王 超，于震峰，王 菲，張 明，劉 偉

（大化集團(tuán)有限責(zé)任公司醫(yī)院燒傷科，遼寧 大連 116000）

凍傷是寒冷地區(qū)冬季多發(fā)病，是由于低溫導(dǎo)致全身或局部溫度下降而發(fā)生的損傷，二度凍傷為有漿液性滲出皮損，損傷達(dá)真皮層，三七不僅有良好的止血效果，還可以加快創(chuàng)面的修復(fù)，對(duì)創(chuàng)面的愈合具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)開展三七粉外敷對(duì)兔局部二度凍傷創(chuàng)面愈合的機(jī)制研究，為二度凍傷創(chuàng)面的臨床治療探討出一種合理有效且簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的治療方法，并提供其作用的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 模型及分組

健康新西蘭大白兔30只（雌雄不限），麻醉后10%硫化鈉脫毛，將金屬片（5 cm×10 cm）浸入-196℃液氮中取出立即將其貼緊兔背部裸露皮膚區(qū)10秒，使皮膚造成局部深二度以上凍傷。將制備好的大白兔模型隨機(jī)分為三組，A（對(duì)照組），B（常規(guī)換藥組），C（三七粉外敷組）批準(zhǔn)文號(hào)（滇20162606，云南三七科技藥業(yè)有限公司）。A組不做任何處置；B組常規(guī)雷夫努爾紗布包扎換藥；C組用三七粉浸透紗布（1 g/cm2）外敷包扎換藥。

1.2 樣本采集

在模型制備后的第1、3、5、7天每組隨機(jī)抽取1只動(dòng)物，麻醉后在背部皮損處取一標(biāo)本，大小約2 cm×1 cm。標(biāo)本采集完成后，對(duì)動(dòng)物繼續(xù)飼養(yǎng)直到該動(dòng)物皮損愈合。將取得的病理標(biāo)本進(jìn)行固定（4%甲醛溶液），并形成石蠟塊，完整保存。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

用毫米方格紙法分別在第3、5、7、14天對(duì)殘余皮損面積測(cè)量，并對(duì)皮損完全愈合時(shí)間進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)算，創(chuàng)面愈合判斷標(biāo)準(zhǔn)為皮損的上皮化率。

對(duì)VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率、血管密度進(jìn)行歸納、整理，并用4%甲醛溶液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行固定，采取常規(guī)石蠟包埋法進(jìn)行制作，形成切片。在檢測(cè)時(shí)，需要進(jìn)行脫蠟水化，并對(duì)抗兔VEGF抗體應(yīng)用免疫組化染色，VEGF陽(yáng)性評(píng)估：半定量計(jì)分法判定，并以陽(yáng)性著色程度為依據(jù)進(jìn)行評(píng)分。微血管的密度判定：參照 Weidner的計(jì)數(shù)方法對(duì)該指標(biāo)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2 結(jié) 果

傷后第1天每組凍傷皮損處呈現(xiàn)暗紅色，均可見水腫和滲出。凍傷后第3天發(fā)現(xiàn)均處于腫脹狀態(tài)，且A組、B組皮損處附著壞死組織，A組壞死灶明顯，與A組壞死組織比較，B組相對(duì)較少，C組皮損處壞死組織很少。傷后第5天A組皮損處加深明顯，表面壞死組織結(jié)成厚痂皮。B組皮損處表面結(jié)有薄層壞死痂皮。C組皮損處基底較濕潤(rùn)無(wú)明顯痂皮，傷后第7天A組皮損處不僅存在較厚的壞死組織，還可見少量的分泌物；B組皮損處觀察，皮損組織開始溶痂并附著少量液化壞死組織，C組皮損處基底較新鮮，部分皮損邊緣上皮化。14天A組皮損處壞死痂皮部分脫落，部分皮損上皮化愈合。B組皮損處壞死組織脫落皮損邊緣已上皮化愈合，中間有部分未上皮化，皮損基底較紅潤(rùn)。C組皮損處已基本上皮化愈合。

對(duì)皮損VEGF表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果分析，在免疫組化染色圖片中發(fā)現(xiàn)，血管、毛囊、皮損基底部細(xì)胞為VEGF主要分布部位。傷后第1 d，比較三組VEGF陽(yáng)性率，無(wú)顯著差別。第3 d開始，C組表現(xiàn)為棕黃色的顆粒細(xì)胞顯著增多，皮損VEGF陽(yáng)性程度增加且速度較快，持續(xù)時(shí)間至第5 d。至第7 d天時(shí)，A組VEGF表達(dá)仍處于低水平狀態(tài)，而B組，VEGF有增高趨勢(shì)，但是增高程度、表達(dá)強(qiáng)度均低于C組。

圖1 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在大白兔皮膚組織中的表達(dá)水平

對(duì)皮損愈合率結(jié)果進(jìn)行歸納、統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，C組皮損愈合率最高，A組最低，對(duì)傷后第14 d結(jié)果觀察，C組、A組皮損愈合率分別為（96.29±2.31）、（67.86±1.76）。皮損愈合率組間對(duì)比，有顯著差異性（P＜0.05）。對(duì)不同時(shí)間的組間愈合率數(shù)據(jù)對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組凍傷皮損愈合率（ ±s）

表1 各組凍傷皮損愈合率（ ±s）

注：*P＜0.05組間愈合率比較，#P＜0.05不同時(shí)間點(diǎn)愈合率比較

分組 A B C 3天 5.18±1.49*# 6.67±1.68*# 6.92±1.85*#5天 11.37±1.85*# 15.35±1.75*# 18.20±2.15*#7天 17.68±1.54*# 21.54±2.15*# 27.51±1.93*#14天 67.86±1.76*# 83.46±1.97*# 96.29±2.31*#

3 討 論

目前用于凍傷治療的藥物不多，我國(guó)目前大力提倡中醫(yī)中藥發(fā)展，所以尋找一種常用中藥治療凍傷的想法油然而生。

三七粉是臨床中醫(yī)中一種傳統(tǒng)中藥，該藥物具有溶解血栓、止血、擴(kuò)張血管、活血化瘀及改善微循環(huán)的作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)毫米方格法測(cè)量殘余創(chuàng)面面積，測(cè)算皮膚上皮化率，發(fā)現(xiàn)三七粉外用對(duì)創(chuàng)面的愈合有促進(jìn)作用，它不僅可以加速壞死物質(zhì)清除，還具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。可得出外用三七粉組愈合時(shí)間明顯快于常規(guī)換藥組及對(duì)照組。

VEGF是一種調(diào)控因子，對(duì)血管生成具有一定的調(diào)控作用。VEGF可以對(duì)內(nèi)皮增殖、內(nèi)皮遷移、血管形成等進(jìn)行刺激，從而保證血管的完整性，利于血管正常狀態(tài)的維持。此外，在創(chuàng)面愈合之中，可以將內(nèi)皮因子、毛細(xì)血管數(shù)量作為其指標(biāo)，若數(shù)量呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，則說(shuō)明創(chuàng)面愈合效果好。在本次實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)VEGF測(cè)定，測(cè)定結(jié)果對(duì)三七粉用于創(chuàng)面治療的效果予以客觀證實(shí)，說(shuō)明三七粉可以促進(jìn)創(chuàng)面壞死組織清除，利于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，有效的縮短了創(chuàng)面愈合時(shí)間。

綜上實(shí)驗(yàn)表明，三七粉外敷，對(duì)凍傷皮損壞死組織脫離具有加快效果，且對(duì)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子生成具有促進(jìn)效果，利于凍傷皮損愈合。