鄧平，張立強，周偉東，張生元，喻運珍，余少梅，李 勤

(1. 武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 武漢 430207；2. 武漢中博水產(chǎn)生物技術(shù)有限公司，湖北 武漢 430070)

萼花臂尾輪蟲(Brachionuscalyciflorus)是淡水中常見的輪蟲種類，種群的繁殖力高，內(nèi)稟增長率大，是工廠化培養(yǎng)的首選種類[1]。海水的褶皺臂尾輪蟲己被廣泛用作海產(chǎn)養(yǎng)殖動物幼體的開口餌料，其大規(guī)模培育技術(shù)日趨成熟[2]，而淡水輪蟲的研究在這方面卻遠為遜色。單胞藻因營養(yǎng)豐富，是輪蟲批量培養(yǎng)的首選餌料，但培養(yǎng)需要耗費大量的人力和物力，在一定程度上限制了輪蟲的大規(guī)模培養(yǎng)。因而眾多學(xué)者開展了單胞藻、濃縮藻液、藻粉單獨或共同培育輪蟲技術(shù)的研究[3-5]。關(guān)于藻粉作為輪蟲的食物或營養(yǎng)強化主要用于海水的褶皺臂尾輪蟲和圓型臂尾輪蟲[6-7]，應(yīng)用到淡水輪蟲餌料的還沒見報道。

該研究既考察兩種常用的萼花臂尾輪蟲餌料蛋白核小球藻和斜生柵藻與藻粉搭配對輪蟲種群動態(tài)的差異，又考察已商品化的兩種藻粉小球藻粉和螺旋藻粉對輪蟲種群動態(tài)影響的差異。

1 材料和方法

1.1 輪蟲來源及餌料

萼花臂尾輪蟲系2012年6月采自武漢市農(nóng)科院水產(chǎn)所旁的水庫，實驗室中分離出單個孤雌生殖個體，待種群中形成一定量的休眠卵后，置于4 ℃冰箱避光保存。試驗前將休眠卵萌發(fā)、培養(yǎng)，得到的新個體作為試驗材料。

選用蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidsa)和斜生柵藻(Scedesmusobliquus)作為培養(yǎng)輪蟲的餌料。藻種購自中國科學(xué)院水生生物研究所。兩種藻類均采用SE培養(yǎng)液，12∶12 L/D實驗室條件下培養(yǎng)，光照強度2 000～3 000 lx，培養(yǎng)溫度25 ℃，充氣培養(yǎng)。每7～10 d轉(zhuǎn)接1次。投喂輪蟲的藻液經(jīng)300目的篩絹過濾，以去除藻液中的絮凝。

1.2 試驗方法

該實驗小球藻密度為10×106cells/mL，斜生柵藻密度為4×106cells/mL(80 mg/L)。微藻與藻粉按質(zhì)量比1∶0、4∶1、1∶1、1∶4、0∶1搭配進行實驗。各組食物的濃度均相當(dāng)于干重小球藻10×106cells/mL(80 mg/L)。輪蟲起始密度1 ind./mL，室溫條件下培養(yǎng)。每組設(shè)3個平行。每24 h測定培養(yǎng)液中輪蟲數(shù)量，并更換培養(yǎng)液、投喂餌料。

1.3 統(tǒng)計分析

對不同食物種類搭配條件下的輪蟲種群數(shù)量的動態(tài)變化采用重復(fù)測量的方差分析(repeated measure ANOVA)。蛋白核小球藻與兩種藻粉按4∶1比例搭配條件下的輪蟲種群最大密度、種群增長率的差異采用單t-檢驗(t-test)進行分析(SPSS 19.0，P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 微藻與小球藻粉搭配投喂輪蟲的效果

不同微藻與小球藻粉搭配條件下，輪蟲種群的動態(tài)變化如圖1所示。重復(fù)測量的方差分析結(jié)果表明，蛋白核小球藻與小球藻粉按4∶1比例搭配投喂的輪蟲種群動態(tài)與其他各組差異極具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，培養(yǎng)8～10 d輪蟲種群密度增長明顯，第10 d達到峰值840 ind/mL。單獨用小球藻和1∶1比例搭配投喂輪蟲，輪蟲的種群最大密度差別不大。小球藻與小球藻粉按1∶4比例投喂輪蟲，第5天輪蟲種群密度才開始明顯增長，但種群變動趨勢與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

斜生柵藻與小球藻粉按1∶0、4∶1、1∶1比例搭配投喂輪蟲，輪蟲種群密度增長幅度及達到高峰所經(jīng)歷時間均表現(xiàn)出相同的變化趨勢，在培養(yǎng)8 d后輪蟲種群出現(xiàn)了不規(guī)則波動。斜生柵藻與小球藻粉按1∶4比例搭配投喂輪蟲，第4天輪蟲種群密度才有較明顯增長，但總體變化趨勢與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

