李 歡，黑小斌，李依民*，劉志軍，張海英，高 靜，顏永剛，張 崗*

1陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 陜西省秦嶺中草藥應(yīng)用開(kāi)發(fā)工程技術(shù)研究中心，西安 712046；2 隴縣大興中藥材種植專業(yè)合作社；3 隴縣市場(chǎng)監(jiān)管局，隴縣 721200

中藥大黃為蓼科多年生高大草本植物掌葉大黃RheumpalmatumL.，唐古特大黃R.tanguticumMaxim.ex Balf.或藥用大黃R.officinaleBaill.的干燥根及根莖，別名將軍、黃良等，性寒、味苦，瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)[1]，臨床應(yīng)用廣泛。大黃含有蒽醌類、酚類、鞣質(zhì)、萘苷類及有機(jī)酸等成分[2]，蒽醌類為其主要活性成分，有抗炎、保肝、調(diào)節(jié)胃腸道及抗腫瘤等藥理作用[3-5]?！吨袊?guó)藥典》(2015年版)規(guī)定大黃含量檢測(cè)指標(biāo)為蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚[1]。

大黃喜冷涼氣候，耐寒，忌高溫，生于海拔1 200～4 000米山溝或林下，野生資源有限，現(xiàn)多栽培于甘肅、青海、四川和陜西等省區(qū)。掌葉大黃栽培面積最廣，市場(chǎng)需求量最大，已在分析方法、成分含量、分子鑒定及資源利用等方面開(kāi)展一定研究。如通過(guò)超聲輔助雙水相提取佐以高效液相色譜法以及結(jié)合響應(yīng)面優(yōu)化，為大黃蒽醌類成分提供了高效、快速、低成本的分離方法[6]。HPLC分析野生掌葉大黃有效成分含量明顯高于栽培品，光照、濕度為影響含量的主要環(huán)境因子[7]。不同年限大黃含量測(cè)定結(jié)果表明，大黃宜選用三年以上生藥作為大黃藥材來(lái)源[8]。葉綠體matK可用于大黃正品與偽品的分子鑒定[9]。另有研究發(fā)現(xiàn)掌葉大黃分根和須根中蒽醌類含量明顯高于其他部分[10,11]。掌葉大黃葉片生藥學(xué)及相關(guān)含量測(cè)定研究為葉片資源有效利用奠定基礎(chǔ)[12,13]。但是與掌葉大黃年限以及部位相關(guān)的研究仍然較少，因此，對(duì)不同年限及部位栽培掌葉大黃成分差異積累及藥材質(zhì)量形成規(guī)律的探索成為急需解決的科學(xué)問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)將3、4、5年生掌葉大黃分別分為根、根莖、葉片3個(gè)部位，進(jìn)行9種成分的HPLC含量檢測(cè)，以期為掌葉大黃的品質(zhì)及資源有效利用提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀，包括四元超高壓溶劑系統(tǒng)、自動(dòng)進(jìn)樣恒溫樣品管理器，Waters 2998 PAD檢測(cè)器，Empower 3色譜工作站(Waters,USA)；GB204型電子分析天平(北京賽多利斯)；KQ-200KED超聲波清洗機(jī)(江蘇昆山)；GZX-9140MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅)。

1.2 試劑

對(duì)照品沒(méi)食子酸(批號(hào)122811)、番瀉苷B(11z15)購(gòu)自天津西瑪科技有限公司；大黃素(110795-200505)、大黃酸(0757-200206)、大黃素甲醚(110758-200610)、大黃酚-8-O-葡萄糖苷(110796-200615)、大黃素-8-O-葡萄糖苷(10756-200110)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。大黃酚(B2038)和蘆薈大黃素(B20772)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。色譜甲醇購(gòu)自上海泰坦科技有限公司。娃哈哈純凈水購(gòu)自杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 材料

