楊澤登，蘭玲梅，謝平麗，肖俊新，孟凡明，劉艷芳，孫淑樂，扎拉嘎白乙拉

（1.中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，湖南 長沙 410013；2.中南大學(xué)湘雅司法鑒定中心，湖南 長沙 410013）

1 案 例

1.1 簡要案情

某年7月，本鑒定中心受當(dāng)事人孔某文的委托，受理了孔某文及其雙胞胎孩子孔某萌（女）和孔某祥（男）有無血緣關(guān)系的案件。采集孔某文、孔某萌和孔某祥的血樣進(jìn)行STR基因座分型檢測。

1.2 檢驗方法

1.2.1 DNA提取

使用常規(guī)的Chelex-100法提取DNA[1]。

1.2.2 常染色體STR基因座檢測

采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］對上述3個血樣提取的DNA進(jìn)行19個常染色體STR基因座和Amelogenin性別基因座的分型檢測。采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］進(jìn)行20個常染色體非CODIS STR基因座、1個常染色體CODIS STR基因座（D3S1358）和Amelogenin性別基因座的分型檢測。擴(kuò)增體系均為10μL，擴(kuò)增程序按相關(guān)試劑盒說明書進(jìn)行，擴(kuò)增反應(yīng)在9700型PCR儀（美國AB公司）上進(jìn)行。擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用3130xl基因分析儀（美國AB公司）電泳檢測之后，應(yīng)用GeneMapper?IDv3.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.3 X-STR基因座檢測

采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)17X［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］檢測孔某文和孔某萌X染色體上17個X-STR基因座的分型。依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行擴(kuò)增、電泳和結(jié)果分析。

1.2.4 同胞關(guān)系指數(shù)的計算

采用ITO法[2-4]計算孔某萌和孔某祥間的全同胞指數(shù)（full sibling index，F(xiàn)SI）、半同胞指數(shù)（half sibling index，HSI）以及全同胞指數(shù)與半同胞指數(shù)的比值（FSI∶HSI）。

1.3 檢測結(jié)果

1.3.1 Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A的檢測結(jié)果

經(jīng)Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A檢測，19個常染色體STR基因座和Amelogenin性別基因座的分型結(jié)果見表1。從表1可知：19個常染色體STR基因座中，孔某文和孔某萌在11個基因座（D19S433、D18S51、D6S1043、D3S1358、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、Penta E、D2S1338、FGA）的分型結(jié)果不符合孟德爾遺傳定律，經(jīng)計算，累積父權(quán)指數(shù)（combined paternity index，CPI）＜10-30，不支持孔某文作為孔某萌的生物學(xué)父親；對于孔某文和孔某祥，19個常染色體STR基因座的分型結(jié)果均符合孟德爾遺傳定律，且CPI＞10000（CPI=7581647.86），支持孔某文作為孔某祥的生物學(xué)父親。

1.3.2 Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC的檢測結(jié)果

三人的血樣采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC檢測后，21個常染色體STR基因座和Amelogenin性別基因座的分型結(jié)果見表2。從表2可知：孔某文和孔某萌的檢測結(jié)果中，除了與Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A檢測的相同基因座D3S1358的基因分型不符合孟德爾遺傳定律外，還有9個常染色體STR基因座（D15S659、D14S608、D3S1744、D2S441、D18S535、D10S1435、D11S2368、D19S253、D10S1248）的分型結(jié)果不符合孟德爾遺傳定律，經(jīng)計算，該22NC系統(tǒng)的CPI為1.028 9×10-25，不支持孔某文作為孔某萌的生物學(xué)父親；對于孔某文和孔某祥，該檢測系統(tǒng)的基因分型結(jié)果表明，所有基因座的分型結(jié)果均符合孟德爾遺傳定律（CPI=419 736.75），明確支持孔某文作為孔某祥的生物學(xué)父親。

表1 三人血樣經(jīng)Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A檢測的結(jié)果

表2 三人血樣經(jīng)Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC檢測的結(jié)果

1.3.3 Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)17X的檢測結(jié)果

經(jīng)Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)17X檢測孔某文和孔某萌在X染色體上的基因分型，結(jié)果見表3。孔某文和孔某萌在8個STR基因座（DXS6795、DXS8378、HPRTB、GATA165B12、DXS6807、DXS6803、DXS10134、DXS10159）上未檢見相同的等位基因。

表3 孔某文和孔某萌的血樣經(jīng)Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)17X檢測的結(jié)果