單獨用小球藻粉投喂輪蟲，輪蟲種群在少量增長后便開始下降，至第6天死亡。

圖1 微藻和小球藻粉搭配投喂時萼花臂尾輪蟲的種群動態(tài)

2.2 微藻與螺旋藻粉搭配投喂輪蟲的效果

不同微藻與螺旋藻粉搭配條件下，輪蟲種群的動態(tài)變化見圖2。重復(fù)測量的方差分析結(jié)果表明微藻種類和搭配比例對輪蟲種群動態(tài)有顯著作用(P<0.05)。蛋白核小球藻與螺旋藻粉按4∶1比例搭配投喂輪蟲，培養(yǎng)5～10 d輪蟲種群的密度增長極顯著(P<0.01)，第10 d達到峰值800 ind./mL。單獨用小球藻和1∶1比例搭配投喂輪蟲，種群密度在培養(yǎng)3～5 d的快速增長后，種群密度趨于穩(wěn)定狀態(tài)。小球藻與小球藻粉按1∶4比例投喂輪蟲，第5天輪蟲種群密度才開始增長，但總體變化趨勢與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

斜生柵藻與螺旋藻粉按1∶0、4∶1、1∶1比例搭配投喂輪蟲，輪蟲種群動態(tài)有相同的的變化趨勢，在培養(yǎng)7～8 d后輪蟲種群處于波動狀態(tài)。斜生柵藻與螺旋藻粉按1∶4比例投喂輪蟲，第6天輪蟲種群密度才開始增長，但總體變化趨勢與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

單獨用螺旋藻粉投喂輪蟲，輪蟲種群少量增長后在第6天消亡。

圖2 微藻和螺旋藻粉搭配投喂時萼花臂尾輪蟲的種群動態(tài)

2.3 蛋白核小球藻與藻粉搭配對輪蟲最大種群密度和種群增長率的影響

蛋白核小球藻與兩種藻粉按4∶1比例搭配投喂輪蟲，輪蟲的最大種群密度和種群增長率見表1。t檢驗結(jié)果表明，藻粉種類對最大種群密度及種群增長率無統(tǒng)計學(xué)意義差異(P>0.05)。

表1 蛋白核小球藻與藻粉4∶1比例搭配投喂輪蟲的效果

3 討 論

影響輪蟲大規(guī)模培養(yǎng)的限制因素很多，例如餌料、溶氧、pH、鹽度、溫度等，其中餌料是最重要的限制因素，當(dāng)前蛋白核小球藻和斜生柵藻是經(jīng)研究證明適宜培養(yǎng)淡水輪蟲的優(yōu)質(zhì)餌料[8]，但要完全依靠藻類來維持輪蟲的高密度培養(yǎng)難度相當(dāng)大。

已有研究表明小球藻粉和螺旋藻粉具有較高的營養(yǎng)價值。王冉等[9]報道小球藻粉蛋白質(zhì)含量達50%～67%，含動物體所需的20種氨基酸、多種維生素和微量元素，以及亞麻酸、亞油酸、胡蘿卜素等。王方雨等[10]報道螺旋藻粉蛋白質(zhì)含量65%，碳水化合物19%，脂類4%，色素6%，灰分和纖維3%，維生素3%左右。李磊[11]研究發(fā)現(xiàn)小球藻粉和螺旋藻粉作為海水輪蟲的餌料或作為酵母輪蟲的營養(yǎng)強化，均能獲得較好的效果。該試驗結(jié)果表明，微藻與藻粉所組成的混合餌料培養(yǎng)輪蟲有顯著效果；微藻和藻粉的不同配比，輪蟲種群的增長趨勢基本一致。試驗還表明蛋白核小球藻與藻粉按4∶1比例投喂輪蟲，輪蟲的最大種群密度超過單獨用小球藻或斜生柵藻的餌料效果，而兩種藻粉之間無明顯差異。同時，該試驗發(fā)現(xiàn)小球藻粉及螺旋藻粉單獨投喂，輪蟲的培養(yǎng)效果均不理想。這可能與單獨使用藻粉，對培養(yǎng)輪蟲的水質(zhì)產(chǎn)生了一定的影響有關(guān)。

因此，在實際生產(chǎn)中蛋白核小球藻與藻粉按照4∶1的比例混合來培養(yǎng)輪蟲，既可以降低餌料成本，又提高經(jīng)濟效益，可以作為蛋白核小球藻的優(yōu)良替代餌料，這對淡水輪蟲的相關(guān)研究，特別是萼花臂尾輪蟲的規(guī)?；a(chǎn)具有現(xiàn)實意義。