新鮮掌葉大黃全株于2018年11月采自隴縣大興中藥材種植專業(yè)合作社大黃種植基地，北緯34°37′27′′、東經(jīng)106°48′35′′，海拔1 524.3米；經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)張崗教授鑒定為掌葉大黃RheumpalmatumL.。3年生(批號(hào)ZY1501-ZY1509)、4年生(ZY1401-ZY1409)、5年生(ZY1301-ZY1309)植株各9批，每批次分別處理為根、根莖、葉片3部分，根和根莖切成薄片，45 ℃恒溫干燥，備用。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為武本C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)色譜柱；流動(dòng)相由甲醇(A)和0.2%磷酸水(B)組成，梯度洗脫(0～5 min，5%～15% A；5～15 min，15%～30% A；15～25 min，30%～35% A；25～31 min，35%～42% A；31～46 min，42%～53% A；46～66 min，53%～68% A；66～75 min，68%～100% A；75～85 min，100% A)，檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm，柱溫30 ℃，體積流量1.0 mL/min。進(jìn)樣量為10 μL。在上述色譜條件下分析，理論板數(shù)按各個(gè)成分計(jì)算均不低于5 000，與相鄰組分峰的分離度均大于1.5，色譜峰對(duì)稱因子均在0.95～1.05。典型樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等對(duì)照品適量，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度分別為0.224、0.656、0.172、0.234、0.079、0.077、0.028、0.048、0.027 mg/mL的各對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置于10 mL容量瓶，甲醇補(bǔ)足至刻度，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 掌葉大黃中9個(gè)化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)品(A)及樣品(B)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC profiles of mixed reference substances of nine components (A) and R.palmatum L.sample(B)注：1.沒(méi)食子酸；2.番瀉苷B；3.大黃酚-8-O-葡萄糖苷；4.大黃素-8-O-葡萄糖苷； 5.蘆薈大黃素；6.大黃酸；7.大黃素；8.大黃酚；9.大黃素甲醚。Note:1.gallic acid;2.senna glycoside B;3.chrysophanol-8-O-glucoside;4.emodin-8-O-glucoside; 5.aloe-emodin;6.rhein;7.emodin;8.chrysophanol;9.physcion.

2.3 供試品溶液制備

參考文獻(xiàn)[8]，取大黃干燥樣品，粉碎成細(xì)粉(過(guò)四號(hào)篩)，混勻，精密稱定1.000 g，置具塞錐形瓶中，精密吸取45.0 mL甲醇，稱定質(zhì)量。超聲處理30 min(功率500 W，頻率40 kHz)，放至室溫，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，10 500 rpm離心12 min，取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液2、4、6、8、10、15、20 μL測(cè)定并記錄色譜圖。分別以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明線性關(guān)系良好。線性回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)(R2)見(jiàn)表1。

2.4.2 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，記錄沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的峰面積積分值，計(jì)算得RSD分別為1.16%、1.58%、0.98%、1.36%、0.75%、1.28%、0.32%、0.88%、0.35%，均小于2.00%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取3年生根(ZY1503)供試品溶液，分別于制備后的0、2、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣10 μL測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算其RSD。沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚RSD分別為1.39%、1.73%、1.43%、1.21%、1.95%、1.85%、1.26%、1.11%、1.16%，均小于2.00%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取3年生根(ZY1503)大黃干燥粉末約1 g，精密稱定，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.81%、1.25%、1.13%、1.88%、1.32%、1.15%、1.08%、1.39%、1.44%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

取3年生根(ZY1503)大黃干燥粉末約1 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備2份供試品溶液，一份加入等體積的甲醇，另一份加入等體積已知質(zhì)量濃度的對(duì)照品混合溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算各成分的加樣回收率。沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚平均回收率分別為99.70%、98.10%、97.30%、102.10%、103.60%、99.70%、108.20%、101.40%、100.60%。RSD分別為0.58%、1.96%、1.38%、1.74%、0.59%、1.76%、1.46%、0.67%、1.56%，表明方法準(zhǔn)確度良好。

表1 9種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍Table 1 Regression equations and linear ranges of nine constituents

2.5 樣品定量測(cè)定

取各待測(cè)掌葉大黃干燥粉末樣品約1 g，精密稱定，平行3份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行9種化學(xué)成分定量分析，測(cè)定各成分峰面積，計(jì)算各成分在樣品中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大黃樣品中9種成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 2 Determination of nine constituents composition in R.palmatum L.

續(xù)表2(Continued Tab.2)

