虞莉，黎金風(fēng)

揚(yáng)州市中心血站，江蘇 揚(yáng)州 225007

引言

Microlab FAME全自動(dòng)酶免分析儀是瑞士HAMILTON公司生產(chǎn)的全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)，因操作過(guò)程更加規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化程度較高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵環(huán)節(jié)受到嚴(yán)格控制，大大提高實(shí)驗(yàn)的精密度和特異性，避免了人為因素造成的偶然誤差，被廣泛應(yīng)用于全國(guó)各采供血機(jī)構(gòu)的血液篩查。但是，使用過(guò)程中經(jīng)常會(huì)碰到因?yàn)樵O(shè)備本身感應(yīng)故障，吸液量不足，標(biāo)本血清含有纖維蛋白造成吸液針堵塞，洗液或管道內(nèi)有結(jié)晶等造成注液針堵塞等問(wèn)題而造成實(shí)驗(yàn)中斷，從而使酶標(biāo)板被吐出[1-3]，即發(fā)生吐板現(xiàn)象。最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與不同的吐板原因沒(méi)有直接關(guān)系，而實(shí)驗(yàn)中斷后剩余步驟的處理方式會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。正常情況下，操作人員會(huì)把未完成的實(shí)驗(yàn)按照未完成的程序，繼續(xù)插入FAME系統(tǒng)的工作計(jì)劃表，繼續(xù)使用FAME完成實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果優(yōu)于手工操作[3]。在實(shí)際工作中，往往會(huì)由于FAME內(nèi)的酶標(biāo)板比較多、洗板時(shí)間靠近等原因，使得后插入FAME系統(tǒng)的酶標(biāo)板由于時(shí)間上錯(cuò)不開(kāi)，儀器不允許立刻插入剩余實(shí)驗(yàn)程序，等待時(shí)間較長(zhǎng)。由于孵育時(shí)間是ELISA的關(guān)鍵因素之一，酶標(biāo)板孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，整板結(jié)果都會(huì)受到影響。如何能最大程度地減少因吐板對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高結(jié)果的準(zhǔn)確度和可信度，成為當(dāng)前各采供血機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室關(guān)注的熱點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì)FAME系統(tǒng)吐板后的幾種不同處理方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，旨在探索一種較為科學(xué)、實(shí)用的處理方法，取得了較好的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

所有檢測(cè)樣本均來(lái)自我站商品化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試劑內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品，均在有效期內(nèi)使用。

1.2 儀器與設(shè)備

Microlab STAR CH-8全自動(dòng)加樣系統(tǒng)（瑞士HAMILTON生產(chǎn)），Microlab FAME24/20全自動(dòng)酶免系統(tǒng)（瑞士HAMILTON公司生產(chǎn)），Zenyth340全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀（美國(guó)伯樂(lè)公司生產(chǎn)），BIO-RAD1575全自動(dòng)洗板機(jī)（美國(guó)伯樂(lè)公司生產(chǎn)）等。

1.3 試劑與方法

1.3.1 試劑

ELISA法TP試劑由珠海麗珠生物科技有限公司提供（批號(hào)：2018010208）；血篩四項(xiàng)J標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司提供（批號(hào)：201801001），濃度為6 mIU；陰、陽(yáng)性對(duì)照采用試劑盒配套內(nèi)部對(duì)照品。

1.3.2 方法

按FAME吐板的不同階段，處理方法分A、B兩組，A組為在第1次孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)施人工干預(yù)吐板；B組為在第2次孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)施人工干預(yù)吐板（通過(guò)FAME操作軟件進(jìn)行“中斷實(shí)驗(yàn)”操作，模擬吐板的發(fā)生）；每組吐板后的處理均采用方法1～3進(jìn)行。方法1：在FAME中選擇相應(yīng)的程序，重新插入后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟，完成實(shí)驗(yàn)。方法2：使用洗板機(jī)洗板后放入FAME孵育塔，手工完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟。方法3：使用洗板機(jī)洗板，放入帶有濕盒的恒溫水浴箱，手工完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟。對(duì)照組為FAME正常的孵育、洗板、讀板過(guò)程。所有操作均嚴(yán)格按照試劑操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。具體加樣及實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下。

（1）加樣。利用STAR全自動(dòng)加樣儀對(duì)ELISA法TP酶標(biāo)板分別加16份陰性對(duì)照、16份陽(yáng)性對(duì)照，16份質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和8份標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)倍比稀釋?zhuān)?:1～1:128）進(jìn)行加樣，其他陰陽(yáng)性對(duì)照和室內(nèi)質(zhì)控品按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求加樣，共加4塊酶標(biāo)板。

（2）A組試驗(yàn)。將上述4塊酶標(biāo)板加樣完成后立即放入FAME內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第1次孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)施人工干預(yù)，模擬3塊板全部吐出，然后按上述方法1～3完成實(shí)驗(yàn)，未吐板的酶標(biāo)板自始自終在FAME中完成所有實(shí)驗(yàn)步驟，作為對(duì)照組。

（3）B組試驗(yàn)。加樣步驟與A組實(shí)驗(yàn)相同，共加3塊酶標(biāo)板，在第2次孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)施人工干預(yù)，模擬3塊板全部吐出，然后用與A組相同的3種方法完成剩余實(shí)驗(yàn)步驟。

