申文曉 趙永忠 秦 韜 葉 亮 王雪梅 曹 杰 覃桂金 鄭清華

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1 消化內(nèi)科，2 檢驗科，3 耳鼻咽喉頭頸外科，廣西桂林市 541001，電子郵箱：1654568436@qq.com)

HBV感染是現(xiàn)今人類傳播量最大的傳染性疾病，具有反復(fù)發(fā)作、病程遷延、難治愈等特點[1]。HBV感染是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)、肝硬化及肝細(xì)胞癌的始動因素，已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題[2-3]。肝纖維化是機(jī)體對各種病因所致肝臟慢性損傷的修復(fù)過程，是慢性HBV感染后的常見表現(xiàn)，表現(xiàn)為以膠原纖維為主的細(xì)胞外基質(zhì)彌漫性增生、沉積，且增加的膠原組織會由匯管區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)展和延伸，直到中央靜脈，形成纖維間隔，使肝小葉進(jìn)行重新分割終導(dǎo)致肝硬化的形成[4]。肝纖維化具有一定的可逆性，而早期肝硬化也可以防治[5]。因此，及早準(zhǔn)確地診斷肝纖維化及肝硬化，以及評估疾病程度，對病情預(yù)測和治療至關(guān)重要。

目前，肝穿刺活組織檢查是評估肝臟病變情況的金標(biāo)準(zhǔn)，但其屬于有創(chuàng)性操作且風(fēng)險高，患者難于接受，而血清學(xué)指標(biāo)的檢測簡便易行，尋找可以評估肝臟病變的血清標(biāo)志物，對臨床診治肝臟疾病有重要意義。目前，層粘連蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前膠原(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)及Ⅳ型膠原已成為評估慢性肝病發(fā)生發(fā)展情況，衡量機(jī)體炎癥活動度和肝纖維化程度，以及判斷患者療效的重要指標(biāo)[6]。臨床上，還可結(jié)合ALT和HBV-DNA水平來指導(dǎo)慢性HBV感染的抗病毒治療[7]。但上述指標(biāo)診斷肝纖維化或肝硬化的靈敏度和特異性均不高。高爾基體蛋白 73(Golgi protein 73，GP73)又稱為Ⅱ型高爾基體膜蛋白，是Kladney等[8]研究巨細(xì)胞肝炎病原時，在肝臟cDNA文庫中克隆篩選出來的一種相對分子質(zhì)量為73的跨膜糖蛋白。近年來研究表明，GP73在正常肝臟的膽管上皮細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)，在正常肝細(xì)胞中很少或不表達(dá)，但肝細(xì)胞患者血清GP73水平明顯升高，因此其被認(rèn)為是一種潛在的新型血清腫瘤標(biāo)志物[9]。但目前發(fā)現(xiàn)GP73在肝細(xì)胞癌的診斷中特異性不高[10]，而其與肝纖維化、肝硬化密切相關(guān)，且血清 GP73水平可隨著纖維化程度的加重而升高[11]。本研究探討CHB和乙型肝炎肝硬化患者血清GP73、LN、PCⅢ、Ⅳ型膠原水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年7～12月在我院治療的CHB患者(CHB組)30例，乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化組)36例，同期選取31例健康體檢者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：CHB、肝硬化組患者均符合2015年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和感染病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；健康對照者均無肝炎病史，超聲及肝功能檢查均正常，HBsAg均為陰性。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他類型肝炎病毒感染及HIV感染者；(2)酒精性肝病、藥物性肝病、自身免疫性肝病、代謝性肝病等非HBV所致慢性肝病者;(3)肝癌及其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病的患者。對照組中男12例、女19例，年齡(45.6±11.9)歲；CHB組中男20例、女10例，年齡(44.8±12.5)歲；肝硬化組男26例，女10例，年齡(48.5±12.8)歲。3組研究對象一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。研究對象對本研究知情同意并簽署知情同意書，本研究已通過桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理學(xué)委員會審查。

1.2 方法 治療前采集CHB組及肝硬化組患者空腹靜脈血5 mL，體檢當(dāng)日采集對照組研究對象靜脈血5 mL，20℃下以3 000 r/min離心10 min血清后-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1 血清GP73水平的檢測：取凍存血清，解凍后采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清GP73水平。試劑盒由武漢華美生物工程有限公司提供(批號：L60613040)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，在ELx800型美國伯騰酶標(biāo)儀上讀取450 nm處數(shù)據(jù)。

1.2.2 血清PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平的檢測：取凍存血清，解凍后采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測血清PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平，試劑盒由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供(批號：20180102、20180110、20180110)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，在安圖A2000化學(xué)發(fā)光分析儀上讀取450 nm處數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以(x±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，非正態(tài)分布的計量資料以[M(P25，P75)]表示，比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組研究對象GP73、PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平比較 對照組、CHB組、肝硬化組GP73、Ⅳ型膠原、LN水平均依次升高(均P<0.05)，CHB組與肝硬化組患者PCⅢ水平均高于對照組(均P<0.05)，但CHB組與肝硬化組患者PCⅢ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組GP73、PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平比較[M(P25，P75)]