部位Parts批號(hào)Sample No.質(zhì)量分?jǐn)?shù)Mass fraction (mg/g)沒(méi)食子酸Galic acid番瀉苷BSenna glycoside B大黃酚-8-O-葡萄糖苷Chrysophanol-8-O-glucoside大黃素-8-O-葡萄糖苷Emodin-8-O-glucoside蘆薈大黃素Aloe-emodin大黃酸Rhein大黃素Emodin大黃酚Chrysophanol大黃素甲醚Physcion5年根莖Rhizomes of 5th yearZY13010.0904.7473.6201.8030.4390.1260.2390.1750.188ZY13020.0953.7763.8041.2500.4890.0810.2360.1710.178ZY13030.0495.8322.9161.4750.2500.0880.1750.0760.113ZY13040.0495.3363.2681.5210.1920.0860.1690.0700.132ZY13050.0642.6322.0930.7610.1870.0350.1300.0440.143ZY13060.0692.2361.6090.6150.1670.1070.1660.0540.153ZY13070.0704.3792.3761.9000.2380.1740.3150.0990.290ZY13080.0415.4036.2241.0440.5120.0680.3710.1860.184ZY13090.0414.5675.8070.7450.5320.0610.3740.1850.1785年葉片Leaves of 5th yearZY13010.0753.1090.5161.9640.1500.0110.0050.0050.025ZY13020.0812.9530.5071.0220.2090.0220.0170.0041.434ZY13030.1152.1061.1252.4040.2510.0220.0220.0080.043ZY13040.0732.0751.2161.2800.3380.0270.0240.0040.026ZY13050.1032.8881.4487.1120.1820.0450.0530.0030.029ZY13060.1153.1271.8184.3060.4250.0370.0540.0060.024ZY13070.0993.4570.6104.6440.0860.0090.0110.0040.063ZY13080.0594.3481.0554.4760.1130.0230.0430.0050.026ZY13090.0624.4951.2043.7230.1890.0280.0430.0060.0234年根Roots of 4th yearZY14010.0323.4251.2290.0940.9180.1660.4160.1900.313ZY14020.0393.2071.2390.1790.7590.0570.3830.1730.312ZY14030.0874.4921.0340.1230.6320.209 1.2480.3030.595ZY14040.0664.6310.9920.2310.5910.1871.2570.3010.578ZY14050.0443.4971.4580.4810.5420.1900.2080.0540.127ZY14060.0523.9581.5210.1120.5020.1910.7650.3490.357ZY14070.0473.5001.2240.1090.4510.1620.7580.3280.335ZY14080.0172.8330.9480.3600.5860.1030.2740.0650.190ZY14090.0282.3690.9590.3720.5950.1360.2900.0840.2054年根莖Rhizomes of 4th yearZY14010.0230.8250.6710.4240.3610.0840.1110.0620.109ZY14020.0260.6810.6710.3660.3380.0690.1120.0610.090ZY14030.0580.9800.7760.7660.3510.0820.7430.1050.404ZY14040.0670.8760.6040.6140.3150.1690.8070.1510.483ZY14050.0171.0980.8640.4690.2800.1250.1090.0140.075ZY14060.0340.5530.3720.4560.2660.0940.5440.1760.280ZY14070.0370.6130.3790.4690.2620.0550.5370.1630.281ZY14080.0300.7930.6810.5380.1580.0950.0870.0090.058

續(xù)表2(Continued Tab.2)

部位Parts批號(hào)Sample No.質(zhì)量分?jǐn)?shù)Mass fraction (mg/g)沒(méi)食子酸Galic acid番瀉苷BSenna glycoside B大黃酚-8-O-葡萄糖苷Chrysophanol-8-O-glucoside大黃素-8-O-葡萄糖苷Emodin-8-O-glucoside蘆薈大黃素Aloe-emodin大黃酸Rhein大黃素Emodin大黃酚Chrysophanol大黃素甲醚PhyscionZY14090.0260.7810.6900.5180.1760.1170.0870.0140.0734年葉片Leaves of 4th yearZY14010.0532.8100.2280.0490.0600.0940.0450.0030.020ZY14020.0542.5740.3670.0370.0290.0760.0450.0040.028ZY14030.0873.2250.8580.3880.0030.1140.0740.0020.010ZY14040.0913.2920.8 430.4450.0080.1060.0720.0030.010ZY14050.0553.3120.9710.4740.1150.1160.0150.0040.025ZY14060.0473.2400.9810.4740.4180.1590.0140.0040.025ZY14070.0685.6981.0890.0320.3110.1720.1150.0140.025ZY14080.0490.2580.3690.1130.2770.0370.0180.0020.013ZY14090.0560.2020.2690.1130.4510.0340.0180.0020.0153年根Roots of 3rd yearZY15010.1071.3931.1760.2970.5170.1070.7040.0070.482ZY15020.0912.0991.8440.2690.4060.1080.2870.0050.445ZY15030.1881.0181.0870.3480.2880.0630.4660.0650.282ZY15040.1971.3461.0500.6210.2130.0640.5310.0630.314ZY15050.0371.8881.1520.7660.1000.0360.5700.0740.273ZY15060.0561.1821.1490.2250.0780.0570.1890.0090.261ZY15070.0591.1141.2080.2910.0720.0500.1870.0050.252ZY15080.0901.3251.3760.7490.1790.0810.0790.0090.518ZY15090.0911.1491.4290.5100.1780.0890.1160.0080.5293年根莖Rhizomes of 3rd yearZY15010.0291.4601.1940.3770.2940.0630.4520.0050.880ZY15020.0221.5271.4080.4620.1530.0790.4500.0050.874ZY15030.0590.6491.6420.7450.0450.0180.2080.0060.161ZY15040.0650.5870.5500.4610.0570.0370.2150.0060.155ZY15050.0230.9910.8790.8290.1050.0550.1020.0020.206ZY15060.0320.8800.9060.7510.1370.0890.1100.0020.195ZY15070.0480.8820.8300.2820.0750.0450.2460.0030.243ZY15080.0441.7262.4330.7210.0420.0460.6310.0030.426ZY15090.0451.4730.9650.6680.0980.0370.6000.0030.4063年葉片Leaves of 3rd yearZY15010.0280.3211.0460.1420.1350.1310.0290.0020.017ZY15020.0380.3030.9310.1270.1260.1090.0300.0020.012ZY15030.0530.3891.0640.7400.0990.0220.0390.0030.028ZY15040.0420.2000.8740.7820.2340.0700.0290.0030.0288ZY15050.0320.2361.0710.8860.2940.0630.0370.0060.033ZY15060.0420.1120.1580.7320.1220.0170.0070.0050.008ZY15070.0350.0970.1510.7780.1680.0330.0100.0030.018ZY15080.0660.7280.2421.5740.0310.1570.0520.0040.023ZY15090.0690.7530.1481.2080.0650.1780.0530.0030.030

