Ocimum basilicum L.var.pilosum（Willd.） Benth），又名九層塔、氣香草等。性溫昧辛。有疏風行氣，化濕消食、活血、解毒之功能。用于外感頭痛、食脹氣滯、脘痛、泄瀉、月經不調、跌打損傷、蛇蟲咬傷、皮膚濕瘡、癮疹痛癢等癥的治療[6]，羅勒多糖是其有效成分。

本實驗研究結果顯示，不同劑量羅勒多糖作用人宮頸癌Hela細胞24h后，相對陰性對照組，羅勒多糖各劑量組及陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）的細胞增殖抑制率和凋亡率都升高，BPS干預Hela細胞后，24h、48h、72h各時間點用藥組細胞均出現(xiàn)明顯的凋亡，并且凋亡率隨作用時間延長而相應增加。所以羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖生長具有良好的抑制作用而且增殖作用和其濃度密切相關。

參考文獻：

[1] Feng B，Zhu Y，Su Z，et al.Basil polysaccharide attenuates hepatocellular carcinoma metastasis in rat by suppressing H3K9me2 histone methylation under hepatic artery ligation-induced hypoxia[J].International Journal of Biological Macromolecules，2017，107（Pt B）：S0141813017326983.

[2] 李路，李蘭，肖麗，等.羅勒多糖對紫杉醇抑制肺腺癌A549細胞增殖作用的影響[J].山東中醫(yī)雜志，2016，35（06）：554-557.

[3] 羅勒多糖調節(jié)上皮間質轉化抑制肝癌侵襲轉移的機制研究[D].廣州中醫(yī)藥大學，2015.

[4] 朱慶均，閆丹丹，張成華，等.羅勒多糖抑制TGF-β誘導的A549細胞侵襲運動能力研究[J].中華腫瘤防治雜志，2017，24（13）：875-880.

[5] 朱慶均，連松剛，李蘭，等.羅勒多糖對HLECs中VEGFR-2/3表達的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2016，（03）：342-346.

[6] Lv J，Shao Q，Wang H，et al.Effects and mechanisms of curcumin and basil polysaccharide on the invasion of SKOV3 cells and dendritic cells[J].Molecular Medicine Reports，2013，08（05）：1580-1586.