毛德超 孫繼芹 陶婭琳 冷麗 包銳

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。有研究顯示，在宮頸癌患者中，有99.7%檢出HPV 感染［1］，故檢測HPV 已成為宮頸癌篩查的重要指標(biāo)。目前已發(fā)現(xiàn)超過150 種HPV 基因型，根據(jù)與宮頸癌發(fā)病風(fēng)險關(guān)聯(lián)程度的不同分為高危型和低危型［2］。專家共識提出，HPV 高危型主要包括HPVl6、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等；低危型主要包括HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、83 等［3］。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）-反向點雜交技術(shù)，定性檢測HPV 并進(jìn)行HPV 基因分型，為臨床診治HPV 感染提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料和方法

1.1 研究對象 選取2016 年1 月1 日—2018 年11月30日在本院檢測HPV及基因分型的3 221例女性受檢者，年齡20～78 歲，平均（40.46±10.16）歲。

1.2 儀器和試劑 基因擴(kuò)增儀（7300 Real Time PCR System）購自Applied Biosytems 公司；人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑購自廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司，該試劑可檢測18 種高危型基因和10 種低危型基因；宮頸分泌物一次性使用采樣盒（內(nèi)含無菌采樣毛刷和裝有無菌鹽水的無菌試管）購自江蘇健友醫(yī)療科技有限公司；HPV16 型、18 型等質(zhì)控樣品購自廣州邦德盛生物科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 標(biāo)本采集 用采樣毛刷按要求采集宮頸口部位的分泌物，置入無菌試管中，送檢驗科備檢。當(dāng)天不能檢測的標(biāo)本4 ℃冰箱中保存，1 周內(nèi)測完。

1.3.2 檢測方法 采用PCR-反向點雜交技術(shù)，實驗操作和結(jié)果判讀嚴(yán)格按照儀器和試劑說明書進(jìn)行，每次實驗同步監(jiān)測HPV16 型與HPV18 型的室內(nèi)質(zhì)控。檢測步驟主要包括：① 樣本處理和DNA提??；② PCR 擴(kuò)增；③ 雜交；④ 結(jié)果分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t 檢驗；計數(shù)資料以例（率）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染患者來源分布 門診和住院患者的感染率均明顯高于體檢人群（χ2＝36.24，χ2＝11.59，均P＜0.05），而門診患者和住院患者的感染率無明顯差異（χ2＝1.05，P＞0.05）。見表1。

表1 486 例HPV 感染患者的來源分布

2.2 HPV 感染及高危型HPV 感染患者在各年齡段的分布 共檢出HPV 感染486 例，感染率15.09%。其中18 種高危型基因408 例，占所有受檢者的12.67%（408/3 221）?！?0 歲年齡段的感染率最高，與30～39 歲、40～49 歲年齡段人群比較有明顯差異（χ2＝5.23，χ2＝4.27，P＜0.05），其他年齡段之間的感染率比較均無明顯差異（均P＞0.05）。見表2。

表2 HPV 感染陽性及高危型HPV 感染患者在各年齡段的分布情況

2.3 HPV 感染患者基因檢出情況 486 例HPV 感染患者中，358 例檢出1 種HPV 基因型，占73.66%；128 例檢出2 種及以上基因型，占26.34%。其中有1 例患者共檢出9 種基因型。見表3。

表3 486 例HPV 感染患者的基因檢出情況

2.4 HPV 基 因 分 型 及 亞 型 分 布 486 例HPV 感染患者覆蓋28 種基因型，包括18 種高危型基因（HPV16 型、18 型、26 型等）以及10 種低危型基因（6 型、11 型、40 型等）。除73 型外，其他27 型均在患者中單獨檢出；最常見基因型依次為16型、52型、58 型、40 型、44 型。檢出2 種及以上基因的最常見亞型依次為52 型、40 型、16 型、44 型、56 型、53 型。見表4。

表4 486 例患者的HPV 基因分型及亞型分布情況

3 討論

宮頸癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，目前在我國有發(fā)病率高、病死率高、普查率低等特點［4］。很多研究表明，HPV 感染與宮頸癌有因果關(guān)系，HPV 感染已明確為導(dǎo)致宮頸癌的病因［5-6］。HPV 分為高危型和低危型，目前發(fā)現(xiàn)的HPV 亞型有150 余種［2］，低危型主要與尖銳濕疣密切相關(guān)，高危型主要與宮頸癌前病變及宮頸癌密切相關(guān)［7］。因此，HPV的檢測和基因分型對治療HPV 感染以及預(yù)防宮頸癌都尤為重要。