含量測(cè)定結(jié)果表明，大黃9種主要成分在所有待測(cè)樣品中均能檢出，每一樣品類型中各成分含量變化不大，同一部位不同年限或同一年限不同部位大黃樣品中各成分含量存在差異。利用SPSS對(duì)不同年限和不同部位大黃樣品各成分含量進(jìn)行單因素方差分析和多重比較，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

同一部位樣品在不同年限間的含量呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)積累(表3)。根中除沒(méi)食子酸的含量相對(duì)穩(wěn)定外，其他8種成分的含量均隨年限增加而增加兩倍左右或者4年含量增加兩倍左右(P<0.05)、5年變化不顯著；根莖中除了大黃素的含量相對(duì)穩(wěn)定外，其他8種成分的含量均隨年限增加而增加或者僅第4年增加(P<0.05)；葉片中大黃酚的含量無(wú)顯著差異，沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素的含量隨年限增加而增加(P<0.05)，而大黃酸和大黃素的含量4年最高(P<0.05)、5年與3年相當(dāng)。

表4為同一年限不同部位各成分含量積累變化情況。3年生掌葉大黃沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素、大黃素甲醚的含量次序?yàn)楦?根莖>葉片(P<0.05)；大黃酚的含量根中最高，根莖與葉片無(wú)顯著差異且為根的1/10；蘆薈大黃素葉片含量與根中相當(dāng)且均高于根莖(P<0.05)；大黃酸、大黃素-8-O-葡萄糖苷的含量在不同部位中無(wú)顯著差異。4年生大黃根與葉片中沒(méi)食子酸、番瀉苷B的積累量相當(dāng)且均高于根莖(P<0.05)；蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量次序?yàn)楦?根莖>葉片(P<0.05)，其中根中大黃酚含量為葉片中的42倍左右，大黃素和大黃素甲醚為葉片中10倍；根中大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃酸的含量最高，根莖及葉片中的含量相當(dāng)(P<0.05)；根莖中大黃素-8-O-葡萄糖苷含量高，葉片與根相當(dāng)。5年生大黃中大黃素-8-O-葡萄糖苷的含量次序?yàn)槿~片>根莖>根(P<0.05)；葉片中沒(méi)食子酸含量最高，根與根莖中的含量相當(dāng)且高于葉片；根與根莖中大黃酚含量相當(dāng)且高于葉片；其他各成分含量次序均為根>根莖>葉片(P<0.05)。

表3 同一部位不同年限掌葉大黃樣品中9種成分含量的比較Table 3 Comparison of nine components’ contents of the same part of R.palmatum L.from different growth years

注：同一因素不同處理間不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),下同。

Note:Different lower case letters represent significant differences aming the different treatments under the same factor at the 0.05 level;the same as follow.