1.3.4 同胞指數(shù)計算結(jié)果

采用ITO法對Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A和Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC共39個常染色體STR基因座的FSI、HSI和FSI∶HSI值進(jìn)行計算，結(jié)果見表4。其中，HSI值明顯大于19，F(xiàn)SI∶HSI值明顯小于1，傾向于支持孔某萌和孔某祥為半同胞關(guān)系。

表4 ITO法計算孔某萌和孔某祥間同胞關(guān)系的結(jié)果

2 討 論

本研究采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A對被檢父親（孔某文）與異卵雙胞胎姐弟（孔某萌和孔某祥）進(jìn)行親子鑒定，發(fā)現(xiàn)孔某文和孔某萌在11個常染色體STR基因座的分型結(jié)果不符合孟德爾遺傳定律，而孔某文與孔某祥在所有基因座的分型結(jié)果均符合孟德爾遺傳定律。因母親樣本缺失，所以本研究又采取了Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)22NC進(jìn)行了補(bǔ)充檢驗。最終兩次檢測結(jié)果均不支持孔某文作為孔某萌的生物學(xué)父親，支持孔某文作為孔某祥的生物學(xué)父親。由于父女之間X染色體上的STR基因座以單倍型的形式遺傳，檢測X-STR基因座在父女遺傳關(guān)系的鑒定中可以提供有效的認(rèn)定或排除信息，具有獨(dú)特的優(yōu)勢，故本研究采用Goldeneye?DNA身份鑒定系統(tǒng)17X檢測孔某文和孔某萌的17個X-STR基因座，結(jié)果表明，孔某文和孔某萌的X-STR基因座分型結(jié)果不符合X染色體遺傳定律。

此外，在全同胞-半同胞的鑒定中，F(xiàn)SI與HSI的比值是較合適的定量指標(biāo)[5]。依據(jù)陸惠玲等[3]以常染色體STR基因座為基礎(chǔ)建立的同胞關(guān)系判定規(guī)則，即以 FSI∶HSI≥1 與 FSI∶HSI＜1 分別作為全同胞和半同胞的判定標(biāo)準(zhǔn)，以HSI≥19與HSI≤1分別作為半同胞和無關(guān)個體的判定標(biāo)準(zhǔn)。本例通過ITO法計算孔某萌和孔某祥的同胞關(guān)系指數(shù)，結(jié)果表明，HSI值明顯大于19，F(xiàn)SI∶HSI值明顯小于1，傾向于支持孔某萌和孔某祥為半同胞關(guān)系。結(jié)合常染色體和X-STR基因座的檢測結(jié)果及案情，支持孔某萌和孔某祥為同母異父雙胞胎親緣關(guān)系。

雙胞胎可以分為兩類，即同卵雙生子和異卵雙生子。同卵雙生子是由一個相同的受精卵分裂而來，雙生子的基因組DNA完全一致；異卵雙生子是由兩個卵子幾乎同時發(fā)生受精作用產(chǎn)生，雙生子的基因組DNA并不完全一致。雙胞胎的發(fā)生率很低，為1%～3%[6]，而異卵雙生子的發(fā)生概率更低。據(jù)WENK等[7]報道，在13 000例雙胞胎親子鑒定案件中，只有1例案件的鑒定結(jié)果是同母異父雙胞胎；據(jù)JAMES[8]報道，在美國，每400對雙胞胎中只有一對雙胞胎的母親發(fā)生異父同期復(fù)孕。本案例中異卵雙生同母異父的情況非常罕見，近年來國內(nèi)只有個別相關(guān)案例的報道[9-10]。同母異父雙胞胎情況的發(fā)生，是由于育齡女性在排卵日一次排出兩個或者連續(xù)排出兩個成熟的卵子，且在24 h內(nèi)該育齡女性與兩名男子發(fā)生性關(guān)系，導(dǎo)致兩個卵子分別與兩名男性的精子發(fā)生了受精作用，故而出現(xiàn)異卵雙生的情況。本案例中，孩子生母承認(rèn)在排卵期間曾與另一名男子發(fā)生過性關(guān)系。這種案件很罕見，故在進(jìn)行親子鑒定時應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎，如果被檢父親與女兒之間不符合孟德爾遺傳定律，建議加做X染色體遺傳標(biāo)記，如果被檢父親與兒子之間不符合孟德爾遺傳定律，則建議加做Y染色體遺傳標(biāo)記。