本研究分析我院2016—2018 年3 221 例20 歲及以上女性患者的HPV 檢測結(jié)果，其中486 例檢出感染HPV，感染率為15.09%。低于楊君等［8］報道的重慶HPV 感染率（17.30%）和雷春菊［9］報道的佛山HPV 感染率（20.7%）。究其原因，可能與本研究將體檢人群納入分析有關(guān)，HPV 檢測費用高導(dǎo)致普查率較低，普通人群參與檢測多導(dǎo)致陽性率較低。另外，HPV 感染地區(qū)差異、不同實驗室檢測HPV 項目數(shù)量差異、各醫(yī)院HPV 檢測人群選擇差異等都可能導(dǎo)致不同地區(qū)HPV 感染率的差異，這也反映了我國HPV 普查率低的現(xiàn)狀。

本研究3 221 例受檢者中，體檢人群、門診患者、住院患者的HPV 感染率分別為10.12%、18.36%、16.25%，體檢人群的HPV 感染率明顯低于門診和住院患者，這說明普通人群檢測數(shù)量增加，感染率會有所降低。30～39 歲與40～49 歲人群的HPV 感染率相近，在分析樣本中的感染率最低；20～29 歲與50～59 歲人群的HPV 感染率相近，高于30～39 歲與40～49 歲的感染率；≥60 歲人群的HPV 感染率最高（21.64%）。各地區(qū)報道的HPV 感染率在不同年齡段人群中差異較大，可能由該項目的普及率較低以及各醫(yī)院就診人群差異大等原因所致［8-10］。

HPV 基因分型的相關(guān)研究較多，表現(xiàn)為不同地區(qū)之間存在差異。趙健等［11］發(fā)現(xiàn)北京地區(qū)HPV 的主要基因型依次為HPV16、58、52、33、53 等；吳玉萍等［12］發(fā)現(xiàn)江西省HPV 的主要基因型依次為HPV16、58、33、31 等；楊君等［8］發(fā)現(xiàn)重慶地區(qū)HPV主要基因型依次為HPV16、43、58、52、6 等；蔣衛(wèi)平等［13］發(fā)現(xiàn)浙江麗水HPV 的主要基因型依次為HPV16、52、58、33、53 等；本院HPV 主要基因型依次為HPV16、52、58、40、44 等，HPV16 型檢出率最高，與上述各地區(qū)的研究結(jié)果相同。說明HPV16 型是我國各地區(qū)主要存在的基因型，無明顯地區(qū)差異；上述各地區(qū)研究還顯示，高危型基因以HPV16、52、58 等為主，除HPV16 型外，其他分型的感染率有地區(qū)差異；各地區(qū)HPV 低危型基因的感染率差異很大，說明HPV 基因型存在地區(qū)差異。

本研究檢出1 種基因型的HPV 感染患者以HPV16 型最常見；檢出2 種和3 種基因型的HPV感染患者均以HPV52 型最常見；檢出4 種及以上基因型的HPV 感染患者以HPV40 型最常見。

本研究只能定性檢測HPV 及進(jìn)行HPV 基因分型，無法對HPV 病毒負(fù)荷量進(jìn)行定量檢測。李肖甫等［14］的研究顯示，高危型HPV-DNA 陽性患者中，宮頸部位細(xì)胞學(xué)異常者占79.01%，細(xì)胞學(xué)正常者占20.99%，說明不是所有高危型HPV 都會導(dǎo)致宮頸部位細(xì)胞學(xué)異常；另外，在細(xì)胞學(xué)異常組的宮頸組織中，高危型HPV-DNA 負(fù)荷量明顯高于良性病變組，證明高危型HPV 與宮頸病變存在密切關(guān)系。該研究提示本實驗室的方法存在局限性，還需要繼續(xù)完善；同時提示臨床在診斷高危型HPV 陽性患者時，不能僅考慮HPV 基因分型結(jié)果，還需要結(jié)合患者體征、宮頸細(xì)胞學(xué)和HPV 病毒負(fù)荷量等進(jìn)行判斷。

本研究3 221 例受檢者的HPV 檢測結(jié)果顯示，HPV 感染率為15.09%；門診患者HPV 感染率最高，其次為住院患者和體檢人群；各年齡段中，≥60 歲人群感染率最高，其次為50～59 歲、20～29 歲、40～49 歲、30～39 歲人群。上述情況反映了我院2016—2018 年HPV 檢測的實際情況。HPV16 型、52 型、58 型、40 型、44 型等明顯高于其他基因分型，可反映曲靖市HPV 感染的主要基因型。