表4 同一年限不同部位大黃樣品9種成分含量的比較Table 4 Comparison of nine components’ contents of the same growth year of R.palmatum L. from different parts

3 討論

HPLC作為中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)最常用分析手段，被廣泛運(yùn)用于中藥材含量分析和指紋圖譜研究等。其核心部分為指標(biāo)性有效成分篩選，從而合理進(jìn)行中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)。HPLC已在大黃成分含量測(cè)定、指紋圖譜、道地性及資源化學(xué)研究方面廣泛應(yīng)用。本研究在前期建立方法[8]基礎(chǔ)上選擇沒(méi)食子酸、番瀉苷B、大黃酚-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚9種成分；將流動(dòng)相醋酸水更換為磷酸水，相較之下，磷酸水作為緩沖鹽酸性更強(qiáng)，對(duì)紫外的響應(yīng)值更低且為不揮發(fā)性酸，能夠很好地維持流動(dòng)相的pH值；改良分析體系具有更好分離效果，其精密度高、準(zhǔn)確度好、穩(wěn)定性強(qiáng)。各批樣品中9種成分均能被檢測(cè)到，保證了大黃質(zhì)量評(píng)價(jià)的客觀性和真實(shí)性。

中藥材質(zhì)量由種質(zhì)與環(huán)境共同作用，選擇合適的種源與產(chǎn)地是保證中藥材質(zhì)量的首要環(huán)節(jié)。研究顯示四川地區(qū)種植環(huán)境可能有利于掌葉大黃游離蒽醌類成分的積累，而甘肅種植環(huán)境可能有利于結(jié)合蒽醌類、酚酸類和二蒽酮苷類成分的積累[7]。掌葉大黃根、根莖、須根、葉片、種子等不同部位蒽醌類衍生物含量差異較大，游離蒽醌總量地下部分遠(yuǎn)高于地上部分而結(jié)合蒽醌總量與之相反，蒽醌總量地下部分略高于地上部分[10]。此外，不同年限大黃有效成分含量分析表明大黃種植不低于三年[8,14]?；诖耍瑸樯钊胩骄空迫~大黃質(zhì)量形成的本質(zhì)，本研究將3、4、5年生掌葉大黃分別分為根、根莖、葉片3個(gè)部位進(jìn)行有效成分含量差異比較；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，9種成分中番瀉苷B的含量最高，大黃酚-8-O-葡萄糖苷次之，大黃酚含量最低；除沒(méi)食子酸外，大多數(shù)成分的含量隨年限增加而增加，但含量差異不盡相同，同一年限大黃根及根莖各成分含量高于葉片，且葉片中結(jié)合型蒽醌含量高，這與已有地上部分含量檢測(cè)結(jié)果一致[10,13]，據(jù)此推斷該基地有利于掌葉大黃二蒽酮苷類以及葉片中結(jié)合型蒽醌的積累。

除根及根莖入藥外，大黃葉片、葉柄等也含有大量活性成分，占大黃總資源的50%左右，被視為資源開(kāi)發(fā)的良好原料[15]。有研究表明掌葉大黃葉片中大黃素含量大致為根中的5倍，葉柄、葉片中還含有一定量的纖維素、可溶性多糖類及人體所需微量元素等[2,11]。也有研究對(duì)掌葉大黃葉片成分進(jìn)行檢測(cè)將其開(kāi)發(fā)為減肥劑和治療褥瘡的制劑[16]。本研究結(jié)果表明3年生掌葉大黃葉片中大黃素-8-O-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸都與根中相當(dāng)或者較高。4、5年生掌葉大黃葉片中沒(méi)食子酸、大黃素-8-O-葡萄糖苷的含量與根中相當(dāng)或較高，說(shuō)明該基地產(chǎn)掌葉大黃葉片具有一定的開(kāi)發(fā)價(jià)值。

中藥材發(fā)揮功效的物質(zhì)基礎(chǔ)為其主要有效成分，然而藥用部位有效成分積累的生物學(xué)本質(zhì)尚不清楚。本研究選用掌葉大黃生藥揭示其9種有效成分在不同部位中差異積累，根、根莖中各成分含量高、葉片中含量較低，與藥典規(guī)定一致，符合大黃根及根莖為入藥部位的認(rèn)識(shí)。掌葉大黃含量測(cè)定表明地上部位較規(guī)定用藥部位結(jié)合型蒽醌含量較高，但游離型蒽醌達(dá)不到藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，大黃如何通過(guò)生理代謝合成并轉(zhuǎn)運(yùn)有效成分至藥用部位貯藏，將是亟待解決的基礎(chǔ)科學(xué)問(wèn)題。課題組在本文工作基礎(chǔ)上，進(jìn)行了大黃轉(zhuǎn)錄組學(xué)基因表達(dá)研究，初步揭示了大黃蒽醌類成分生物合成途徑基因表達(dá)譜特征[17]，有助于理解掌葉大黃品質(zhì)形成機(jī)理，為高品質(zhì)道地掌葉大黃的定向培育、質(zhì)量控制及高效生產(chǎn)提供支撐。