注：與對照組對比，aP<0.05；與CHB組對比，bP<0.05。

2.2 CHB組、肝硬化組患者血清GP73水平與PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平的相關(guān)性 CHB組患者血清GP73水平與PCⅢ及Ⅳ型膠原水平呈正相關(guān)(均P<0.05)，見表2。肝硬化組患者血清GP73水平與Ⅳ型膠原水平呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表2 CHB組患者血清GP73水平與PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平的相關(guān)性

表3 肝硬化組患者血清GP73水平與PCⅢ、Ⅳ型膠原、LN水平的相關(guān)性

3 討 論

HBV感染者的早期臨床癥狀不明顯，容易被忽視，若不采取積極治療措施，可發(fā)展至肝硬化，進(jìn)而出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致肝細(xì)胞癌[12]。許正鋸等[13]對100例慢性HBV攜帶者進(jìn)行肝活檢，發(fā)現(xiàn)29.0%患者存在肝臟炎癥，33.0%患者存在肝纖維化。但如未進(jìn)行相關(guān)病理活檢，按照CHB防治指南，這部分患者則不會接受抗病毒治療，這將導(dǎo)致其錯失抗病毒治療的機(jī)會[7]。目前診斷肝纖維化及肝硬化的金標(biāo)準(zhǔn)是肝穿刺活檢，但其為侵入性操作，具有創(chuàng)傷性，因此尋找敏感性和特異性高的血清學(xué)指標(biāo)監(jiān)測肝臟病變進(jìn)程，對早期診治肝纖維化及肝硬化具有重要意義。

研究表明，在各種急性和慢性肝臟疾病患者中GP73蛋白表達(dá)上調(diào)，尤其是急性肝炎和進(jìn)行性肝硬化患者[14-15]，推測原因可能為發(fā)生急慢性肝臟疾病后，機(jī)體出現(xiàn)急性肝細(xì)胞損傷、慢性肝病纖維化和組織重塑，這些過程均可以促進(jìn)肝臟GP73的表達(dá)上調(diào)。許正鋸等[16]的研究結(jié)果顯示，GP73主要在肝細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，慢性HBV感染者肝組織中GP73的表達(dá)隨著病情進(jìn)展而升高。還有研究證實，急慢性肝臟疾病者血清GP73水平與肝臟炎性反應(yīng)和纖維化程度密切相關(guān)，且在肝纖維化及肝硬化中其水平明顯升高，其是反映肝纖維化嚴(yán)重程度的潛在血清學(xué)指標(biāo)，可能也是診斷早期肝纖維化和早期肝硬化的敏感指標(biāo)[17-18]，而對于乙型肝炎肝硬化患者，血清GP73水平有助于評估乙型肝炎肝硬化患者是否處于失代償期[19]。

LN來源于星狀細(xì)胞，是細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白的成分之一，血清LN水平與肝纖維化程度和門脈高壓呈正相關(guān)[20]。PCⅢ是細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅲ型膠原的前體，能夠反映肝臟Ⅲ型膠原的代謝速度。在肝纖維化早期，PCⅢ合成較為活躍，晚期合成減慢，可作為評估活動性肝纖維化的指標(biāo)，但其他器官出現(xiàn)纖維化時，PCⅢ水平也升高，因此缺乏特異性[21]。Ⅳ型膠原為基底膜的主要組成成分，肝纖維化時，Ⅳ型膠原和LN可促進(jìn)基底膜形成，LN聯(lián)合Ⅳ型膠原常被用于評估肝臟纖維化的進(jìn)程，且敏感性較高[22]。

本研究結(jié)果顯示，對照組、CHB組、肝硬化組GP73、Ⅳ型膠原、LN水平均依次升高(均P<0.05)，與相關(guān)研究結(jié)果相似[18，23-24]，提示GP73、Ⅳ型膠原、LN可能與CHB及乙型肝炎肝硬化的發(fā)生有關(guān)。而Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CHB組患者血清GP73水平與PCⅢ及Ⅳ型膠原水平呈正相關(guān)；肝硬化組患者血清GP73水平與Ⅳ型膠原水平呈正相關(guān)(均P<0.05)，提示血清GP73聯(lián)合PCⅢ或Ⅳ型膠原可能有助于提高診斷CHB、乙型肝炎肝硬化的敏感性和準(zhǔn)確性。

綜上所述，GP73、Ⅳ型膠原、LN可能與CHB、乙型肝炎肝硬化的發(fā)生有關(guān)，GP73聯(lián)合PCⅢ或Ⅳ型膠原可能有助于提高其對CHB、乙型肝炎肝硬化的診斷效能。