楊秀燕 劉海芳

浙江省義烏市中心醫(yī)院病理科，義烏 322000

【提要】 采用免疫組織化學(xué)法檢測102例胰腺癌及其匹配的癌旁組織、100例胰腺良性腫瘤組織的神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9(NEDD9)的表達(dá)。結(jié)果表明胰腺癌組織NEDD9的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織及良性腫瘤組織，且該表達(dá)與腫瘤TMN分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，NEDD9陽性表達(dá)患者3、5年生存率顯著低于NEDD9陰性患者，提示NEDD9有可能成為胰腺癌診斷、治療及預(yù)后評估的新靶點(diǎn)。

神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated 9, NEDD9)屬于骨架蛋白分子之一，有研究報道其在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，在細(xì)胞遷移、凋亡過程中發(fā)揮重要作用[1]。然而對于NEDD9在胰腺癌中表達(dá)的相關(guān)研究尚不多見。本研究檢測胰腺癌組織NEDD9表達(dá)，分析其與臨床病理的相關(guān)性,旨在為臨床胰腺癌診斷、治療及預(yù)后評估提供新的靶點(diǎn)和思路。

一、資料與方法

1．一般資料：選取2010年2月至2012年5月間浙江省義烏市中心醫(yī)院診治的胰腺癌患者102例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均經(jīng)影像學(xué)檢查以及術(shù)后病理檢查確診為胰腺癌；(2)入院前均未接受過放、化療；(3)臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在凝血功能障礙者；(2)合并其他惡性腫瘤疾病者；(3)臨床病歷資料不完整者。102例患者中男性66例，女性36例，年齡≤50歲25例，>50歲77例；病變部位：胰頭部72例，胰體尾部30例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期52例；病理分化程度：低分化47例，中高分化55例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例；肝轉(zhuǎn)移25例，無肝轉(zhuǎn)移77例。同期選取義烏市中心醫(yī)院100例病理證實(shí)的胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本作為對照。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

2．研究方法：收集患者的癌組織和匹配的癌旁組織及胰腺良性腫瘤組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測NEDD9表達(dá)，試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照說明書操作。NEDD9多抗的稀釋度為1∶300，二抗為過氧化物酶標(biāo)記，采用DAB顯色。以PBS代替一抗作為陰性對照組。由病理科醫(yī)師隨機(jī)選擇10個高倍視野盲法進(jìn)行閱片，并按照細(xì)胞著色程度以及陽性細(xì)胞占比進(jìn)行評分[2]。細(xì)胞染色強(qiáng)度：黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞占比：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。兩分相乘，0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為陽性，9分為強(qiáng)陽性。

3．觀察指標(biāo)：分析比較胰腺癌、癌旁組織、良性腫瘤組織NEDD9表達(dá)情況及與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系。根據(jù)NEDD9表達(dá)不同將胰腺癌患者分為NEDD9陰性組與NEDD9陽性組，術(shù)后通過電話或門診復(fù)查進(jìn)行隨訪，記錄患者3、5年的生存情況，隨訪截止至2017年5月31日。

二、結(jié)果

1．胰腺癌、癌旁組織、胰腺良性腫瘤NEDD9的表達(dá)：胰腺癌、癌旁組織、胰腺良性腫瘤NEDD9陽性表達(dá)率分別為69.6%(71/102)、31.4%(32/102)、29.0%(29/100)，胰腺癌的陽性率顯著高于癌旁組織及良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.826，P=0.000，圖1)。

2．胰腺癌組織NEDD9表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關(guān)性：TMNⅠ～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的NEDD9表達(dá)陽性率顯著低于TMN Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

圖1 胰腺癌(1A)和癌旁組織(1B)NEDD9的表達(dá)(免疫組化 ×400)

表1胰腺癌組織NEDD9表達(dá)情況與腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系[例(%)]

病理參數(shù)總例數(shù)NEDD9陽性表達(dá)χ2值P值年齡(歲) ≤502517(68.00)0.0400.841 >507754(70.13)性別 男6645(68.18)0.1800.672 女3626(72.22)病變部位 胰頭部7251(70.83)0.1740.677 胰體尾部3020(66.67)TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期5024(48.00)21.6460.000 Ⅲ～Ⅳ期5247(90.38)病理分化程度 低分化4743(91.49)19.7270.000 中高分化5528(50.91)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有4139(95.12)21.0960.000 無6132(52.46)肝轉(zhuǎn)移 有2516(64.00)0.4920.482 無7755(71.43)

3．胰腺癌組織NEDD9表達(dá)強(qiáng)度與患者生存率的關(guān)系：NEDD9陽性組患者3、5年生存率分別為52.1%(37/71)、28.2%(20/71)，顯著低于NEDD9陰性組患者的87.1%(27/31)、61.3%(19/31)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.296，P=0.001；χ2=10.024，P=0.002)。

討論胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度較高的腫瘤之一，該病在發(fā)病早期具有較高的隱匿性，缺乏典型的臨床表現(xiàn)，且病情發(fā)展迅速，通常伴有早期廣泛轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良[3-5]。由于胰腺具有獨(dú)特的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)特征，目前臨床上尚無簡便、可靠的診斷手段[6]。隨著近年來分子生物學(xué)在腫瘤方面的研究不斷深入，有不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)NEDD9在多種惡性腫瘤中均有明顯高表達(dá)[7]。

NEDD9屬于CAS家族成員，是一種骨架蛋白，由834個氨基酸組成，具體包括基質(zhì)結(jié)構(gòu)域(SD)、絲氨酸(SR)區(qū)域、SH3結(jié)構(gòu)域及焦點(diǎn)黏附目標(biāo)(FAT)域。研究發(fā)現(xiàn)其參與細(xì)胞的生長、侵襲遷移、致癌性轉(zhuǎn)化等，并在不同腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，是一種在多種癌癥類型中公認(rèn)的轉(zhuǎn)移標(biāo)志物。王娜等[8]研究顯示，NEDD9陽性表達(dá)率在正常胃黏膜、早期胃癌和進(jìn)展期胃癌組織中依次升高，且在早期胃癌中表達(dá)率已顯著升高。韋林等[9]報道，NEDD9在食管癌組織中特異高表達(dá)，參與食管癌的侵襲及轉(zhuǎn)移。努爾麥麥提·葉爾遜等[10]研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織中NEDD9水平顯著高于癌旁組織，并與胰腺癌的惡性程度等相關(guān)。由此可以證實(shí)，NEDD9的表達(dá)與胰腺癌的表達(dá)、侵襲以及轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)聯(lián)。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織中NEDD9表達(dá)陽性率為69.6%，明顯高于癌旁組織及胰腺良性腫瘤組織，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與吳鐵龍等[11]的研究報道相一致，表明了NEDD9在胰腺癌組織中存在明顯高表達(dá)。此外，胰腺癌NEDD9表達(dá)與腫瘤TMN分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示了NEDD9參與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程，其機(jī)制可能是NEDD9被FAK以及Src磷酸化，并和Crk分子相互作用，刺激Src-FAK-Crk遷移開關(guān)，從而加快鈣粘蛋白的降解，同時抑制黏著斑的分解，進(jìn)一步促進(jìn)整合素受體激活以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，最終達(dá)到促進(jìn)遷移、侵襲的作用。另外，胰腺癌組織中NEDD9陽性組患者3、5年生存率顯著低于NEDD9陰性組患者，提示NEDD9可能與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突