以上實(shí)驗(yàn)連續(xù)檢測(cè)5天，所有操作均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行。

1.4 計(jì)算方法

靈敏度（真陽(yáng)性率）＝真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%；特異度（真陰性率）＝真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%；精密度以變異系數(shù)（CV）表示，CV=（標(biāo)準(zhǔn)偏差SD/平均值Mean）×100%。分別計(jì)算上述各組試驗(yàn)靈敏度、特異度、精密度、最低檢出濃度等指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用表示，組間項(xiàng)目均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，定量資料采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照FAME吐板的不同階段，分A、B兩組實(shí)驗(yàn)，每組再分別利用方法1～3完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)，然后分別計(jì)算各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果均值、精密度、特異度、靈敏度和最低檢出濃度。A、B兩組分別與對(duì)照組比較，A、B兩組的方法3與對(duì)照組比較有明顯差異（P＜0.05）。A、B兩組相比較，指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但A組方法3特異度未達(dá)100%。檢測(cè)ELISA法TP試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 FAME不同階段吐板后不同方法檢測(cè)ELISA法TP試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)在獻(xiàn)血者血液篩查中應(yīng)用，極大地提高了工作效率，保證了血液檢測(cè)質(zhì)量，其高通量、規(guī)范化、自動(dòng)化的操作優(yōu)點(diǎn)，也越來(lái)越受到各采供血機(jī)構(gòu)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的信賴(lài)[1-4]，降低了失控率，提高了結(jié)果的精確性和可信性，同時(shí)解放了勞動(dòng)力。但在實(shí)際工作中時(shí)常會(huì)出現(xiàn)吐板等問(wèn)題，若處理不當(dāng)或不及時(shí)則會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響，甚至失控，造成結(jié)果不可信或?qū)嶒?yàn)失敗，既浪費(fèi)了試劑，又影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的及時(shí)發(fā)布。所以，正確、及時(shí)地處理FAME系統(tǒng)吐板后的操作是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提和基礎(chǔ)，也是檢驗(yàn)工作者應(yīng)具備的操作技能。

本文結(jié)果顯示，A、B兩組相比較，指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。A組中方法3特異度為98.75%（符合國(guó)家規(guī)定的≥95%），檢測(cè)陰性標(biāo)本時(shí)發(fā)生假陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明在洗板機(jī)洗板和手工加樣過(guò)程中，易發(fā)生洗板不徹底引起的假陽(yáng)性結(jié)果。A、B兩組分別與對(duì)照組比較，在檢測(cè)結(jié)果均值、精密度方面，A、B兩組方法1和方法2均與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A、B兩組方法3結(jié)果均值較對(duì)照組明顯偏低，精密度較差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明酶標(biāo)板在FAME孵育塔中孵育較恒溫水浴箱孵育效果好，孵育時(shí)間精確，溫度控制更加穩(wěn)定，而溫度對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)很重要的影響因素。最低檢出濃度方面，A、B兩組方法1和方法2均較方法3檢出濃度更低，靈敏度更高，可能與方法3在恒溫水浴箱的孵育時(shí)間、溫度以及手工洗板、加樣等[4-5]人為因素影響較多有關(guān)。王宏[6]報(bào)道，儀器法質(zhì)控指標(biāo)均優(yōu)于手工法，且質(zhì)控值的擺動(dòng)范圍窄，SD和CV均小于手工法，且在控率也明顯高于手工法，雖然與本文結(jié)結(jié)果基本一致，但該報(bào)道未明確FAME的吐板階段和具體的處理方法。影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素除與上述有關(guān)外，還與操作人員素質(zhì)、操作技能、設(shè)備的定期維護(hù)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、標(biāo)本、振蕩方式等[7-16]多方面有關(guān)，在實(shí)際工作過(guò)程中應(yīng)綜合考慮，以達(dá)到實(shí)驗(yàn)的最佳效果。

需特別說(shuō)明的是，由于實(shí)驗(yàn)室條件限制，未能采用試劑確認(rèn)評(píng)價(jià)專(zhuān)用血清盤(pán)，最低檢出濃度的檢測(cè)使用的是倍比稀釋的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其理論值與實(shí)際檢測(cè)值存在一定的誤差，還有待今后的進(jìn)一步研究。

綜合上述，F(xiàn)AME全自動(dòng)酶免系統(tǒng)吐板后，盡可能首選在FAME中進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，假如儀器操作系統(tǒng)允許立即進(jìn)行剩余實(shí)驗(yàn)，則直接插入到FAME中進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)際工作中，往往會(huì)由于FAME內(nèi)的酶標(biāo)板比較多，洗板時(shí)間靠近，后插入FAME系統(tǒng)的酶標(biāo)板由于時(shí)間上錯(cuò)不開(kāi)，儀器不允許立刻插入剩余實(shí)驗(yàn)程序，則等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（超過(guò)10 min），可先選用洗板機(jī)洗板，手工加試劑后再放入FAME孵育槽孵育。手工加試劑時(shí)，盡量標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免人為因素的影響，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，從而確保血液質(zhì)量和輸血安全。